Работа № 1253;ppt

Отзыв официального оппонента на диссерт ацию Пищелко Анны
Олеговны: МОЛЕКУЛЯР НО -ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ДНК РАЙОНА
ПРИКР ЕПЛЕНИЯ ХР ОМО СОМЫ 2 L К ЯДЕ Р НОЙ ОБОЛОЧКЕ ТР О Ф ОЦИТОВ
ЯИЧНИКОВ МАЛЯРИЙНОГО КОМАРА ANOPHELES BEKLEMISHEVI
(DIP TERA , CULIC IDAE ) по специально сти «Генетика » – 03.02.07
Предст авленная к защите диссертация, выполненная в лаборатории
эволюционной цитогенетики Научно-исследовательского института биологии и биофизики
Томского государственного университета, со стоит из 3 глав и завершает ся
заключением по предст авленной работе и выводами следую щими из неѐ.
Актуально сть темы диссертации, затрагивающей проблемы изучения
структурной организации гетерохроматина и еѐ значение в процессах
видообразования, не вызывает сомнений. Выбор объект а исследован ия:
малярийных комаров рода Anopheles комплекса maculipennis (Diptera,
Сulicidae) выглядит вполне оправданным, вследствии значительной его
изученно сти многочисленными исследователями. Постановка задач в
диссертации предст авляется верной и соответ ствует по ст авленной цели
исследования. Обзор литературы написан хорошим научным языком и
отражает современный уровень исследований структурно -функциональной
организации гетерохроматина. Обширный набор методов цитологии и
молекулярной генетики, используемых Пищелко , дост аточен для выполнения
поставленных задач и изложен исчерпывающе подробно. Результ аты
диссертации А.О. Пищелко изложены в 3 разделах. В первом рассмот рены
полученные данные по особенно стям локализации ДНК района прикрепления
хромосомы 2L An. beklemishevi на хромо сомах видов Diptera, Anopheles и
Drosophila . Во втором предст авлена подробная характеристика
последовательностей ДНК района прикрепления(РП) хромо сомы 2L An.
Beklemishevi, которая была обозначена Abekl2L. В третьем отражена
взаимо связь особен ностей молекулярного со ст ава ДНК РП к ядерной оболочке
участков прицент ромерного гетерохроматина политенных хромо сом комаров
комплекса Anopheles maculipennis с морфологиче ским типом отношения
хромосом к ядерной оболочке . Изложение результ атов автор начинае т с
цитологиче ского описания района хромо сомы 2L An. Beklemishevi, ДНКпоследовательности которого были в дальнейшем выделены и
отсеквенированы. В данном разделе автор ясно показывает недо ст аток
накопленных знаний об этом объекте исследования, что вполне логично
объясняет необходимо сть проведенной работы. Автором получены
высококаче ственные цитологиче ские препараты, на которых методом
гибридизации in situ показаны участки хромосомгомологичные зонду Abekl2L,
что убедительно доказывает присут ствие последовательно стей из РП
хромосомы 2L An. beklemishevi во всех хромосомах исследуемых видов
комплекса maculipennis. Автор продемонстрировал хорошую чувствительно сть
применяемых методов при сравнении сигнала ДНК-зонда Abekl2L на
хромосомах An. beklemishevi и An. atroparvus и An. messeae, что дало ему
о снование обо сновать утверждение, что по следовательно сти из РП хромосомы
2L An. beklemishevi присут ствуют во всех хромосомах исследуемых видов
комплекса maculipennis. К сожалению, обсуждая в данном разделе
гибридизацию ДНК-зонда с хромо сомами An. beklemishevi и An. messeae,
автор забывает указать на номер рисунков, что замедляет понимание текста,
заставляя чит ателя само стоятельно отыскивать н ужный рисунок. В целом же
данный раздел хорошо иллюст рирован и аргументирован. На стр. 68 автор
видимо уп устил слово гетерохроматином в предложении: « У D. melanogaster
хромосомы разобщены и прицентромерным …....
конт актируют с оболочкой
ядра...». Интере сными и новыми предст авляются данные об универсальной
функции по следовательнос тей районо специфичной ДНК из прицентромерного
района хромосомного плеча 2L An. Beklemishevi, которые были обнаружены в
прицентромерных районах хромосом всех трех видов Drosophila .
Молекулярно -генетический анализ районов прикрепления хромосомы 2L An.
beklemishevi позволил потдвердить и интерпретировать данные, полученные
методами цитологии. Этот раздел т акже выполнен на высоком
методологиче ском и техническом уровне. Полученные результ аты грамотно
проанализированы, на их о снове сделаны логичные выводы . Этот раздел
предст авляет собой большой интере с для других исследователей, работающих
в этой области, которые смогут почерпнуть из него обширный ряд данных с
возможно стью использовать их при проведении новых исследований. В данном
разделе можно было бы от метить одно слабое ме сто: ссылка на
неоп убликованные данные Артемова (стр.87). При всем уважении к этому
исследователю ссылка на неоп убликованные данные при защите диссерт ации
мне предст авляет ся преждевременной, хотя и не ст авит под сомнение выводы
автора. В разделе «Заключение » автор подводит итоги проделанной работы, но
зде сь можно отметить некоторую недоговоренно сть и обтекаемо сть фраз,
которые могли бы быть более конкретными и преподне сти чит ателям всю
полученн ую в результ ате проделанной работы обширн у ю и интере сн ую
информацию. Не могу согласиться с формулировкой т акой фразы в заключении
диссертации: «В результ ате нельзя сказать, что РП к ядерной оболочке
хромосомы 2L An. beklemishevi и РП хромо сомы XL An. messeae обладают
какими-то уникальными по следов ательностями, которые обе спечивают
характерный морфологиче ский тип организации хромо сом по отношению к
ядерной оболочке ». Сама форма по строения фразы, когда на о сновании
полученных данных нельзя сказать..., хотя на самом деле и результ ат важен и
интере сен и сказано, то, что вследствие полученных данных нужно было
сказать, но форма подачи информации в этом предложении неудачна. Кроме
этого в выводах указано: «Впервые показана взаимосвязь между
морфологиче ским типом отношения хромо сом к ядерной оболочке и п аттерном
нуклеотидных по следовательно стей РП.» Очевидно, что автор под паттерном
понимает закономерную регулярность встречаемо сти определенных
последовательностей в РП, и резюмирует, что определенный набор
последовательностей РП обнаруживает взаимо связь с морфологиче ским типом
отношения хромо сом к ядерной оболочке, в то время как уникальные
последовательности из РП т акой связи не обнаруживают. Это не такой
очевидный нюанс, чтобы его не оговорить подробно. Хотело сь бы
рекомендовать А.О. Пищелко в будущих раб от ах подобные сложные ме ст а
оговаривать более про странно. В целом диссертация А.О. Пищелко представляет собой
цельное, завершенное молекулярно-генетическое и цитогенетическое исследование района
прикрепления хромо сомы 2L малярийного комара An. beklemishevi и сравнение
его с ДНК районов прикрепления хромо сом уже изученных видов комплекса
maculipennis . Выводы диссертации подводят итоги проведенной большой и
высококачественной работы и хорошо обоснованы. По теме диссертации выполнено 9 работ
из них 2 статьи из списка журналов ВАК:
1. Сайджафарова А.О. (Пищелко А.О.), Артемов Г.Н., Карамышева Т.В., Рубцов Н.Б.,
Стегний В.Н. Молекулярно-цитогенетическое изучение ДНК прицентромерного
гетерохроматина хромосомы 2 малярийных комаров вида Anopheles beklemishevi Stegniy et
Kabanova (Culicidae, Diptera) // Генетика. – 2009. − Т. 45. − № 1. − С. 1−15.
2. Сайджафарова А.О. (Пищелко А.О.), Елисафенко Е..А., Стегний В.Н. Изучение
молекулярного состава прицентромерного гетерохроматина хромосомы 2 малярийных
комаров (Diptera,Culicidae) // Генетика. − 2010. − Т. 46. − № 9. − С. 1307−1311.
Статьи и тезисы в других изданиях
3. Стегний В.Н., Сайджафарова А.О. (Пищелко А.О.), Артемов Г.Н. Молекулярноцитогенетический анализ участков прикрепления хромосом к ядерной оболочке у
малярийных комаров // Цитология. - 2007. - Т. 49. - № 9. - С. 796-797.
4. Стегний В.Н., Артемов Г.Н., Сайджафарова А.О. (Пищелко А.О.), Усов К.Е. Принципы
молекулярно-цитогенетической организации хромосомных локусов, обеспечивающих
трехмерную организацию интерфазного ядра // Цитология. - 2010. - Т. 52. - № 8. - С. 683.
5. Сайджафарова А.О. (Пищелко А.О.), Артемов Г.Н., Карамышева Т.В., Рубцов Н.Б.,
Стегний В.Н. Сравнительный анализ молекулярного состава прицентромерного
гетерохроматина- политенных хромосом малярийных комаров рода Anopheles (CULICIDAE,
DIPTERA) // Вестник Томского государственного университета. Серия Биология. - 2007. - №
1 . - С . 96-106.
6. Сайджафарова А.О. (Пищелко А.О.), Стегний В.Н. Молекулярно-цитогенетическое
изучение ДНК прицентромерного гетерохроматина хромосомы 2 комаров комплекса
ANOPHELES MACULIPENNIS // Материалы международной молодежной научнометодической конференции «Проблемы клеточной и молекулярной биологии». - Томск. 2 0 0 7 . - С . 156.
7. Сайджафарова А.О. (Пищелко А.О.), Елисафенко Е.А., Стегний В.Н. Изучение
молекулярного состава прицентромерного гетерохроматина хромосомы 2 малярийных
комаров (Diptera,Culicidae) // Материалы международной конференции «Хромосома 2009». Новосибирск. - 2009. - С. 153.
8. Сайджафарова А.О. (Пищелко А.О.), Елисафенко Е.А., Стегний В.Н. Молекулярная
структура прицентромерного гетерохроматина хромосом ANOPHELES И Материалы
международной конференции по кариосистематике беспозвоночных животных «Карио V». Новосибирск. - 2010. - С. - 63.
Результаты, проведенной А.О. Пищелко работы, можно рассматривать как серьезный вклад в
изучение организации прицентромерного гетерохроматина у представителей Diptera.
Диссертация А.О. Пищелко удовлетворяет всем требованиям ВАК к кандидатским
диссертациям, а сама Анна Олеговна Пищелко заслуживает присуждения ей ученой степени
кандидата биологических наук.
Научный сотрудник Федерального государственного бюджетного учреждения науки
Института биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина РАН, 152742, Борок, Ярославской
обл., [email protected], доктор биологических наук Андрей Константинович
Гришанин.
08.09.2014
Подпись А.К. Гришанина удост
Вр.и.о. ученого секретаря ИБВ1