;docx

«Наука и образование: новое время» № 1, 2014
Слюсарев Алексей Аркадьевич,
канд. мед. наук, доцент,
Донецкий национальный медицинский университет
им. М. Горького;
Ракша-Слюсарева Елена Анатольевна,
доктор биол. наук, профессор,
Донецкий национальный университет
экономики и торговли
имени Михаила Туган-Барановського,
г. Донецк, Украина
ИММУНОКОРРЕГИРУЮЩИЙ ЭФФЕКТ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ
САХАРНОГО ДИАБЕТА С ПРИМЕНЕНИЕМ ТРАНСПЛАНТАЦИИ
КУЛЬТУР ФЕТАЛЬНЫХ ТКАНЕЙ
Одним из современных методов лечения сахарного диабета является
трансплантация инсулинпродуцирующих клеток [1, с. 3-6; 2, с. 3-43].
Эффективность лечения сахарного диабета повышается благодаря включению
трансплантации культур фетальных тканей поджелудочной железы в комплекс
терапии [1, с. 3-6; 2, с. 35-43; 3, с. 178]. Дальнейшие поиски улучшений эффектов
этого способа лечения сахарного диабета связаны с разработкой методов до и
после операционного ведения больных с целью продления срока
функционирования трансплантата в организме реципиента.
Цель работы – исследование клинико-лабораторных эффектов, в частности
изучение популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов
периферической крови у больных сахарным диабетом в динамике наблюдения в
течение 1-6 лет после трансплантации культур фетальных тканей поджелудочной
железы при различных способах введения трансплантата.
Материалы и методы: Клинические наблюдения и клинико-лабораторные
исследования проводились у 72 больных сахарным диабетом в возрасте от 11 до 56
лет. Из них 56 человек имели лабильное течение заболевания средней тяжести и
тяжелую форму сахарного диабета, осложненную микроангио- и
полиневропатиями, а у 7 пациентов и ретинопатией. Срок заболевания составлял
от 2 месяцев до 17 лет.
Наследственная предрасположенность к заболеванию сахарным диабетом
зарегистрирована у 15 больных. Суточная доза вводимого инсулина составляла от
28 до 84 единиц при 3-4-х кратном введении. Предыдущее лечение не позволяло
стабилизировать уровень гликемии, несмотря на различные комбинации
различных видов инсулина. У некоторых пациентов колебание сахара в крови
составляло от 3 до 30 ммоль/л в течение суток. У 12 больных регистрировались
проявления кетоацидоза. Предварительно проведенные исследования показали,
что у больных сахарным диабетом – жителей Донецкого региона, выявлены
изменения в системе иммунитета, характеризующиеся как состояние
комбинированной иммунной недостаточности.
Больным проводилась комплексная терапия, в которой использовалась
трансплантация культур фетальных тканей поджелудочной железы. 33 больным (I
группа) трансплантация культур тканей поджелудочной железы выполнялась в
прямую мышцу живота под местным обезболиванием с помощью инъекции [4, с.
25-30; 5, с. 317-331]. У 39 больных (II группа ) трансплантат вводился в
сформированную капсулу в большой сальник по собственному методу [6, с. 154; 7,
с. 149]. Для этого из небольшого разреза (3-4 см) по средней линии живота над
пупком раскрывалась брюшная полость и выводилась прядь сальника, которая
фиксировалось к париетальной брюшине. Непрерывным атравматическим швом из
выведенной пряди сальника формировалась капсула, в полость которой вводился
полихлорвиниловый дренаж. Капсула находилась под апоневрозом или в
www.articulus-info.ru
«Наука и образование: новое время» № 1, 2014
подкожно-жировой клетчатке. Дренаж выводился наружу. На следующие сутки
через него в просвет капсулы вводилась культура ткани поджелудочной железы.
Дренаж извлекали на 3-5 сутки, швы снимали на 5-7 сутки. У всех больных раны
зажили первичным натяжением, осложнений в послеоперационном периоде не
наблюдалось.
Для трансплантации использовались флотирующего органоспецифические
культуры ткани поджелудочной железы, подготовленные по методике,
разработанной в НИИ трансплантологии и искусственных органов (Москва).
Специфичность культур проверялась гистологически после окрашивания
гематоксилин-эозином, активность – радиоимунным методом с помощью
определения концентрации инсулина в культуральной жидкости.
В комплексе лечения больных использовалась коррекция углеводного обмена
(комбинирование простого и продленного инсулина), дезинтоксикационная
терапия, с использованием энтеросорбентов. У больных в динамике наблюдения
изучали и анализировали клиническое состояние по данным самочувствия и
клинического осмотра, лейкограму периферической крови, уровень сахара крови и
мочи, АЛТ, АСТ, гликозилированного гемоглобина. Также изучали содержание
основных популяций и субпопуляций лимфоцитов периферической крови методом
непрямой имунофлюоресценциии по собственному методу [8, с. 137]. В
исследованиях использовали отечественную панель моноклональных антител
(МКАТ) для регистрации экспрессии антигенных рецепторов мембранами
мононуклеаров, аналогичных СD 3+, CD 4+, CD 8+, CD 22+ производства
Института экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р.Е.
Кавецкого НАН Украины. Как вторичные антитела использовались FITC –
конъюговани F (ab ') – фрагменты козьих антител против иммуноглобулинов
мыши «Sigma» (США). Для идентификации антигена в ядрах клеток перед
нанесением МКАТ, выделенные лимфоциты обработаны в течение 5 минут
раствором параформальдегида, а затем 0,2% раствором тритона Х-100 «Sigma»
(США).
Полученные результаты исследований обработаны методами вариационной
статистики и ранговой корреляции с использованием PCИ. Были использованы
программы «Statistica Window» и пакет соответствующих программ измерений.
Результаты и обсуждение После трансплантации на 10-14 сутки у больных
обеих групп нормализовались показатели глазного дна, психосоматическое
состояние, снижены проявления микроангио- и полиневропатий, повысилась
подвижность. Больные обеих групп в равной степени меньше жаловались на
усталость, боли в нижних конечностях, стали позволять себе погрешности в диете,
что не давало срыва компенсации процесса восстановления. В этот же период
отмечалась стабилизация показателей углеводного обмена Уровень сахара крови
снизился в первой и второй группах соответственно с 19,57 ± 3,24 ммоль/л и 18,96
± 2.43 ммоль/л до 11,45 ± 0,37 ммоль/л и 10,12 +0,1 ммоль/л. Зарегистрировано
снижение гликозилированного гемоглобина в I и II группах, соответственно с 14,71
± 0,35 и 15,38 ± 0,67 до 11,25 ± 0,37 и 10,15 ± 0,45. На 16-20 сутки после операции:
стабилизировался уровень сахара крови на фоне снижения суточной дозы
экзогенного инсулина на 30-60%. К концу 1 месяца после трансплантации
большинство больных в обеих группах удалось перевести на 1-2 кратное введение
инсулина в комбинации инсулина продленного и простого типа действия. На этот
же период после трансплантации у больных с ретинопатией рассасывались
кровоизлияния на глазном дне, повышалась острота зрения.
Контрольные обследования, которые проводились через 1, 3, 6, 9 и 12 месяцев
после трансплантации показали устойчивую стабилизацию заболевания у всех
пациентов. 24 пациента находились под наблюдением более 6-8 лет (сроки
наблюдения).
www.articulus-info.ru
«Наука и образование: новое время» № 1, 2014
В обеих группах более выраженный и длительный эффект трансплантации
наблюдался у лиц с легкой и средней степенью тяжести болезни, по сравнению с
ее тяжелым течением. У больных обеих групп (І и ІІ) самочувствие и показатели
клинико-лабораторных исследований после трансплантации улучшались в течение
первого года наблюдения одинаково хорошо и почти не отличались, за
исключением динамики содержания основных популяций лимфоцитов Т-звена
иммунитета.
Положительные
клинические
эффекты
трансплантации
регистрировались дольше, чем положительные изменения показателей состояния
иммунитета. В отдаленные сроки мониторинга больных были выявлены более
выраженные различия в показателях состояния системы иммунитета, в
зависимости от способа введения трансплантата ((І и ІІ группах).
После трансплантации наблюдалась коррекция дисбаланса основных
популяций и субпопуляций лимфоцитов, которая была зарегистрирована до
пересадки культур. Во всех случаях наблюдался корректирующий эффект
трансплантации, в первую очередь показателей Т-звена иммунитета. Отмечалась
тенденция к нормализации или нормализация содержания популяций и
субпопуляций лимфоцитов с экспрессией антигенных рецепторов CD 3 +, CD4 +,
CD8 +, CD22 +.
Более выраженная коррекция популяционного и субпопуляционного
дисбаланса зарегистрирована во II группе больных. Отличным было то, что через 2
недели после трансплантации у больных I группы средний уровень содержания
популяции Т (СD3+), и субпопуляции Т-хелперов (CD4+) повышался достоверно и
значительно выше нормы. Но через 5 месяцев и до 1 года наблюдения уровень
содержания популяций лимфоцитов I группы был почти таким же, как во II группе
и в дальнейшем достоверно не отличался. Почти до 1 года наблюдалась тенденция
к восстановлению или нормализации содержания популяций и субпопуляций
лимфоцитов СD3+, CD4+, CD8+, CD22+. При этом изменения содержания
популяций и субпопуляций лимфоцитов напоминали волнообразную кривую с
подъемами и падениями.
В зависимости от пути введения, динамика содержания и содержание
популяций и субпопуляций лимфоцитов периферической крови различались. Так,
в I группе больных до 2-4 года регистрировалась тенденция увеличения
содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов, которое, однако, было ниже
показателей нормы. На срок 5-6 лет после операции содержание
иммунокомпетентных клеток крови, которые определялись, имело тенденцию к
снижению, но оставалось на уровне более высоком, чем исходный, за
исключением субпопуляции лимфоцитов с экспрессией антигенов, аналогичных
СD8+.
В группе больных, которым трансплантат вводили в капсулу из брюшины (II
группа) наблюдалось повышение содержания популяций и субпопуляций
лимфоцитов до уровня нормы, или выраженная тенденция к этому в течение года
после трансплантации. В срок 2-4 года у части больных отмечалась тенденция к
снижению или снижение содержания иммунокомпетентных клеток, популяций
лимфоцитов СD3+, CD4+, CD8+, CD22+.
Таким образом, в обеих группах больных более выраженный и длительный
эффект трансплантации культур фетальных тканей поджелудочной железы
наблюдался при введении трансплантата в капсулу, по сравнению с введением его
в прямую мышцу живота, что дает возможность продлить функционирование
трансплантата, отражением чего, очевидно, является более длительное сохранение
нормализованного содержания основных популяций и субпопуляций клеточного
звена иммунитета.
www.articulus-info.ru
«Наука и образование: новое время» № 1, 2014
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Турчин І.С. Проблеми трансплантації культур клітин і тканин залоз внутрішньої секреції
хворим з різними формами ендокринопатії // Ендокринол. – 1996. – Т. 1, № 2, – С. 6-13.
2. Шумаков В.И. Двадцатилетний опыт разработки Проблемы клинической трансплантации
островковых клеток поджелудочной железы больным сахарным диабетом: гипотезы, новые
перспективы / В.И. Шумаков и другие // Трансплантология и искусственные органы. – 1998. – №
2 – 3. – С. 35-43.
3. Гринцов А.Г. Клинические эффекты различных способов трансплантации культур тканей
поджелудочной железы в комплексном лечении больных сахарным диабетом /А.Г. Гринцов // IV
Всероссийский съезд трансплантологов, 9-10 ноября 2008 г., г. Москва : тезисы. – Москва: Мин.
здравоохранения и соц. Развития РФ, РАМН, ФГУ НИИ трансплантологии и искусственных
органов ООО «ДоМира», 2008. – С. 178.
4. Шумаков В.И. Трансплантация культуры островковых клеток поджелудочной железы
больным сахарным диабетом / В.И. Шумаков и другие // Пробл. Эндокринол. – 1981. – № 1. – С.
25-30.
5. Шумаков В.И. Трансплантация островковых и других эндокринных клеток / В.И. Шумаков,
Н.Н. Скалецкий // Трансплантология. Руководство / под ред. В.И. Шумакова. – Москва:
Медицина; Тула: Репроникс Лтд, 1995. – С. 317-331.
6. Алексєєнко О.О., Гринцов О.Г. Слюсарев О.А. Спосіб трансплатації культури клітин Патент
на винахід, UA Україна № 15431А Україна, МКВ А61В17/00. – Заявка № 93111377 від 24.02.93. –
Опубл. 30.06.97. – Бюл. № 3. – С. 154.
7. Алексєєнко О.О., Слюсарев О.А. Спосіб трансплантації культури клітин Патент на винахід
UA Україна, № 19976А, МКБ А61В17/00. – Заявка № 94023067 від. 02.02.94. Бюл. № 6. – С. 149.
8. Слюсарев О.А., Ракша-Слюсарева О.А., Квасніков А.А. Спосіб визначення популяцій та
субпопуляцій лімфоцитів. Патент на винахід UA Україна, № 17261 МПК (2006), А61 В 5/15. –
Заявка u 200603415 від 29.03.06. Бюл. – № 9. – С. 137.
www.articulus-info.ru