Размер персонального повышающего коэффициента;pdf

Таблица 2
Метрологическая характеристика метода
Метрологические параметры, P = 0,95, n = 5
Анализируемый
объект
ГМФ
Предел обнаружения, мг/кг
Среднее значение
определения, %
Стандартное отклонение, %
Доверительный
интервал
0,01
87,4
3,5
± 3,1
Литература
1. Заикина В. И. Экспертиза меда и способы обнаружения его фальсификации. М.:
Дашков и К, 2006.
2. Тарабанько В. Е. Низкотемпературный синтез 5-гидроксиметилфурфурола // Химия растительного сырья. 2011. №1. С. 87–92.
3. Наливайко П. А., Юрченко Р. А., Винарский В. А., Альшакова И. Д., Поляков
Ю. С., Рыбак Е. А., Определение 5-гидроксиметилфурфурола в образцах меда
хроматографическими методами// Аналитика РБ-2012: Тез. докл. Междунар.
конф. Мн., 2012. С. 10.
4. Наливайко П. А., Юрченко Р. А., Винарский В. А., Шевчук Т. А., Поляков Ю. С.,
Рыбак Е. А., Методы выявления фальсификации меда путем определения содержания
5-гидроксиметилфурфуролада
методами
//
Новые
химикофармацевтические технологии: Тез. докл. Междунар. конф. М., 2012. С. 81.
ИЗУЧЕНИЕ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРЕВРАЩЕНИЙ
ЛИПИДОВ В МОДЕЛЬНЫХ МЕМБРАНАХ В ПРИСУТСТВИИ
ИОНОВ ПЕРЕХОДНЫХ МЕТАЛЛОВ
В. Н. Ольшук, И. Л. Юркова
ВВЕДЕНИЕ
Важными компонентами клетки являются липиды, один из путей их
модификации – свободнорадикальные превращения, индуцированные
активными формами кислорода (АФК) [1, 2]. В биосистемах ионы переходных металлов (Cu2+, Fe2+) способны катализировать образование высоко активных НО˙ радикалов [2]. При взаимодействии АФК с липидами
свободнорадикальные реакции протекают как в их липофильной (пероксидное окисление липидов (ПОЛ)), так и в полярной (свободнорадикальная фрагментация (СРФ)) части [3, 4]. На схеме на примере фосфатидилглицерина (1) приведены реакции окисления с образованием диеновых конъюгатов и гидропероксидов (2) (путь I) и СРФ с образованием
фосфатидной кислоты (ФК) (3) (путь II):
326
O
OC
O
O P O
O
CO
.
I
.
O H -H 2 O
OH
O
O
C OR 1
R 2O
+ O2
+ H
OH
1
II
O
P
H
O
O
.
OH
O
O OH
O
C OR 1
R2O
2
O
P
O
OH + .
LH
OH
L
.
O
OH
O
3
При изучении АФК-опосредованных превращений липидов необходимо учитывать возможность реализации реакций в обеих частях липидного бислоя и их влияния друг на друга, хотя внимание исследователей преимущественно концентрируются на процессе ПОЛ в гидрофобном фрагменте [3, 4]. Целью данной работы было изучение свободнорадикальных превращений липидов в липосомальных мембранах в присутствии ионов меди (II) и железа(II), при этом выбор липидов определялся их способностью подвергаться пероксидному окислению или (и)
свободнорадикальной фрагментации.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
В работе в качестве объектов исследований были использованы следующие липиды: 1,2-димиристоилфосфатидная кислота (ДМФК), 1,2димиристоилфосфатидилхолин (ДМФХ), 1,2-димиристоилфосфати–
дилглицерин (ДМФГ), фосфатидилхолин (ФХ) из яичных желтков и
фосфатидилглицерин (ФГ), полученный из данного ФХ, фосфатидилсерин (ФС)) из мозга быка, гидрогенизированный, 1-пальмитоил-snглицерин (МПГ), 1-монолиноленоил-sn-глицерин (МЛГ). Согласно данным ГЖХ ФХ и ФГ имели следующий ацильный состав: 16:0 (34%), 16:1
(2%), 18:0 (11%), 18:1 (32%), 18:2 (18%), 20:4 (3%). Мультиламеллярные
липосомы (МЛЛ) готовили методом гидратации тонких липидных пленок, инициирование свободнорадикальных процессов осуществляли,
инкубируя
липидные
суспензии
с
редокс-системами
2+
2+
Cu (Fe )/H2O2/(Asc) при 37 °С [4]. Процесс ПОЛ контролировался
спектрофотометрически по определению диеновых конъюгатов (ДК)
при λ = 233 нм (ε = 28000 М-1 см-1) и гидропероксидов липидов (LOOH)
при λ = 358 нм (ε = 2,97·104 моль-1 см-1). Концентрацию фосфатидной
327
кислоты определяли по содержанию неорганического фосфора в молекуле, используя комбинацию ТСХ и фотоколориметрии [5].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Было установлено, что введение различных насыщенных глицерофосфолипидов в МЛЛ из яичного ФХ изменяет скорость процесса ПОЛ,
опосредованного Cu2+/Н2О2 системой. Из исследованных липидов
ДМФХ, ДМФК и ДМФГ, имеющих одинаковую гидрофобную часть,
нейтральный ДМФХ не оказывал существенного действия на ПОЛ (см.
рис. 1). Из отрицательно заряженных липидов ДМФК и ФС значительно
активировали пероксидирование, в то время как ДМФГ замедлял скорость процесса на начальных этапах. Полученные результаты согласуются с литературными данными, согласно которым ФС и ФК оказывали
активирующий эффект на процесс ПОЛ в сравнении с ФГ при использовании водорастворимого азоинициатора [3]. ДМФГ также как ФС и
ДМФК имеет заряд, но его действие на ПОЛ отличается от данных липидов. Отличительной чертой ДМФГ от других исследованных липидов
является то, что он содержит свободную гидроксильную группу в βположении к фосфоэфирной связи и способен подвергаться СРФ с образованием ДМФК [4].
3,5
4
3
-4
[ДК] 10 M
3,0
2,5
5
2
1
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
50 100 150 200 250 300
Время, мин
Рис. 1. Накопление диеновых конъюгатов при окислении ФХ (0,02 М)
в липосомах, термостатированных с Cu2+/H2O2 (1/10 мМ) при 37 °С:
1 – без добавок, в присутствии 25 мол%
2 – ДМФХ, 3 – ФС, 4 – ДМФК, 5 – ДМФГ
Монопальмитоилглицерид, способный также подвергаться СРФ [3],
оказывал антиоксидантное действие на ПОЛ в нейтральных МЛЛ-ФХ,
снижая концентрацию продуктов окисления (ДК и LOOH) почти вдвое,
на рис.2 приведены зависимости для LOOH.
328
M
1
2
[LOOH] 10
-4
2,0
1,8
1,6
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0
20
40 60 80 100 120
Время, мин
Рис. 2. Накопление гидропероксидов липидов при окислении ФХ (0,02 М)
в липосомах, термостатированных с Cu2+/H2O2 (0,5/1 мМ) при 37 °С:
1 – без добавок, 2 – в присутствии 35 мол% МПГ
МПГ оказывал влияние на Fe2+(Cu2+)-опосредованное ПОЛ в отрицательно заряженных модельных мембранах. МПГ снижал скорость процесса на всем исследованном временном промежутке в однокомпонентных ФГ-липосомах и на начальном этапе в ФХ-ФСлипосомах (4:1). Моноацилглицерины (МПГ и МЛГ) оказывали влияние
на протекание Fe2+(Cu2+)-опосредованной СРФ насыщенного ДМФГ и
ненасыщенного ФГ в модельных мембранах. ФК, первичный продукт
фрагментации ФГ, накапливался в меньших количествах (в ~1,5-1,7
раза) в липосомах из фосфатидилглицерина:моноацилглицерина (3:1) в
сравнении с контролем (рис. 3).
1
2
3
100
ФК, %
80
60
40
20
0
60
180
Время, мин.
360
Рис. 3. Влияние моноацилглицеринов (40 мол%)
на свободнорадикальную фрагментацию ФГ (0,02 М),
индуцированную Fe2+/H2O2/Asc (1/10/0,1 мM):
1 – без добавок, в присутствии 2 – МПГ, 3 – МЛГ
329
Так, из исследованных в работе липидов гидроксилсодержащие глицериды оказывали протекторное действие на Fe2+(Cu2+)-опосредованные
процессы пероксидного окисления и свободнорадикальной фрагментации. Механизм такого действия может осуществляться посредством нескольких путей: данные глицериды могут влиять на физические свойства фосфолипидной мембраны, с другой стороны, они являются субстратами СРФ и их полярная часть может служить своеобразным акцептором АФК, образующимися в водной экстернальной фазе.
Литература
1. Postle A. D. Phospholipid lipidomics in health and disease // Eur. J. Lipid Sci. Technol.
2009. Vol. 111. P. 2–13.
2. Halliwell B. Free radicals in biology and medicine : fourth edition / Oxford: University
press. 2007.
3. Schnitzer E., Pinchuk I., Lichtenberg D. Peroxidation of liposomal lipids // Eur. Biophys. J. 2007. Vol. 36. P. 499–515.
4. Юркова И. Л. Свободнорадикальные реакции глицеро- и сфинголипидов // Успехи химии. 2012. Т.81. № 2. С. 175–190.
5. Vaskovsky V. E., Kostetsky E. Y., Vasendin I. M. A universal reagent for phospholipid
analysis // J. Chromat. 1975. Vol. 114. № 1. P. 129–141.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ РАДИОЛИЗ ПЕНТАЭРИТРИТА
В ОБЫЧНОЙ И ДЕЙТЕРИЕВОЙ ВОДЕ
Д. И. Ольшук
ВВЕДЕНИЕ
Пентаэритрит – симметричный четырехатомный спирт. Его широко
применяют для синтеза полиэфиров, в т.ч. алкидных смол, отвердителей
для синтетических смол, в производстве стабилизаторов и антиоксидантов полимеров, например, тетратиогликолята пентаэритрита, тетра-bмеркаптопропионата пентаэритрита. Интерес к радиационной химии
пентаэритрита обусловлен несколькими причинами. Известно, что пентаэритрит применяется в производстве пластификаторов для ПВХ, синтетических смазочных масел, в качестве компонента полиуретановых
красок для получения веществ в текстильной промышленности [1]. Учитывая, что ионизирующее излучение используется в промышленности
для инициирования процессов полимеризации и придания необходимых
свойств смазочным маслам, в медицине для стерилизации, данные, полученные по радиолизу пентаэритрита, представляют определенный практический интерес [1, 2]. С другой стороны, пентаэритрит является интересным объектом для получения информации о процессах, протекающих
при действии ионизирующего излучения на многоатомные спирты, угле330