Автореферат

На правах рукописи
БУЛГАКОВА Ирина Викторовна
ВОВЛЕЧЕННОСТЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ СИГНАЛЬНОГО КАСКАДА
АРИЛГИДРОКАРБОНОВОГО РЕЦЕПТОРА И БИОТРАНСФОРМАЦИИ
КСЕНОБИОТИКОВ В РАЗВИТИЕ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ И ЕЕ
ОСЛОЖНЕНИЙ
03.02.07 - генетика
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Белгород - 2014
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном
учреждении
высшего
профессионального
образования
«Курский
государственный медицинский университет» Минздрава России.
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор
Полоников Алексей Валерьевич
Официальные оппоненты:
Зинченко Рена Абульфазовна
доктор медицинских наук, профессор, ФГБУ Медико-генетический
научный центр РАМН, руководитель лаборатории генетической
эпидемиологии
Асанов Алий Юрьевич
доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО Первый
Московский государственный медицинский университет им. И.М.
Сеченова Минздрава России, заведующий кафедрой медицинской
генетики
Ведущая организация:
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский
кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрава
России
Защита диссертации состоится «13» ноября 2014 года в 12.00 часов
на заседании совета по защите диссертаций на соискание ученой степени
кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 212.015.13 при
ФГАОУ
ВПО
«Белгородский
государственный
национальный
исследовательский университет», по адресу: 308015, г. Белгород, ул. Победы,
85.
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГАОУ ВПО
«Белгородский
государственный
национальный
исследовательский
университет» Минобрнауки России и на сайте: www.bsu.edu.ru.
Автореферат разослан «__» _______________2014 года
Ученый секретарь совета
по защите диссертаций на соискание учѐной степени кандидата наук,
на соискание учѐной степени доктора наук Д 212.015.13,
доктор биологических наук
В.И. Кочкаров
2
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы. Артериальная гипертония – самое
распространенное в мире сердечно-сосудистое заболевание, актуальность
которого определяется высоким уровнем его заболеваемости и смертности, а
также отсутствием на сегодняшний день эффективных методов лечения и
профилактики патологии в масштабах популяции. Распространенность АГ в
России по данным научно-исследовательского центра профилактической
медицины РФ, составляет 40% среди взрослого населения. Вклад АГ в
смертность лиц среднего возраста от ССЗ составляет 40%, а в смертность от
мозгового инсульта от 70 до 80% [Глотов A.C., Баранов В.С., 2007; Агеев Ф.Т.,
2004; Шальнова С.А., 1999].
Гипертоническая болезнь (ГБ) – наиболее распространенная форма
артериальных гипертензий, в настоящее время рассматривается как
мультифакториальное заболевание (МФЗ), в основе развития которого лежат
полигенные генетические механизмы, обуславливающие высокую активность
прессорных механизмов длительного действия и определяющие стойкое
хроническое повышение уровня систолического и/или диастолического
артериального давления (АД). Полиэтиологичность заболевания связана с
вовлеченностью в его этиопатогенез большого числа факторов риска, как
средовых, так и генетических [Алмазов В. А., Шварц Е. И., 2000; Corizzato M.,
Sega R., 2005; Qi Y, Niu W., 2008].
В последние годы научно-медицинское сообщество все больше получает
доказательств того, что на роль ведущей причины прогрессирующего роста
заболеваемости ГБ могут претендовать экологические факторы, а именно
существенное нарастающие химическое загрязнение окружающей среды [Brook
et al., 2009; Dong et al., 2013; Foraster et al., 2014]. Эколого-эпидемиологические
исследования свидетельствуют о прямой зависимости заболеваемости ГБ от
уровня химического загрязнения окружающей среды и, в первую очередь
атмосферного воздуха. Тем не менее, на сегодняшний день фактически не
изучены и, по-прежнему, остаются без должного внимания исследователей
эколого-генетические аспекты этиопатогенеза ГБ [Urch et al., 2005; Sun et al.,
2008; Brook et al., 2009; Dong et al., 2013; Foraster et al., 2014]. В условиях
современной техногенной цивилизации наиболее существенный вклад в
формирование предрасположенности к социально значимым болезням
человека, включая ГБ, могут вносить гены ферментов биотрансформации
ксенобиотиков (ФБК) [Полоников А.В. с соавт., 2008]. Учитывая факт того, что
контроль и регуляция экспрессии генов ФБК осуществляется посредством
целого каскада взаимосвязанных сигнальных реакций, инициируемых
арилгидрокарбоновым рецептором (КАГР) [Okey A.B., 1994; Hahn M.E., 2009],
гены КАГР могут также могут вносить свой вклад в предрасположенность к
гипертонической болезни. Однако до настоящего времени исследований
вовлеченности генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и
индуцируемых им генов биотрансформации ксенобиотиков при ГБ не
проводилось, ни в России, ни за рубежом.
3
Цель: Провести анализ вовлеченности генов сигнального каскада
арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков в
формирование предрасположенности к гипертонической болезни и ее
осложнениям.
Задачи:
1. Изучить частоты аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и
ФБК, таких как AHR (R554K), ARNT (C189G), AHRR (P185A), CYP1A1 (I462V),
CYP1A2 (154C>A), CYP1B1 (V432L) и NQO1 (P187S) в популяции русских
жителей Центральной России.
2. Исследовать ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов
КАГР и ФБК с риском развития ГБ в анализируемой популяции, в том числе с
учетом пола и возраста манифестации заболевания.
3. Изучить взаимодействия между генами КАГР и ФБК, а также известными
генами кандидатами ГБ и дать оценку их совместной вовлеченности в
формирование наследственной предрасположенности к заболеванию.
4. Провести оценку гаметических корреляций между полиморфными
вариантами генов КАГР и ФБК и определить паттерны аллельных сочетаний у
больных ГБ и здоровых индивидов.
5. Исследовать
генно-средовые
взаимодействия,
детерминирующие
предрасположенность к ГБ, посредством совместной оценки полиморфизмов
генов КАГР и ФБК и курения.
6. Изучить связи полиморфизма генов КАГР и ФБК с особенностями
клинического течения ГБ и развитием осложнений.
Новизна исследования. Впервые проведен комплексный анализ
ассоциации полиморфизма генов сигнального каскада арилгидрокарбонового
рецептора AHR (R554K), ARNT (C189G), AHRR (P185A) совместно с
ферментами биотрансформации ксенобиотиков CYP1A1 (I462V), CYP1A2
(154C>A), CYP1B1 (V432L) и NQO1 (P187S) с риском развития
гипертонической болезни и развивающихся на ее фоне осложнений. Впервые
установлены пол-специфические эффекты полиморфных вариантов генов
КАГР и ФБК в отношении предрасположенности к ГБ. Впервые показаны
различия во взаимосвязях генов КАГР и ФБК с риском развития ГБ в
зависимости от возраста дебюта заболевания. Впервые охарактеризованы
взаимодействия между полиморфными вариантами генов КАГР и ФБК,
составляющие генетическую основу предрасположенности к гипертонической
болезни.
Научно-практическое значение. Полученные в ходе исследования
результаты расширяют представления о эколого-токсикогенетической природе
гипертонической болезни и создают основу для дальнейших исследований
этологии и патогенеза заболевания и разработки методов молекулярной
диагностики, лечения и профилактики патологии. Полученные результаты
могут быть востребованы в практической деятельности врачей врачейгенетиков, терапевтов, кардиологов и неврологов для оценки риска развития ГБ
4
и ее осложнений задолго до их клинической манифестации. Такой подход
позволит формировать группы риска развития болезни и проводить среди них
превентивные мероприятия, направленные на предупреждение риска развития
ГБ и улучшения качества жизни людей. Результаты исследования могут
использоваться при чтении специальных курсов по медицинской и клинической
генетике, биохимии, патофизиологии, кардиологии и внутренних болезней в
медицинских вузах и на курсах повышения квалификации медицинских
работников.
Апробация работы. Материалы диссертационного исследования
доложены на XXIII Всероссийской конференции обучающихся «Национальное
достояние России» (Москва, 2008), 74-й межвузовской итоговой научной
конференции студентов и молодых ученых: Молодежная наука и
современность (Курск, 2009), 75-й Всероссийской научной конференции
студентов и молодых ученых с международным участием: Молодежная наука и
современность (Курск, 2010), конференции Европейского общества генетиков ESHG (Амстердам, 2011), Российском конгрессе с международным участием:
«Молекулярные основы клинической медицины – возможное и реальное»
(Санкт-Петербург, 2012), 78-й Всероссийской научной конференции студентов
и молодых учѐных с международным участием «Молодѐжная наука и
современность» посвящѐнная 78-летию КГМУ и 80-летию со дня рождения
члена-корреспондента РАМН, профессора А.В. Завьялова (Курск, 2012), V
Международной научно-практической конференции: «Актуальные проблемы
биологии, нанотехнологий и медицины»
(Ростов-на-Дону, 2013), IX
Международной научно-практической конференции: «Актуальные проблемы
современных наук» (Прага, 2013), VII международной научной конференции
молодых ученых-медиков (Курск, 2013), XVIII заочной научной конференции
Research Journal of International Studies (Екатеринбург, 2013), Международной
научно-практической конференции «Перспективы развития науки» (Уфа, 2014),
Международной заочной научно-практической конференции «Наука,
образование, общество: проблемы и перспективы развития» (Тамбов, 2014 г.).
Личный вклад автора. Диссертантом проанализированы отечественные и
зарубежные источники по теме диссертационного исследования, с
использованием которых был подготовлен литературный обзор. Диссертант
лично участвовала в сборе дополнительного клинического и биологического
материалов, обследовании больных ГБ, а также в анкетировании 220 пациентов
в период с 2011-2012. Диссертантом лично проведено выделение ДНК у
пациентов и проведено генотипирование 7 полиморфизмов генов КАГР и ФБК
на выборке 1151 человек. Автор принимал непосредственное участие в
статистической обработке полученных данных и интерпретации и описании
результатов исследования. Диссертант подготовила основные публикации по
теме выполненной работы и участвовала в апробации внедрении результатов
исследования.
Публикации. По материалам диссертации опубликована 21 печатная
работа, из которых 8 в журналах из списка ВАК.
5
Положения, выносимые на защиту:
1.
Гены сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и
сопряженные с ними гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков
являются частью токсико-генетической компоненты предрасположенности к
гипертонической болезни.
2.
Влияния полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК на риск
развития гипертонической болезни характеризуются возрастными различиями в
дебюте заболевания, а также пол-специфическими эффектами полиморфизмов
на подверженность болезни у мужчин и женщин.
3.
Полиморфизмы генов КАГР и ФБК не оказывают существенного
влияния на клиническое течение гипертонической болезни, однако связаны с
риском развития мозгового инсульта и гипертрофии миокарда левого
желудочка сердца.
4.
Полиморфные варианты генов КАГР и ФБК взаимодействуют с
известными генами-кандидатами гипертонической болезни, что отражает их
совместную вовлеченность в молекулярные звенья патогенеза заболевания.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения,
обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав результатов
собственных исследований, заключения в виде обсуждения полученных
результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и
приложения. Работа изложена на 168 страницах машинописного текста,
содержит 28 таблиц и 7 рисунков. Библиографический список используемой
литературы включает 375 источников, из которых 296 зарубежные.
Материалы и методы исследования
Общая характеристика выборки
Объектом для данного исследования послужила выборка неродственных
индивидов русской национальности, проживающих на территории ЦентральноЧерноземного региона России (преимущественно Курской области). В
исследование было вовлечено 1151 человек. Всего было обследовано 602
больных гипертонической болезнью, в том числе 125 человек, перенесших
ишемический инсульт, а также 549 относительно здоровых лиц с нормальным
АД. Критериями отбора пациентов в исследуемые группы были: отсутствие
родства между индивидами и русская национальность и проживание на
территории ЦЧР. Формирование групп больных ГБ проводилось на базах
профильных кардиологических и неврологических отделений областной
клинической больницы и больницы скорой медицинской помощи в периоды
2003-2004, 2008-2009 и 2011-2012 гг. Включение пациентов в группу больных
ГБ осуществлялось только после установления клинического диагноза
заболевания,
подтвержденного
клиническими
и
лабораторноинструментальными
методами
обследования.
Контрольная
выборка
относительно здоровых лиц формировалась, как из здоровых добровольцев,
пациентов травматологического, отоларингологического, хирургических
6
отделений областной клинической больницы, так и при массовых
обследованиях населения во время профосмотров на промышленных
предприятиях, экспедиций в образовательных и других учреждениях г. Курска
и Курской области. Критериями включения индивидов в контрольную группу
были: нормальный уровень артериального давления и отсутствие хронических
заболеваний. Группа больных ГБ соответствовала контрольной группе, как по
полу, так и по возрасту (p>0.05). Данные распределения представлены в
таблице 1. У всех пациентов проводилось клинико-генеалогическое
исследование семейного анамнеза и анкетирование с целью оценки факторов
риска развития болезни (образ жизни, наличие вредных привычек, особенности
питания и др.).
Таблица 1
Распределение обследованных групп по полу и возрасту
Группа больных ГБ (n=602)
ср. возраст
пол, n
Контрольная группа
(n=549)
ср. возраст
пол, n
X±
М
Ж
X±
М
Ж
55,6±12,3
352
250
55,5±11,7
332
217
р-уровень
р-уровень
значимости
значимости
по возрасту
по полу
0,2
0,5
Молекулярно-генетические методы
Для проведения молекулярно-генетических исследований у всех
обследуемых за период с 2011 по 2012 гг. проводился забор венозной крови. В
работе также использовались образцы ДНК биобанка кафедры биологии,
медицинской генетики и экологии КГМУ, полученные от больных ГБ и
здоровых индивидов за периоды обследования 2003-2004 и 2008-2009 гг.
В рамках исследования проводилось генотипирование 7 полиморфизмов
(SNP-маркеров) генов КАГР и ФБК: AHR (R554K, rs2066853), ARNT (V189V,
rs2228099), AHRR (P185A, rs2292596), CYP1A1 (I462V, rs1048943), CYP1A2
(154C>A, rs762551), CYP1B1 (V432L, rs1056836) и NQO1 (P187S, rs1800566).
Для изучения межгенных взаимодействий дополнительно использовались
результаты генотипирования различных генов-кандидатов ГБ, выполненного в
генетической лаборатории кафедры биологии, медицинской генетики и
экологии КГМУ в рамках ранее проведенных исследований [Полоников А.В.,
2006; Солодилова М.А., 2010]: AGT (M235T, rs699), AGT (T174M, rs4762),
AGTR1 (1166A/C, rs5186), ACE (I/D, rs4340), NOS3 (E298D, rs1799983), NOS3
(-786T>C, rs2070744), GNB3 (G814A/G272S, rs5442), GNB3 (C825T, rs5443),
MPO (-463G>A, rs2333227), GSTM1 (+/del), GSTT1 (+/del) и GSTP1 (I105V,
rs1695), CAT1 (-262C/T, rs1001179) ADD1 (G460W, rs4961), TGFB1 (R25P,
rs1800471).
Генотипирование ДНК-маркеров генов КАГР и ФБК осуществлялось
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени на
амплификаторе CFX-96 (Bio-Rad) с использованием прамеров и зондов,
7
синтезированных ООО «Синтол». Генотипирование полиморфизмов КАГР и
ФБК проводилось методом дискриминации аллелей с использованием TaqManзондов и программного обеспечения – Standard Edition Version 2.0 (Bio-Rad).
Проводился контроль качества генотипирования около 5% образцов по
каждому полиморфизму, результаты которого на 100% соответствовали
изначальным данным генотипирования.
Генетико-статистические методы
Статистическая обработка данных проводилась на персональном
компьютере с использованием пакета прикладных программ STATISTICA for
Windows v8.0 (StatSoft Inc., США) и MS Excel 2007. Оценка соответствия
распределений генотипов ожидаемым значениям при равновесии ХардиВайнберга (РХВ) и сравнение распределений частот генотипов и аллелей в
выборках больных и здоровых осуществлялась с использованием критерия 2
Пирсона. Показатель ожидаемой гетерогиготности рассчитывали по Nei.
Относительной отклонение ожидаемой гетерозиготности от наблюдаемой (D)
рассчитывали используя следующую формулу: D = (Ho-He)/He, где Hoнаблюдаемая гетерозиготность, He - ожидаемая гетерозиготность.
Анализ ассоциации полиморфизмов генов КАГР и ФБК с
предрасположенностью к ГБ. Сравнение частот аллелей и генотипов между
различными группами осуществлялось в таблицах сопряженности 22 (df=1) с
помощью критерия 2 с поправкой Йетса на непрерывность данных.
Ассоциации аллелей и генотипов с предрасположенностью к ГБ оценивали по
показателю отношения шансов – odds ratio (OR). Границы 95%-го
доверительного интервала (CI) для OR вычисляли методом B. Woolf.
Анализ
ассоциации
парных
генных
сочетаний.
Межгенные
взаимодействия изучали путем сравнения парных сочетаний генотипов КАГР и
ФБК, а также других кандидатных генов ГБ. При проведении множественных
сравнений использовали поправку Бонферрони [Реброва О.Ю., 2006].
Гаметические корреляции между парами ДНК-маркеров рассчитывались
по W.G. Hill. Гаметические корреляции рассчитывались методом
максимального правдоподобия исходя из частот генотипов в таблицах
сопряженности 33 при условии кодоминирования между оцениваемыми
полиморфизмами отдельного гена.
Анализ
генно-средовых
взаимодействий
осуществлялся
путем
сопоставления величин отношения шансов (OR), рассчитанных для
индивидуальных генотипов в группах, сформированных по критерию наличия
или отсутствия средового фактора риска (курения).
Результаты собственных исследований
1. Частоты аллелей и генотипов КАГР и ФБК у русских жителей
центральной России и их связь с предрасположенностью к ГБ. При анализе
распределения генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК и их соответствия
равновесию Харди-Вайнберга отклонений частот их генотипов от равновесия
8
Харди-Вайнберга выявлено не наблюдалось. При сравнительном анализе частот
аллелей изучаемых генов аллелей полиморфных генов КАГР и ФБК у больных
гипертонической болезнью не выявлено статистически значимых различий от
таковых в контрольной группе (p>0.05). В таблице 2 представлены данные
сравнительного анализа частот генотипов, который также не выявил
статистически значимых различий между группами больных ГБ и здоровых
индивидов ни по одному из изучаемых ДНК-полиморфизмов.
Таблица 2
Сравнительный анализ частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК в
группах больных ГБ и контроля
Частоты генотипов
Контрольная
ПолиБольные ГБ
группа
Ген
морГенотипы
χ2, (p)
OR (CI 95%)
(n=602)
(n=549)
физм
n
%
n
%
554RR 486
81
425
77,8
1,6 (0,21)
0,83 (0,62-1,1)
AHR
R554K
554RK 106
17,1
106
19,4
0,85 (0,36) 0,86 (0,64-1,17)
554KK
11
1,8
15
2,7
1,09 (0,30) 0,66 (0,3-1,45)
185PP
192
32,1
166
30,3
0,39 (0,53) 0,92 (0,72-1,19)
AHRR
P185A
185PA
281
46,9
273
49,9
1,03 (0,31) 0,89 (0,7-1,12)
185AA 126
21,0
108
19,7
0,29 (0,59) 1,02 (0,81-1,44)
189GG 227
37,8
228
41,5
1,70 (0,19) 1,17 (0,92-1,48)
ARNT
G189C
189GC 290
48,3
248
45,2
1,09 (0,30) 1,13 (0,9-1,43)
189CC
84
14,0
73
13,3
0,11 (0,74) 1,06 (0,76-1,48)
462II
501
83,5
433
79,4
3,12 (0,08) 0,76 (0,57-1,03)
CYP1A1 I462V
462IV
94
15,7
108
19,8
3,38 (0,70) 0,75 (0,55-1,02)
462VV
5
0,8
4
0,7
0,04 (0,85) 1,14 (0,3-4,25)
154СС
63
10,5
68
12,4
1,10 (0,29) 1,21 (0,84-1,75)
CYP1A2 154C>A
154СA 232
38,5
220
40,2
0,34 (0,56) 0,93 (0,74-1,18)
154АА 307
51,0
259
47,3
1,53 (0,22) 1,16 (0,92-1,46)
432VV 111
18,4
99
18,1
0,03 (0,87) 0,98 (0,72-1,32)
CYP1B1 V432L
432VL
294
48,8
273
49,8
0,11 (0,74) 0,96 (0,76-1,21)
432LL
197
32,7
176
32,1
0,05 (0,83) 1,03 (0,8-1,32)
187PP
371
61,8
347
63,2
0,23 (0,63) 1,06 (0,83-1,35)
NQO1
P187S
187PS
196
32,7
172
31,3
0,24 (0,63) 1,06 (0,83-1,36)
187SS
33
5,5
30
5,5
0,00 (0,98) 1,01 (0,61-1,67)
2. Проявление полового диморфизма в ассоциациях генов сигнального
каскада
арилгидрокарбонового
рецептора
и
биотрансформации
ксенобиотиков с предрасположенностью к гипертонической болезни.
Стратифицированный по полу сравнительный анализ частот аллелей
исследуемых генных локусов между группами мужчин больных ГБ и
контрольной группы позволил установить, что аллель 554R гена AHR
ассоциирован с риском развития гипертонической болезни у мужчин (OR=1,5
95%CI 1,07-2,14 р=0,02). В то же самое время, аллель 154A гена CYP1A2
ассоциировался с риском развития заболевания (OR=1,28 95%CI 1,01-1,62
р=0,04). При проведении сравнительного анализа частот генотипов
полиморфизмов генов КАГР и ФБК между группами мужчин больных ГБ и
9
контрольной группы было установлено, что гомозиготный генотип по аллелю
дикого типа 554RR гена AHR ассоциирован с риском развития гипертонической
болезни (OR=1,54; 95%CI 1,04-2,22 р=0,03). При проведении сравнительного
анализа генотипов в группе женщин, нами не было выявлено статистически
значимых ассоциаций генов ФБК и КАГР с предрасположенностью к ГБ ни по
одному из изучаемых ДНК-полиморфизмов. Полученные результаты
свидетельствуют о взаимосвязях отдельных полиморфных вариантов генов
сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора (AHR R554K) и
биотрансформации ксенобиотиков (CYP1A2 154CA) с предрасположенностью к
гипертонической болезни у мужчин. Кроме того, результаты демонстрируют
генетические
различия
между
мужчинами
и
женщинами
в
предрасположенности к ГБ и обосновывают концепцию полового диморфизма
в подверженности мультифакториальным заболеваниям, типичным примером
которого и является гипертоническая болезнь.
3. Анализ ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов
сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации
ксенобиотиков с риском развития ГБ с учетом возраста манифестации
заболевания. Первоначально нами был проведен анализ распределения
возраста манифестации ГБ на нормальность с помощью статистического
критерия Колмогорова-Смирнова. Распределение больных по возрасту
манифеста ГБ соответствовало критериям нормального распределения (p>0,05).
Средний возраст манифестации ГБ составил 35,211,5 лет, который
использовался нами для разделения больных с ранним (до 35 лет) и поздним
(после 35 лет) дебютом заболевания. Анализ ассоциации проводился как в
общей выборке пациентов, так и раздельно у мужчин и женщин. В таблице 3
суммированы статистически значимые ассоциации аллелей генов ФБК и КАГР
с предрасположенностью к гипертонической болезни. Было установлено, что
аллель 554R гена AHR ассоциировался с риском развития ГБ с поздним
дебютом заболевания у мужчин (OR=7,36; 95%CI 1,01-13,9). Аллель 154A гена
CYP1A2 был ассоциирован с риском развития гипертонической болезни, как
раннего (OR=1,6; 95%CI 1,64-3,91), так и позднего дебюта (OR=1,68; 95%CI
1,16-2,42). Также установлено, что гетерозиготный генотип 554RR гена AHR
был ассоциирован с повышенным риском развития ГБ у мужчин с возрастом
манифестации заболевания после 35 лет (OR=6,17; 95%CI 1,09-12,4).
Гетерозиготный генотип 189GC гена ARNT ассоциировался с повышенным
риском развития гипертонической болезни у женщин с поздним дебютом
заболевания (OR=1,96; 95%CI 1,18-3,26). Носительство гомозиготного генотипа
154АА гена CYP1A2 было связано с повышенным риском развития ГБ
независимо от возраста начала болезни. В целом полученные результаты
свидетельствуют о том, что полиморфизмы генов КАГР и ФБК являются
значимыми предикторами возраста манифестации ГБ, как у мужчин, так и у
женщин.
10
Таблица 3
Ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК с возрастом
манифестации гипертонической болезни
Аллели
Общая выборка
Мужчины
Женщины
и
OR 95%CI (P)
OR 95%CI (P)
OR 95%CI (P)
генотипы Манифестация Манифестация МанифестацияМанифестация Манифестация Манифестация
КАГР и
до 35 лет
после 35 лет
до 35 лет
после 35 лет
до 35 лет
после 35 лет
ФБК
n=102
n=94
n=28
n=26
n=74
n=68
554R
1,27 0,44-3,6 1,08 0,48-2,43 1,56 0,713,44
0,57 0,22-1,47
0,80 0,367,36 1,01AHR
(0,66)
(0,86)
(0,27)
(0,24)
1,77 (0,58)
13,9 (0,02)*
154A
1,02 0,470,50 0,140,47 0,17-1,3
0,54 0,191,6 1,64-3,91 1,68 1,16-2,42
CYP1A2
2,23 (0,95)
2,85 (0,29)
(0,14)
1,55 (0,25)
(0,02)*
(0,01)*
554RR
0,57 0,260,72 0,21-2,47 0,84 0,361,95
1,08 0,45-2,6
1,05 0,546,17 1,09AHR
1,26 (0,17)
(0,62)
(0,69)
(0,87)
2,08 (0,88)
12,4 (0,02)*
189GC
0,84 0,380,94 0,43-2,05 0,98 0,452,15
1,14 0,680,71 0,41-1,21
1,96 1,18ARNT
1,85 (0,94)
(0,88)
(0,96)
1,92 (0,61)
(0,84)
3,26 (0,005)*
154AA
0,8
0,13-5,03
0,75
0,40,95
0,57-1,59
0,89 0,763,6 2,3-6,72 2,06 1,30-3,24
CYP1A2
(0,52)
1,18 (0,18)
(0,74)
2,79 (0,78)
(0,01)*
(0,001)*
* - статистически значимые ассоциации
4. Анализ ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР
и ФБК с особенностями клинического течения гипертонической болезни и
развитием осложнений. С целью оценки вклада изучаемых генов в
детерминацию особенностей клинического течения гипертонической болезни
был проведен стратифицированный анализ ассоциаций аллелей и генотипов с
развитием лабильной (лГБ) и стабильной (сГБ) форм заболевания. Однако
проведенный анализ не выявил статистически значимых различий между
изучаемыми группами (данные не представлены).
Таблица 4
Сводные данные о взаимосвязях полиморфизмов генов КАГР и ФБК с развитием
осложнений на фоне ГБ
Ген
Ишемический
инсульт χ2, (p)
Полиморфизм
ГМЛЖ
χ2, (p)
0,93 (0,33)
AHR
R554K
4,14 (0,04)1*
3
ARNT
0,36 (0,24)
4,79 (0,03) *
G189C
4
ARNT
0,21 (0,65)
6,47 (0,01) *
CYP1A1
I462V
0,5 (0,48)
4,14 (0,03)1*
1,43 (0,23)
CYP1A2
5,55 (0,02)1*
3
0,08(0,78)
CYP1A2
4,82 (0,03) *
1,28 (0,26)
CYP1A2
4,10 (0,04)5*
154C>A
2
0,12 (0,73)
CYP1A2
5,86 (0,02) *
6
0,61 (0,43)
CYP1A2
4,04 (0,04) *
2,42 (0,12)
CYP1A2
6,67 (0,01)4*
1-общая выборка больных ГБ; 2-сГБ (общая выборка); 3- ГБ у мужчин; 4-сГБ у
мужчин; 5-лГБ у мужчин; 6-сГБ у женщин; * - статистически значимые ассоциации;
ГМЛЖ – гипертрофия миокарда левого желудочка.
11
Нами была также оценена взаимосвязь полиморфизмов генов КАГР и
ФБК с риском развития ишемических мозговых инсультов и гипертрофией
миокарда левого желудочка сердца на фоне гипертонической болезни.
Полученные данные представлены в таблице 4. Полученные результаты
свидетельствуют о значимой роли генов КАГР и ФБК в детерминации не
только предрасположенности к ГБ, но и к ее осложнениям – ишемическому
мозговому инсульту и развитию гипертрофии миокарда левого желудочка
сердца.
5. Анализ ассоциации парных комбинаций генотипов сигнального
каскада
арилгидрокарбонового
рецептора
и
биотрансформации
ксенобиотиков, а также других генов кандидатов гипертонической
болезни. Посредством анализа парных межгенных сочетаний генотипов были
изучены взаимодействия полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у
больных гипертонической болезнью. Были обнаружены 73 парные комбинации
генотипов, которые были ассоциированы с риском развития ГБ при анализе
общих выборок пациентов (данные не представлены). Однако после внесения
поправки Бонферрони на множественность межгрупповых сравнений, только
22 парных сочетания генотипов показали статистически значимые ассоциации с
риском развития ГБ. В таблицах 5,6 суммированы наиболее значимые
ассоциации парных межгенных комбинаций генотипов генов КАГР и ФБК с
развитием гипертонической болезни у мужчин и у женщин. Статистически
значимыми были ассоциации комбинаций генотипов, повышающие риск
развития ГБ у мужчин: гены КАГР и ФБК, такие как AHR, ARNT, CYP1A1,
CYP1A2 и CYP1B1 в сочетании с генами-кандидатами ГБ и геном
антиоксидантной системы (АОС), такими как ADD1, AGT, GSTT1, которые
увеличивали риск развития ГБ. В группе женщин гены КАГР и ФБК, такие как
AHR, AHRR, CYP1A1 в сочетании с генами-кандидатами ГБ, такими как AGT,
ADD1, GNB3 и NR3C2 влияли на риск развития ГБ. Таким образом,
полиморфные варианты генов КАГР и ФБК взаимодействуют с известными
генами-кандидатами гипертонической болезни, что отражает их совместную
вовлеченность в молекулярные звенья патогенеза заболевания.
Таблица 5
Ассоциации парных межгенных комбинаций генотипов генов КАГР и ФБК с
предрасположенностью к гипертонической болезни у женщин
№
1
2
3
4
5
Комбинации генотипов
AHR 554RR  NR3C2 4582AA
AHRR 185PP  NR3C2 4582AA
CYP1A1 462IV  ADD1 460GG
CYP1A1 462II  GNB3 825CC
CYP1A1 462IV  NR3C2 4582AA
N
%
N
Женщины
13 10,1 17
5 3,9 10
12 9,3 17
5 3,9 16
1 0,8
6
%
2 (p)
OR (95%CI)
27,0
15,9
27,0
25,4
9,5
9,18 (5,8х10-5)
8,25 (7,0х10-6)
10,32 (1,2х10-4)
8,76 (4,1х10-5)
9,22 (5,1х10-7)
0,30 (0,14-0,67)
0,22 (0,07-0,67)
0,28 (0,12-0,63)
2,65 (1,38-5,12)
0,07 (0,01-0,63)
Таблица 6
12
Ассоциации парных межгенных комбинаций генотипов генов КАГР и ФБК с
предрасположенностью к гипертонической болезни у мужчин
№
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Комбинации генотипов
AHR 554RR  GSTT1 del
AHRR 185PA  AGT 253MT
ARNT 189GG  CYP1A1 462IV
ARNT 189GG  GSTT1 del
ARNT 189GC  GSTT1 del
CYP1A1 462II  ADD1 460GW
CYP1A1 462IV  GSTT1+
CYP1A1 462II  GSTT1 del
CYP1A2 154CC  AGT 235TT
CYP1B1 432VL  GSTT1 del
N
13
7
36
4
9
78
27
14
12
5
%
N
Мужчины
10,8 47
13,5 27
11,0 14
3,3 23
7,5 29
60,5 21
22,5 14
11,7 48
23,1 2
4,2 29
%
2 (p)
OR (95%CI)
32,6
37,5
4,4
16,0
20,1
33,3
9,7
33,3
2,8
20,1
17,72 (4,7х10-5)
8,77 (3,2х10-6)
9,9 (3,6х10-5)
11,39 (6,1х10-6)
8,49 (3,7х10-7)
12,48 (3,2х10-5)
8,15 (5,1х10-7)
17,1 (4,6х10-5)
12,42 (9,3х10-8)
8,8 (4,2х10-5)
3,99 (2,03-7,82)
0,26 (0,10-0,66)
0,37 (0,20-0,70)
5,51 (1,85-16,43)
3,11 (1,41-6,87)
3,06 (1,63-5,75)
0,37 (0,18-0,75)
3,7 (1,69-8,04)
6,50 (2,24-9,30)
3,83 (1,51-9,07)
6. Анализ гаметических корреляций между полиморфными
вариантами генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и
биотрансформации ксенобиотиков, а также известными генами
кандидатами гипертонической болезни. Важной задачей при оценке
межгенных взаимодействий было изучение гаметических корреляций
аллельных вариантов генов КАГР, ФБК и других генов-кандидатов ГБ.
Гаметические корреляции отражают неслучайное сочетание аллелей различных
генных локусов в гаметах – так называемых гаплотипических групп. Нами
были проанализированы парные коэффициенты гаметических корреляций (rg),
рассчитанные для индивидуальных полиморфизмов генов в исследуемых
группах пациентов. Матрица гаметических корреляций между полиморфными
вариантами исследуемых генов в группах больных ГБ и здоровых индивидов
представлена в таблице 6.
Таблица 6
Матрица гаметических корреляций (p<0.05) между полиморфными вариантами генов КАГР,
ФБК и генов-кандидатов ГБ в исследуемых группах
AHR CYP1A1 CYP1A2 AGTR1
ADD1 GNB3
NOS3
NOS3 NR3C2
R554K I462V 154C/A 1166A/C G460W C825T E298D -786T/C A4582C
0.275
0.208
0.255
AHR
R554K
CYP1A1
0.188
I462V
-0.190
0.165
0.181
CYP1A2
154C/A
В верхних ячейках представлены коэффициенты корреляций у здоровых индивидов, в
нижних – у больных ГБ (серый фон)
У здоровых индивидов были установлены 7 статистически значимых
(p<0,05) гаметических корреляций между следующими аллельными вариантами
генов: AHR R554K и ADD1 G460W (rg=0.275), AHR R554K и NOS3 E298D
13
(rg=0.208), AHR R554K и NOS3 -786T/C (rg=0.255), CYP1A1 I462V и NR3C2
A4582C (rg=0.188), CYP1A2 154A и GNB3 C825T (rg=0.181). В группе больных
ГБ были установлены только 2 статистически значимые (p<0,05) гаметические
корреляции между аллельными вариантами генов CYP1A1 I462V и AGTR1
1166A/C (rg=0.190), а также между аллельными вариантами CYP1A1 I462V и
NR3C2 A4582C (rg=0.165). Таким образом, были выявлены существенные
различия, как количественного, так и качественного характера между группами
больных ГБ и здоровых индивидов в отношении аллельных ассоциаций
различных классов полиморфных генов, расположенных в различных участках
генома человека. Примечательно, что гаметические корреляции у здоровых лиц
наблюдались между геном AHR и генами, вовлеченными в патогенез
гипертонической болезни, а именно генами -аддуцина (полиморфизм G460W)
и эндотелиальной синтазы окиси азота (кодирующий E298D и промоторный 786T/C полиморфизмы). В то же время, ген CYP1A2 (полиморфизм C154A)
показал ассоциацию с геном GNB3 (полиморфизм C825T). Следует отметить,
что указанные гены играют важную роль в регуляции артериального давления и
увеличивают риск развития гипертонической болезни, в том числе и в
изученной нами популяции русских жителей Курской области. По всей
видимости, такие взаимодействия сформировались в процессе эволюции под
действием естественного отбора, направленного на сохранение в генофонде не
отдельных полиморфных вариантов генов, а целых совокупностей генов,
функциональные варианты которых способны обеспечивать оптимальную
адаптацию в условиях нарастающего химического загрязнения окружающей
среды.
Анализ парных сочетаний генотипов и гаметических корреляций между
локусами подтверждает предположение о том, что исследованные нами гены
работают не автономно друг от друга, а в тесной координации,
обеспечивающей адекватную реакцию физиологических систем организма на
действие химических факторов внешней среды. Когда воздействие химических
факторов внешней среды на организм достигает своих максимальных значений,
как это имеет место в современных экологических условиях, дискоординация в
функционировании генов КАГР, ФБК и регуляции сосудистого гомеостаза,
видимо, способна потенцировать токсические влияния ксенобиотиков на
организм и способствовать формированию нарушений сосудистого тонуса и
развитию артериальной гипертензии.
7. Анализ генно-средовых взаимодействий, детерминирующих
предрасположенность к
гипертонической
болезни.
Для
оценки
индивидуального уровня химического воздействия нами использовались
данные о статусе курения пациентов, полученные при анкетировании. Курение
было выбрано по причине того, что в состав табачного дыма входят
полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) – типичные индукторы
арилгидрокарбонового каскада. Исследуемые группы больных ГБ и здоровых
индивидов не отличались по статусу курения (p>0.05). Был выполнен анализ
ассоциации генотипов исследуемых полиморфных вариантов генов КАГР и
ФБК с развитием гипертонической болезни в зависимости от статуса курения.
14
В таблице 7 представлены статистически значимые взаимодействия генотипсреда, показавшие ассоциации с риском развития ГБ. Было обнаружено 4
значимых статистических генно-средовых взаимодействия. Установлено, что
гомозиготный генотип по вариантному аллелю 189C гена ARNT ассоциирован с
повышенным риском развития ГБ среди курящих людей, однако в группе
некурящих женщин генотип 189СС гена ARNT достоверно ассоциирован со
снижением риска развития ГБ. Более того, вариантный генотип CYP1A2 154АА
повышал риск ГБ в группе курящих мужчин.
Таким образом, комплексная оценка взаимодействий генетических и
средовых факторов на риск возникновения ГБ позволила определить
взаимодействия генотип-среда, формирующие основу предрасположенности к
болезни, а также обозначить токсикогенетические механизмы, посредством
которых внешние факторы способны спровоцировать развитие патологии у
генетически предрасположенных индивидов.
Таблица 7
Влияние курения на риск развития изучаемых ГБ в зависимости от генотипов ферментов
КАГР и ФБК
Больные гипертонической болезнью (n=573)
Больные ГБ,
Больные ГБ, мужчины
Больные ГБ, женщины
OR 95%CI (P)
OR 95%CI (P)
OR 95%CI (P)
Генотипы
КАГР и ФБК
Курящие, Некурящие, Курящие, Некурящие, Курящие, Некурящие,
(n=159)
(n=393)
(n=148)
(n=148)
(n=11)
(n=245)
0,74
0,480,49
0,340,89
0,541,41
0860,78
0,611,58
1,01ARNT 189CC
1,12 (0,48)
2,45(0,04)* 3,86 (0,93) 2,51 (0,78) 3,48 (0,69) 1,29 (0,16)
0,48
0,830,92
0,340,89
0,541,42
0,870,74
0,490,55 0,31ARNT 189CC
1,58 (0,96) 2,05 (0,76) 3,05 (0,93) 1,94 (0,65) 1,41 (0,89) 0,98 (0,04)*
CYP1A2
0,79 0,480,38 0,520,85 0,450,97 0,552,68 1,262,47 1,131,63 (0,34)
5,07(0,01)* 2,18 (0,19) 5,4 (0,02)* 1,51 (0,77) 2,44 (0,59)
154AA
* - статистически значимые ассоциации
Выводы
1.
Полиморфные
варианты
генов
сигнального
каскада
арилгидрокарбонового
рецептора
и
ферментов
биотрансформации
ксенобиотиков, а именно аллель 554R и генотип 554RR гена AHR и аллель 154A
гена CYP1A2 ассоциированы с повышенным риском развития гипертонической
болезни у мужчин.
2.
Полиморфные варианты генов КАГР и ФБК взаимосвязаны с
возрастом манифестации гипертонической болезни: аллель 554R и генотип
554RR гена AHR у мужчин и генотип 189GC гена ARNT у женщин
ассоциированы с поздним дебютом заболевания (после 35 лет), тогда как
аллель 154A и генотип 154AA гена CYP1A2 у мужчин и женщин были связаны
с риском развития ГБ независимо от возраста ее манифестации.
3.
Носительство генотипа 189СC гена ARNT, а также генотипа 154СA
гена CYP1A2 у мужчин, носительство генотипа154АА гена CYP1A2 у женщин
оказывает влияние на риск возникновения мозгового инсульта на фоне
гипертонической болезни; полиморфизм I462V гена CYP1A1 ассоциирован с
15
риском развития гипертрофии миокарда левого желудочка сердца у больных
ГБ.
4.
Установлены
статистически
значимые
генно-средовые
взаимодействия, детерминирующие предрасположенность к ГБ: генотип 189CC
гена ARNT и генотип 154AA CYP1A2 (у мужчин) ассоциировались с
повышенным риском развития болезни исключительно у курящих индивидов,
в то время как генотип 189CC гена ARNT у некурящих женщин ассоциировался
с пониженным риском развития ГБ.
5.
Установлены ассоциации гипертонической болезни с широким
спектром сочетаний генотипов КАГР и ФБК между собой и с генотипами
известных генов-кандидатов заболевания: всего обнаружено 10 парных
сочетания генотипов у мужчин и 5 парных сочетаний генотипов у женщин,
существенная часть которых ассоциировалась с риском развития ГБ на высоком
уровне статистической значимости (p<0.001).
6.
У здоровых индивидов, в отличие от больных ГБ, обнаружены
статистически значимые гаметические корреляции между аллельными
вариантами генов КАГР, ФБК и другими генами-регуляторами гомеостаза,
которые могут отражать эволюционно закрепленную функциональную
сопряженность различных физиологических систем в обеспечении адаптации к
химическим факторам среды.
Практические рекомендации
1.
Рекомендовать для внедрения в практику медико-генетического
консультирования генотипирование полиморфизма генов ферментов КАГР и
ФБК (AHR R554K, ARNT 189G>С, CYP1A2 154C>A) для выявления среди
населения лиц, предрасположенных к гипертонической болезни.
2.
Рекомендовать практическим врачам, осуществляющим первичную
диагностику гипертонической болезни, направлять пациентов в медикогенетическую консультацию с целью оценки генетического риска развития
мозгового инсульта на основе генетического тестирования генов КАГР и ФБК.
3.
В рамках медико-генетического консультирования пациентов с ГБ и
членов их семей помимо генетического тестирования КАГР и ФБК необходимо
учитывать наличие средовых факторов риска, таких как курение для более
точной вероятностной оценки риска развития заболевания и разработки
мероприятий по его индивидуальной профилактике.
4.
С целью оптимизации поиска генов предрасположенности к
гипертонической болезни и расширения представлений о токсико-генетической
природе заболевания предлагается проведение совместного генетического
тестирования полиморфизма генов ферментов КАГР и ФБК с другими
тестируемыми генами-кандидатами болезни.
5.
Внедрить результаты исследования в образовательный процесс в
рамках изучения специальных курсов по медицинской и клинической генетике
в вузах медицинского профиля, а также на курсах повышения квалификации
медицинских
работников
для
освещения
вопросов
экологотоксикогенетических механизмов развития гипертонической болезни.
16
Список условных сокращений
SNP – single nucleotide polymorphism (однонуклеотидный полиморфизм)
АД – артериальное давление
ГБ – гипертоническая болезнь
КАГР – каскад арил-гидрокарбонового рецептора
лГБ – лабильная форма гипертонической болезни
МФЗ – мультифакториальные заболевания
АОС – антиоксидантная система
ПАУ - полициклические ароматические углеводороды
ПЦР – полимеразная цепная реакция
РХВ – равновесие Харди-Вайнберга
сГБ - стабильная форма гипертонической болезни
СЗЗ – сердечно-сосудистые заболевания
ФБК – ферменты биотрансформации ксенобиотиков
ЦЧР – Центрально-Черноземный регион
ГМЛЖ – гипертрофия миокарда левого желудочка
AHR – арилгидрокарбоновый рецептор
AHRR – репрессор арилгидрокарбонового рецептора
ARNT – арилгидрокарбоновый ядерный транслокатор
ACE – ангиотензин конвертирующий фермент
AGT – ангиотензиноген
AGTR1 – ангиотензиногеновый рецептор 1 типа
CYP1A1 – цитохром Р-450, семейство A, подсемейство I,
CYP1A2 – цитохром Р-450, семейство A, подсемейство II,
CYP1B1 – цитохром Р-450, семейство B, подсемейство I,
GNB3 – гуанин нуклеотид-связывающий белок, β3-субъединица
ADD1- альфа-аддуцин1
TGFB1 - трансформирующий ростовой фактор бета 1
GSTM1 – глутатион-S-трансфераза, класс , изоформа 1
GSTP1 – глутатион-S-трансфераза, класс , изоформа 1
GSTT1 – глутатион-S-трансфераза, класс , изоформа 1
NOS3 – синтаза окиси азота 3 типа, эндотелиальная
NQO1 – НАД(Ф)Н дегидрогеназа, хинон 1
Список опубликованных работ по теме диссертации
1. Булгакова, И.В Полиморфизм генов ферментов глютатион –S-трансфераз и
его роль в формировании предрасположенности к гипертонической болезни
/ И.В. Булгакова, М.А. Солодилова // Национальное достояние России:
материалы XXIII Всерос. конф. обучающихся (Москва, 27-30 марта 2008 г.).
– М., 2008. – С. 531
17
2. Булгакова, И.В. Роль полиморфизма гена ангиотензинпревращающего
фермента в формировании повышенного давления / Булгакова И.В.,
Солодилова М.А. // Молодежная наука: от фундаментальной идеи до
инновационных проектов 73-я итоговая межвузовская конференция
студентов и молодых ученых (15-16 апреля 2008 года). – Курск, 2008. – Ч. 1 .
– С. 37.
3. Связь полиморфизма 1166A>C гена рецептора 1 типа ангиотензина-II с
предрасположенностью к гипертонической болезни у русских жителей
Центрального Черноземья / Е.К. Кононенко,… И.В.Булгакова [и др.] //
Молодежная наука и современность : материалы 74-й межвуз. итог. науч.
конф. студентов и молодых ученых, посвящ. Году молодежи в России (21-22
апр. 2009 г.). – Курск, 2009. – Ч. 1. – С. 65-66.
4. Булгакова, И.В. Роль полиморфизмов генов системы ренин-ангиотензинальдостерон в формировании повышенного артериального давления / И.В.
Булгакова, М.А. Солодилова // Молодежная наука и современность :
материалы 74-й межвуз. итог. науч. конф. студентов и молодых ученых,
посвящ. Году молодежи в России (21-22 апр. 2009 г.). – Курск, 2009. – Ч. 1. –
С. 54.
5. Анализ ассоциации полиморфизма -463G>A гена миелопероксидазы с
предрасположенностью к эссенциальной гипертензии в Центральном
Черноземье / Е.К. Кононенко, А.В. Полоников, И.В.Булгакова [и др.] //
Вестн. РГМУ. – 2010. – Спец.вып. № 2. – C. 465-466.
6. Вовлеченность полиморфизма гена глутатион-S-трансферазы P1 в
формирование
полового
диморфизма
предрасположенности
к
гипертонической болезни /
И.В. Булгакова [и др.] // Молодежная
наука и современность: материалы 75-й Всерос. науч. конф. студентов и
молодых учѐных с междунар. участием, посвящ 75-летию КМУ (20-21 апр.
2010 г.). – Курск, 2010. – Ч. 1. – С. 51.
7. Промоторный полиморфизм -262С>Т гена каталазы и риск возникновения
гипертонической болезни у русских жителей Курской области / В.А.
Кабанина В.А., А.В. Полоников,… И.В.Булгакова [и др.] // Вестн. РГМУ. –
2010. – Спец. вып. № 2. – C. 495-496.
8. Защитный эффект полиморфизма gly272ser гена GNB3 в развитии
гипертонической болезни и его взаимосвязь со средовыми факторами риска
развития заболевания / А.В. Полоников,… И.В.Булгакова [и др.] //
Терапевт. арх. – 2011. – № 4. – С. 55-60.
9. Genetic variation in glutathione S-transferase genes and risk of nonfatal cerebral
stroke in patients suffering from essential hypertension / A.
Polonikov,…I.Bulgakova [et al.] // J. Mol. Neurosci. – 2012. – Vol. 47, N 3. – Р.
511-513.
18
10.Polymorphism Ile105Val of the GSTP1 gene is a predictor for ischemic stroke in
patients with essential hypertension in Russian population / A.V. Polonikov,…
I.Bulgakova [et al.] // Eur. J. Human Genetics. – 2011. – Vol. 19 (Suppl. 2). – Р.
296.
11.Булгакова, И.В. Полиморфизм генов метаболизма глутатиона и
предрасположенность к гипертонической болезни - анализ ассоцииаций и
генно-средовых взаимодействий / И.В. Булгакова, М.А. Солодилова, А.В.
Полоников // Молекулярные основы клинической медицины – возможное и
реальное : сб. тез. II Рос. конгр. с междунар. участием (Санкт-Петербург, 1820 июня 2012 г.). – СПб., – 2012. – С. 99-100.
12.Связь полиморфизма гена каталазы с повышенным риском развития
церебрального инсульта у больных гипертонической болезнью / Е.К Вялых,
А.В. Полоников,…И.В.Булгакова [и др.] // Журн. неврологии и психиатрии
им. С.С. Корсакова. – 2012. – № 8, вып. 2. – С. 3-7.
13.Булгакова, И.В. Полиморфизм A154C гена CYP1A2 и риск развития
гипертонической болезни: анализ ассоциации и взаимосвязь со средовыми
факторами риска / И.В. Булгакова, О.Ю. Бушуева, А.В. Полоников //
Фундаментальные исследования. – 2013. - № 9. – С. 994-998.
14. Изучение роли полиморфизмов генов ферментов цитохромов Р450 у
больных гипертонической болезнью / И.В. Булгакова [и др.] // Молодежная
наука и современность: материалы 78-й Всерос. науч. конф. студентов и
молодых учѐных с междунар. участием (Курск, 17-18 апр. 2013 г.) : в 3 т. –
Курск, 2013. – Т. 1. – С. 64.
15.Изучение связи полиморфизма Val432Leu гена CYP1B1 c развитием
гипертонической болезни в популяции русских жителей центральной России
/ И.В. Булгакова [и др.] // Курск. науч.-практ. вестн. "Человек и его
здоровье". – 2013. - № 3. – С. 11-16.
16.Исследование асоциации I/D полиморфизма гена ACE с риском развития
гипертонической болезни / Е.С. Гаврюк, О.Ю. Бушуева,…И.В.Булгакова [и
др.] // Молодежная наука и современность: материалы 78-й Всерос. науч.
конф. студентов и молодых учѐных с междунар. участием (Курск, 17-18 апр.
2013 г.). – Курск, 2013. – С. 68-69.)
17.Полиморфизм Ile462Val гена CYP1A1 и его роль в формировании
предрасположенности к гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.] //
Современные достижения науки-2013: материалы IX междунар. науч.-практ.
конф. – Прага: Образование и наука, 2013. – С. 80-83.
18.Проявление полового диморфизма в ассоциации полиморфного варианта
M235T гена AGT с риском развития артериальной гипертензии в популяции
Центрально-Черноземного региона России : материалы XVIII заочной науч.
конф. Research Journal of International Studies / Т.А. Стецкая, О.Ю.
Бушуева,…И.В.Булгакова [и др.] // Междунар. науч.-исслед. журн. – 2013. –
№ 8 (15). – Ч. 4. – С. 37-39.
19
19.Проявление полового диморфизма в ассоциациях гена ARNT (Val189Val) с
предрасположенностью к гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.]
// Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины : материалы
V Междунар. науч.-практ. конф. (Ростов-на-Дону, 3-5 окт. 2013 г.). –
Ростов/н Д, 2013. – С. 226-228.
20. Булгакова, И.В. Проявление полового диморфизма в ассоциациях гена
AHR (Arg554Lys) с предрасположенностью к гипертонической болезни /
И.В. Булгакова, А.В. Полоников, И.И. Барт // Перспективы развития науки :
материалы междунар. науч.-практ. конф. (Уфа, 20 марта 2014 г.). – Уфа,
2014. – C. 283-285.
21.Изучение вовлеченности полиморфизма G554C гена AHR в развитие
гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.] // Наука, образование,
общество: проблемы и перспективы развития: материалы междунар. заочной
науч.-практ. конференции (Тамбов, 28 февр. 2014 г.). – Тамбов, 2014. – С.
22-24.
22.Анализ ассоциации полиморфизма P187S гена NQO1 с риском развития
гипертонической болезни / И.В. Булгакова [и др.] // Современная медицина:
актуальные вопросы – сборник статей по материалам XXX междунар. науч.практ. конференции №4 (30). (Новосибирск, апрель, 2014 г.). – Новосибирск
Изд. «СибАК», 2014. – С. 37-41.
20