ТИМОЛОВАЯ ПРОБА Кат. №: 031.001 – 1000 мл Набор реагентов для постановки тимоловой пробы, позволяющей оценить устойчивость белков в сыворотке крови турбидиметрическим методом. Согласно стандартной процедуре анализа набор рассчитан на 330 определений. ПРИНЦИП МЕТОДА При взаимодействии сыворотки крови с тимолом в трисмалеатном буфере (рН 7,55) возникает помутнение, обусловленное образованием глобулино-тимоло-липидного комплекса. Интенсивность помутнения, которая зависит от количества и соотношения отдельных белковых фракций, измеряется турбидиметрически при длине волны 650 (630-690) нм. Результаты измерений выражаются в единицах помутнения по Shank-Hoagland (ед. S-H). ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ Сыворотка крови без следов гемолиза. Количество определений зависит от характеристик используемого анализатора и минимального рабочего объема кюветы. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА 1. Построение калибровочного графика: ПРОБИРКА №: РАБОЧИЙ Р-Р СЕРНОЙ К-ТЫ, МЛ КАЛИБРОВОЧН. СУСПЕНЗИЯ СУЛЬФАТА БАРИЯ, МЛ ЕДИНИЦЫ ПОМУТНЕНИЯ, ЕД S-H 1 4.5 1.5 1.0 2 3.0 3.0 - 3 1.5 4.5 - 4 - 6.0 0.05 Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать в течение 30 минут при +18-25°С. Непосредственно перед измерением содержимое пробирок еще раз перемешать и измерить величину оптической плотности при длине волны 650 (630-690) нм в кювете с длиной оптического пути 1 см против холостой пробы (рабочего раствора серной кислоты). 2. Стандартная постановка тимоловой пробы: ВНЕСИТЕ В ПРОБИРКУ: СОСТАВ НАБОРА Реагент №1. Концентрированный раствор тимола (21 мл). Реагент №2. 2,5 моль/л серная кислота (11 мл). Реагент №3. 48 ммоль/л барий хлористый (5 мл). ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К ПРОЦЕДУРЕ АНАЛИЗА И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ Тимоловый реактив: В мерную колбу на 1000 мл налить примерно 900 мл дистиллированной воды и, при постоянном перемешивании, пипеткой постепенно добавить 20 мл реагента №1, при этом наконечник дозатора должен быть погружен в воду в колбе. Раствор довести дистиллированной водой до метки и тщательно перемешать. Готовый тимоловый реактив стабилен в течение 3 месяцев при комнатной температуре в плотно закрытой посуде. При появлении осадка профильтровать через бумажный фильтр. Рабочий раствор серной кислоты: В мерную колбу на 250 мл налить 200 мл дистиллированной воды и, при постоянном перемешивании, пипеткой постепенно добавить 10 мл реагента №2. Долить до метки дистиллированной водой и перемешать. Перед применением реагент должен быть охлаждён до +10°С. Калибровочная суспензия сульфата бария: В мерную колбу на 50 мл налить примерно 40 мл охлаждённого до +10°С рабочего раствора серной кислоты и, при постоянном перемешивании, пипеткой постепенно добавить 1,5 мл реагента №3. При указанной температуре размеры частиц преципитированного сульфата бария дают относительно стабильный результат. Раствор довести охлаждённым рабочим раствором серной кислоты до метки и тщательно перемешивать. Калибровочную суспензию сульфата бария необходимо готовить непосредственно перед анализом, хранению не подлежит. Невскрытые реагенты стабильны не менее 24 месяцев при температуре 18-25°С. Срок годности, серия и номер набора по каталогу указаны на упаковке. Тщательно закрывайте флаконы с реагентами после каждого использования! ОПЫТНАЯ ПРОБА ХОЛОСТАЯ ПРОБА БЛАНК ПРОБЫ (для липемичных сывороток) 0.05 Сыворотка, мл 0.05 - Тимоловый реактив, мл 3.0 3.0 - - 0.05 3.0 Физ. раствор, мл Тщательно перемешать и инкубировать в течение 30 минут при 18-25°С. Непосредственно перед измерением содержимое пробирок еще раз перемешать и измерить величину оптической плотности при длине волны 650 (630-690) нм в кювете с длиной оптического пути 1 см против холостой пробы. Если используется липемичная сыворотка, то в качестве холостой пробы (бланк пробы) используют пробу, содержащую 0,05 мл сыворотки и 3 мл физиологического раствора. Объёмы опытных проб и реагентов могут быть пропорционально изменены, соблюдая соотношение образец/ реагент - 1:60. РАСЧЕТ Величину помутнения определить по калибровочному графику, где по оси абсцисс откладывают полученные значения оптических плотностей, по оси ординат – соответствующие значения единиц помутнения. При получении значений помутнения выше 20 ед. S-H, анализируемый образец необходимо развести физраствором в соотношении 1:1, повторить анализ и полученный результат умножить на 2. НОРМАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ 0 – 4 ед. S-H. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин. ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ: Для приготовления тимолового реактива и для постановки пробы использовать чистую посуду без следов синтетических моющих средств, т.к. они препятствуют развитию преципитата. ! АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Линейность – 20 ед. S-H. Коэффициент вариации - не более 8%. ЛИТЕРАТУРА Mac Lagan N.F.: Brit. J. Exper. Path. 23, 234 (1944). Reinhold J.G.: Clin.Chem. 8, 475 (1962). 64