RU 2 527 258 C1

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
(19)
RU
(11)
(13)
2 527 258
C1
(51) МПК
C07D 487/04 (2006.01)
A61K 31/395 (2006.01)
A61P 35/00 (2006.01)
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
(12) ОПИСАНИЕ
(21)(22) Заявка:
ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
2013107122/04, 19.02.2013
(24) Дата начала отсчета срока действия патента:
19.02.2013
(45) Опубликовано: 27.08.2014 Бюл. № 24
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске: RU 2 462 466 C1 27.09.2012 (см. прод.)
RU 2007114948 A 27.10.2008 RN 1231691-29-4 entered STN 13.07.2010 RN 1399261-15-4 entered STN
04.10.2012 Pellegatti Laurent et.al. Journal of Combinatorial Chemistry 12(4), p.604-608,31.08.2010
C 1
R U
2 5 2 7 2 5 8
(56) (продолжение):
Стр.: 1
C 1
(54) 6-ЗАМЕЩЕННЫЕ 3-АЗОЛИЛИМИДАЗО[1,2-b][1,2,4,5]ТЕТРАЗИНЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ
ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ
(57) Реферат:
Описываются новые производные имидазо
где: Het=4-метилимидазол-1-ил, R=Н или Het=
[1,2-b][1,2,4,5]тетразинов общей формулы
3,5-диметилпиразол-1-ил,
R=пропилтио,
и
противоопухолевые агенты на их основе для
лечения онкологических больных. 2 н.п. ф-лы, 1
табл., 2 пр.
2 5 2 7 2 5 8
Адрес для переписки:
119991, Москва, ГСП-1, ул. Губкина, 3, Институт
общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (отдел
генетических основ биотехнологий,Даниленко
В.Н.)
(73) Патентообладатель(и):
Автономная Некоммерческая Организация
"Научно-исследовательский центр
биотехнологии антибиотиков и других
биологически активных веществ "БИОАН"
(RU)
R U
Приоритет(ы):
(22) Дата подачи заявки: 19.02.2013
(72) Автор(ы):
Беккер Ольга Борисовна (RU),
Даниленко Валерий Николаевич (RU),
Игнатенко Нина Константиновна (RU),
Ишметова Рашида Иршотовна (RU),
Русинов Геннадий Леонидович (RU),
Толщина Светлана Геннадьевна (RU),
Чарушин Валерий Николаевич (RU),
Штиль Александр Альбертович (RU)
RUSSIAN FEDERATION
(19)
RU
(11)
(13)
2 527 258
C1
(51) Int. Cl.
C07D 487/04 (2006.01)
A61K 31/395 (2006.01)
A61P 35/00 (2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY
(12) ABSTRACT
(21)(22) Application:
OF INVENTION
2013107122/04, 19.02.2013
(24) Effective date for property rights:
19.02.2013
(45) Date of publication: 27.08.2014 Bull. № 24
C 1
(54) 6-SUBSTITUTED 3-AZOLYLIMIDAZO[1,2-b][1,2,4,5]TETRAZINES SHOWING ANTICANCER ACTIVITY
(57) Abstract:
FIELD: chemistry.
methylimidazol-1-yl, R=H or Het=3,5-dimethylpyrazolSUBSTANCE: there are described new derivatives
1-yl, R=propylthio, and based anticancer agents for
of imidazo[1,2-b][1,2,4,5]tetrazines of general formula
treating oncological patients.
EFFECT: higher clinical effectiveness.
2 cl, 1 tbl, 2 ex
wherein:
Het=4-
R U
(I)
Стр.: 2
C 1
2 5 2 7 2 5 8
(73) Proprietor(s):
Avtonomnaja Nekommercheskaja Organizatsija
"Nauchno-issledovatel'skij tsentr biotekhnologii
antibiotikov i drugikh biologicheski aktivnykh
veshchestv "BIOAN" (RU)
2 5 2 7 2 5 8
Mail address:
119991, Moskva, GSP-1, ul. Gubkina, 3, Institut
obshchej genetiki im. N.I. Vavilova RAN (otdel
geneticheskikh osnov biotekhnologij,Danilenko
V.N.)
R U
Priority:
(22) Date of filing: 19.02.2013
(72) Inventor(s):
Bekker Ol'ga Borisovna (RU),
Danilenko Valerij Nikolaevich (RU),
Ignatenko Nina Konstantinovna (RU),
Ishmetova Rashida Irshotovna (RU),
Rusinov Gennadij Leonidovich (RU),
Tolshchina Svetlana Gennad'evna (RU),
Charushin Valerij Nikolaevich (RU),
Shtil' Aleksandr Al'bertovich (RU)
RU
5
10
15
2 527 258 C1
Изобретение относится к фармацевтической химии и касается производных имидазо
[1,2-b][1,2,4,5]тетразинов, содержащих в тетразиновом цикле 4-метилимидазолильный
или 3,5-диметилпиразолильный заместитель и водород и пропилтиогруппу в азольном
фрагменте. Указанные соединения могут быть использованы в качестве
противоопухолевых агентов в первую очередь для лечения онкологических больных.
Соединения, раскрываемые в настоящем изобретении, являются новыми, не
описанными ранее, производными азоло[1,2,4,5]тетразинов. Способ получения
представленных соединений описан [Изв. АН. Сер. хим., 2011. 961-967].
Противоопухолевая активность азоло[1,2,4,5]тетразинов неизвестна и неописана.
Аналогами вышеуказанных веществ по строению и действию являются темозоломид
формулы А [Патент US 0286088 от 10.11.2010], 3,6-дизамещенный 1.2,4,5-тстразин
формулы В [Патент CN 102267983А от 07.12.2011], использующиеся для лечения
онкологических заболеваний, и 3-(имидазол-1-ил)имидазо[1,2-b][1.2,4.5]тетразин
формулы С, ингибитор протеинкиназ Mycobacterium tuberculosis, который можно
использовать для лечения больных туберкулезом [Патент РФ 2462466 С1 от 27.09.2012
J.
Заявлено новое соединение
1. Имидазо[1.2-6][1,2,4,5]тетразины общей формулы I:
20
25
где: Het=4-метилимидазол-1-ил, R=Н;
Het=3,5-диметилпиразол-1-ил. R=пропилтио
30
35
40
45
Новые соединения, раскрываемые в настоящем изобретении, отличаются от
известного и близкого по структуре соединения C тем, что заместитель имидазол-1-ил
в 3-м положении азолотетразина заменен на 4-метилимидазол-1-ил- или 3,5диметилпиразол-1-ил, а в положении 6 заместителями являются атом водорода или
пропилтио.
Вещества, представленные в настоящем изобретении, могут быть получены с
использованием известных методов синтеза 3-азолил-6-(алкилтио)имидазо[1,2-b][1,2,4,5]
тетразинов [Изв. АН. Сер. хим., 2011, 5]. Структуры представленных в изобретении
новых соединений подтверждаются данными спектроскопии ЯМР 1Н (спектрометр
Avance DRX-400 (Bruker) с рабочей частотой 400 МГц) и элементного анализа
Стр.: 3
RU
2 527 258 C1
(автоматический анализатор CHN РЕ 2400 сер. II (Perkin Elmer)).
Примеры конкретного выполнения
Пример 1
3-(4-Метилимидазол-1-ил)имидазо[1,2-А][1,2,4,5]тетразин
5
10
15
20
В колбу с 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают 265 мг (1 ммоль) 3-(4метилимидазол-1-ил)-6-(2,2-диметоксиэтиламино)-1,2,4,5-тетразина и реакционный
раствор кипятят в течение 4 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении.
Остаток перекристаллизовывают из ацетонитрила. Выход 135 мг (66%). Т.пл. 211-212°C.
Найдено (%): C 47.81; H 3.39; N 48.77. C8H7N7. Вычислено (%): C 47.76, Н 3.51, N 48.73.
Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-d6, δ, м.д.): 7.23 (с, 3H, CH3 в 4-метилимидазол-1-иле); 8.78,
7.74 (оба с, по 1 H, H(2) и H(5) в 4-метилимидазол-1-иле); 8.64 (м, 2 Н, в имидазолильном
цикле).
Пример 2
3-(3,5-Диметилпиразол-1-ил)-6-(пропилтио)имидазо [1,2-b] [1,2,4,5] тетразин
25
30
35
40
45
К раствору 215 мг (1.0 ммоль) 3-(3,5-диметилпиразол-1-ил)имидазо[1,2-6][1,2,4,5]
тетразина в 7 мл ацетонитрила добавляют 91.2 мг (1.2 ммоль) пропилмеркаптана и 101
мг (1 ммоль) триэтиламина. Перемешивают 4 ч при комнатной температуре.
Растворитель упаривают, вещество экстрагируют бензолом, остаток после испарения
бензола перекристаллизовывают из гексана. Выход 205 мг (71%). Т.пл. 95-97°C. Найдено
(%): C 49.87; H 5.28; N 34.09. C12H15N7S. Вычислено (%): С 49.81; Н 5.23; N 33.88. Спектр
ЯМР 1Н (ДМСО-d6, δ, м.д.): 2.40, 2.71 (оба с, по 3 Н, 2 СН3 в 3,5-диметилпиразол-1иле); 3.11 (т, 2 Н, -CH2CH2CH3, J=7.3 Гц); 1.75-1.66 (м, 2 Н, -CH2CH2CH3; 1.06 (т, 3 Н,
-CH2CH2CH3, J=7.3 Гц); 6.17 (с, 1 Н, Н(4) в 3,5-диметилпиразол-1-иле); 8.39 (с, 1 H, CH
в имидазолильном цикле).
Пример 3. Противоопухолевая активность
В экспериментах использовали линии клеток НСТ116 (аденокарцинома толстой
кишки человека) и лейкоза К562, полученные из международного банка American Туре
Culture Collection, США. Реагенты приобретали в компании ПанЭко, кроме отдельно
оговоренных случаев. Клетки культивировали в среде, модифицированной Дульбекко
среде. Игла с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина,
100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина при 37°C, 5% CO2 в увлажненной
атмосфере. В экспериментах использовали культуру в логарифмической фазе роста.
Клетки рассевали на 96-луночные планшеты (Costar, США) в концентрации 5-10×103
клеток в 190 мкл культуральной среды. В лунки вносили исследуемые соединения до
Стр.: 4
RU
5
10
15
2 527 258 C1
конечных концентраций от 100 нМ до 50 мкМ или соответствующие количества
растворителя (вода+диметилсульфоксид; контроль). Объем вносимых веществ не
превышал 5% объема среды в лунках. Каждую концентрацию препарата изучали в 3
повторностях. Культуры инкубировали при 37°C в атмосфере с 5% содержанием CO2
в течение 72 часов. По окончании инкубации в лунки вносили 20 мкл водного раствора
МТТ (Sigma, США), и планшеты помещали в CO2-инкубатор на 2 часа. О
жизнеспособности клеток судили по цветной реакции, развивающейся при
восстановлении МТТ в формазан дегидрогеназами митохондрий (МТТ-тест). Окраску
регистрировали на спектрофотометре при длине волны возбуждения 540 нм. Оптическую
плотность в лунках, где клетки инкубировались только с растворителем (контроль),
принимали за 100%. Показатели оптической плотности в лунках с каждой концентрацией
испытуемых препаратов усредняли и вычисляли процент выживших клеток при той
или иной концентрации исследуемого вещества.
Результаты измерений приведены в таблице 1.
Таблица 1
Цитотоксичность соединений для линий опухолевых клеток человека
IC50, мкМ
№
Соединение
НСТ116
К562
1
2,2±0,12
1,2±0,2
2
1,8±0,1
2,0±0,3
Аналог А
5,8±0,5
6,2±0,4
20
25
30
35
40
45
Формула изобретения
1. Имидазо[1,2-b][1,2,4,5]тетразины общей формулы I:
Стр.: 5
RU
2 527 258 C1
5
10
где: Het=4-метилимидазол-1-ил, R=Н или
Het=3,5-диметилпиразол-1-ил, R=пропилтио.
2. Противоопухолевые агенты, представляющие собой соединения формулы I, где
Het=4-метилимидазол-1-ил, R=Н или Het=3,5-диметилпиразол-1-ил, R=пропилтио.
15
20
25
30
35
40
45
Стр.: 6