dickeya dianthicola # новый дл“ россии бактериальный патоген

hƒ"е“2, Šqu`, "/C3“* 3, 2010 г%д
rdj:632.3:633.491:579.842
DICKEYA DIANTHICOLA # mnb{i dk“ pnqqhh a`jŠeph`k|m{i
o`Šncem j`pŠntek“
`.m. j`pknb1, b.q. gnŠnb3, }.x. oeuŠepeb`3, e.b. l`Šbeeb`3,
t.q. df`khknb1, h.`. teqemjn2, c.h. j`pknb2, `.m. hcm`Šnb4
(1 k=K%!=2%!, ƒ=?,2/ !=“2е…,L; 2 0е…2! м%ле*3л !…%L K,%2е.…%л%г,,
pc`r $ lqu` ,ме…, j.`. Š,м,! ƒе"=; 3 bmhh -,2%C=2%л%г,, p`m;
4
0е…2! &a,%,…›е…е!, [ p`m)
o!%"еде…% ,ƒ3че…,е ",д%"%г% “%“2="= -,2%C=2%ге……/. Cе*2%л,2,че“*,.
K=*2е!,L, C%!=›=ю?,. “2еKл, , *л3K…, *=!2%-ел . b/деле……/е ,ƒ %K!=ƒц%" C%!=›е……%г% *=!2%-ел ш2=мм/ K=*2е!,L K/л, ,де…2,-,ц,!%"=…/
д% ",д= , C%д",д= “ C%м%?ью %“…%"…/. K,%.,м,че“*,. 2е“2%" , o0p-=…=л,ƒ=
“% “Cец,-,ч…/м, C!=Lме!=м,. o!, =…=л,ƒе %K!=ƒц%" ,ƒ k,Cец*%L %Kл. "Cе!"/е " p%““,L“*%L tеде!=ц,, “!ед, "%ƒK3д,2елеL че!…%L …%›*, , м%*!%L г…,л, *=!2%-ел K/л, "/деле…/ ш2=мм/ -,2%C=2%ге……/. K=*2е!,L, %2…%“ ?,е“
* !%д3 Dickeya, ,де…2,-,ц,!%"=……/е C% C%“лед%"=2ель…%“2 м ге…%" pelB, dnaX
, “Cе*2!3 AFLP *=* D. dianthicola.
j+>7%";% 1+." : че!…= …%›*= *=!2%-ел , Dickeya dianihicola, o0p, `FLP.
t,2%C=2%ге……/е Cе*2%л,2,че“*,е
K=*2е!,, "/ƒ/"=ю2 …=,K%лее "!ед%…%“…/е K%леƒ…, *=!2%-ел # че!…3ю …%›*3 , м%*!3ю г…,ль [2]. nK/ч…/L "%ƒK3д,2ель # Pectobacterium
carotovorum ,мее2 д"= C%д",д=, *%2%!/е "/ƒ/"=ю2 C!е,м3?е“2"е……% че!…3ю …%›*3 3 "еге2,!3ю?,. !=“2е…,L *=!2%-ел , м%*!3ю г…,ль *л3K…еL "еге2,!3ю?,. !=“2е…,L (P. carotovorum ssp. atrosepticum (Pca))
,л, г…,ль *л3K…еL *=!2%-ел C%“ле
3K%!*, 3!%›= (P. carotovorum ssp.
carotovorum (Pcc)) [15]. b,д, !=…ее
,ƒ"е“2…/L *=* Erwinia “hrysanthemi,
"/ƒ/"=л *=* “%“3д,“2%е C%!=›е…,е
!=“2е…,L *=!2%-ел " C%ле (че!…3ю
…%›*3), 2=* 3" д=…,е , г…,ль ш,!%-
*%г% *!3г= “.-.. , де*%!=2,"…/. !=“2е…,L " !ег,%…=. “ ›=!*,м *л,м=2%м.
b 2005 г. " !еƒ3ль2=2е ,ƒ3че…, *%мCле*“= -,ƒ,%л%г,че“*,. , м%ле*3л !…/. C!,ƒ…=*%" .2, K=*2е!,, Cе!е…е“е…/ " …%"/L !%д Dickeya, "*люч=ю?,L 6 ",д%" (2=Kл. 1) [11].
b 1990-е г%д/ Dickeya spp. (Dsp)
!=“C!%“2!=…,л“ " “2!=…=. g=C=д…%L (bел,*%K!,2=…, , m,де!л=…д/),
qе"е!…%L (t,…л …д, , d=…, , x"ец, ), b%“2%ч…%L e"!%C/ (o%льш=,
bе…г!, ) , “2!=…=. aл,›…ег% b%“2%*= (Š3!ц, , hƒ!=,ль), ч2%, "е!% 2…%,
%KA “… е2“ *л,м=2,че“*,м, ,ƒме…е…, м, " qе"е!…%м o%л3ш=!,,. o%2е!, %2 .2%г% C=2%ге…= " m,де!л=…д=.,
“" ƒ=……/е 2%ль*% “ "/K!=*%"*%L ƒ=-
p=K%2= "/C%л…е…= C!, -,…=…“%"%L C%дде!›*е tеде!=ль…%г% =ге…2“2"= C% %K!=ƒ%"=…,ю " !=м*=. t0o &m=3ч…/е , …=3ч…%-Cед=г%г,че“*,е *=д!/ ,……%"=ц,%……%L p%““,,[,
г%“3д=!“2"е……/L *%…2!=*2 o2380 &l%ле*3л !…%-ге…е2,че“*= %це…*= "…32!,",д%"%г%
C%л,м%!-,ƒм= "%ƒK3д,2елеL K=*2е!,=ль…/. K%леƒ…еL *=!2%-ел [.
134
Таблица 1
Список оригинальных и коллекционных штаммов бактерий родов Pectobacterium
и Dickeya, использованных в работе
Штамм
Растение-хозяин
Географическое
происхождение
Биовар /
реакция
с ADE1/2
Вид
201-3,
204-3
D8, D9,
D17, D33
2115
2116
2117
Zea mays
Краснодарский край
?/+
Solanum tuberosum
Липецкая обл.
?/+
Dahlia sp.
S. tuberosum
Parthenium argenatum
Румыния, 1962
Франция, 1975
США, 1945
А
7
6
2118
Chrysanthemum
США, 1958
5
2119
Helianthus annuus
Франция, 1986
5
2120
Pelargonium capitatum
3
2121
2122
2124
2125
2126
2127
2128
2129
2131
2132
3
А
2
2
2
4
4
A
3
3
D. dadantii
D. dadantii
D. dieffenbachiae
D. dieffenbachiae
D. dieffenbachiae
D. paradisiacal
D. paradisiacal
D. paradisiacal
D. zeae
D. zeae
2133
Ananas comosus
Ipomea batatas
Dieffenbachia sp.
Dieffenbachia sp.
Lycopersicon esculentum
Musa paradisiacal
Zea mays
Musa paradisiacal
Zea mays
Chrysanthemum
morifolium
Ananas comosus
Коморские острова,
1960
Малайзия, 1961
Куба, 1987
Франция, 1972
США, 1957
Куба, 1987
Колумбия, 1968
Куба, 1987
Колумбия, 1970
США, 1970
США, 1970
D. dianthicola
D. dianthicola
D. chrysanthemi bv.
parthenii
D. chrysanthemi bv.
chrysanthemi
D. chrysanthemi bv.
Chrysanthemi
D. dadantii
3
D. zeae
2094
S. tuberosum
3
D. solani
2222
S. tuberosum
3
D. solani
Франция, Мартиник,
1991
Финляндия, 2005,
04V043k, w0443 k
Нидерланды, 2007
!=›е……%г% “еме……%г% *=!2%-ел , “%“2=",л, " 2007 г. K%лее 25 мл… е"!%, =
C! м/е C%2е!, 3!%›= *=!2%-ел #
K%лее 15 мл… е"!% [13]. oе!"%…=ч=ль…% …=,K%лее ч=“2% "“2!еч=ю?,м“
C=2%ге…%м .2%г% !%д= K/л D. dianthicola, "/ƒ/"="ш,L медле……%е 3" д=…,е !=“2е…,L " C%ле. b C%“лед…,е г%д/
,ƒ !=“2е…,L *=!2%-ел “ “,мC2%м=м,
2,C,ч…%L че!…%L …%›*, K/л= "/деле…= …%"= г!3CC= K=*2е!,L, 3“л%"…%
…=ƒ"=……= D. &solani[. qч,2=е2“ , ч2%
Dsp ме…ее ›,ƒ…е“C%“%K…= " C%ч"е C%
Pectobacterium carotovorum subsp. atrosepticum
D. dianthicola
“!="…е…,ю “ Pcc , Pca, …% %…= "/›,"=е2 , !=ƒм…%›=е2“ " !еч…%L "%де
" =““%ц,=ц,, “ "%д%!%“л м,. p=…ее
Dsp "/дел л, ,ƒ !=“2е…,L *3*3!3ƒ/ " j!=“…%д=!“*%м , q2="!%C%ль“*%м *!= . [1]. b 2009 г. " !еƒ3ль2=2е
=…=л,ƒ= C%!=›е……/. че!…%L …%›*%L
, м%*!%L г…,лью %K!=ƒц%" ,ƒ k,Cец*%L %Kл. …=м, "Cе!"/е K/л, "/деле…/
ш2=мм/ -,2%C=2%ге……/. K=*2е!,L,
%2…%“ ?,е“ * !%д3 Dickeya, *%2%!/е
" .%де !=K%2/ K/л, ,де…2,-,ц,!%"=…/ *=* D. dianthicola.
135
l=2е!,=л/ , ме2%д/
b/деле…,е , .!=…е…,е ш2=мм%"
hƒ C%!=›е……/. %K!=ƒц%" *=!2%-ел , C%л3че……/. ,ƒ k,Cец*%L %Kл.,
C!%"%д,л, "/деле…,е K=*2е!,L …=
*=!2%-ель…/L =г=! (j`) “ ге…ц,=…",%ле2%м , …= “!ед3 k%г=…= " ч=ш*=. oе2!, [12]. )=ш*, ,…*3K,!%"=л,
" 2е!м%“2=2е " 2ече…,е 2$4 “32. C!,
280q. hƒ%л,!%"=л, *%л%…,,, %*=Lмле……/е ƒ%…%L !=ƒ›,›е…, Cе*2=2…%г% гел . a=*2е!,=ль…/е “3“Cе…ƒ,, ,ƒ%л 2%" .!=…,л, " 15%-м гл,це!,…е C!, $700q. nC!еделе…,е
-е…%2,C,че“*,. “"%L“2" C!%"%д,л,
“%гл=“…% ме2%д=м, %C,“=……/м " ме2%д,че“*%м !3*%"%д“2"е C% ,де…2,-,*=ц,, -,2%C=2%ге……/. K=*2е!,L
[2]. o=2%ге……%“2ь "/деле……/. *3ль23! %це…,"=л, C% “C%“%K…%“2, "/ƒ/"=2ь м г*3ю г…,ль л%м2,*%" *=!2%-ел . b/деле…,е dmj ,ƒ K=*2е!,L
C!%"%д,л, “ C%м%?ью …=K%!= &o!%K=cq[ (&dmj-2е.…%л%г, [, l%“*"=) “%гл=“…% !е*%ме…д=ц, м C!%,ƒ"%д,2ел . dл ге…е2,че“*%L .=!=*2е!,“2,*, "/деле……/. ш2=мм%" C!%"%д,л, o0p “ C!=Lме!=м, ADE1/ADE2,
“Cец,-,ч…/м, * -!=гме…23 ге…=
pelB Dickeya spp. [4], , “ C!=Lме!=м, dnaXF/ dnaXR, “Cец,-,ч…/м, * -!=гме…23 ге…= dnaX [13]. dл
o0p ,“C%льƒ%"=л, 5x MasterMix
(d,=л=2 л2д, l%“*"=). ŠемCе!=23!…%"!еме……%L C!%-,ль дл C!=Lме!%"
ADE1/ADE2 “%“2="л л: …=ч=ль…=
де…=23!=ц, # 950C 9 м,…, C%“лед3ю?,е 25 ц,*л%" # 940C 1 м,… , 720C
2 м,…; ƒ="е!ш=ю?= .л%…г=ц, #
720C 8 м,…. dл C!=Lме!%" dnaXF/
dnaXR …=ч=ль…= де…=23!=ц, 940C
3 м,…, 35 ц,*л%", "*люч= де…=23!=ц,ю # 940C 1 м,…, %2›,г # 590C
1 м,…, , .л%…г=ц,ю # 720C 2 м,…; ƒ="е!ш=ю?= .л%…г=ц, # 720C 5 м,….
o%“ле C!%"еде…, o0p C!%"%д,л, C! м%е %C!еделе…,е C%“лед%"=2ель…%“2, dmj =мCл,-,ц,!%"=……/.
-!=гме…2%" ге…%" pelB , dnaX “ C%м%?ью ="2%м=2,че“*%г% “е*"е…=2%136
!= ABI-3130XL. dл “!="…е…, ,“C%льƒ%"=л, dmj *%лле*ц,, ш2=мм%"
Dickeya, люKеƒ…% C!ед%“2="ле……/.
д-!%м b=… де! b%ль-%м (van der Volf)
(Plant Research Intern ation al (IPO),
Wageningen, the Netherlands) (“м.
2=Kл. 1). dл %C!еделе…, ",д= "…%"ь
"/деле……/. ш2=мм%" %це…,"=л, “2еCе…ь C! м%г% “.%д“2"= dmj. t,л%ге…е2,че“*%е де!е"% “2!%,л, ме2%д%м
Kл,›…ег% “%“ед= [10] “ C%м%?ью C!%г!=мм/ MEGA4.0 [14]. d%“2%"е!…%“2ь
C%“2!%е……%г% де!е"= %C!едел л, ме2%д%м K32“2!еC= [6].
nце…*= ме›",д%"%г%
, "…32!,",д%"%г% !=ƒ…%%K!=ƒ,
K=*2е!,L ме2%д%м AFLP
dmj "…%"ь "/деле……/. , 2,C%"/. ш2=мм%" Dickeya sp. !=ƒ!еƒ=л,
“ C%м%?ью !е“2!,*2=ƒ XbaI , NotI
, л,г,!%"=л, “ =д=C2е!=м,, *%мCлеме…2=!…/м, “=L2=м !е“2!,*ц,,, *=*
K/л% %C,“=…% !=…ее [9]. o%“лед3ю?3ю
o0p C!%"%д,л, " %KAеме !е=*ц,%……%L
“ме“, 25 м*л, "*люч= : 1. K3-е!
дл C%л,ме!=ƒ/ BioTaq, 5 …l dNTP,
50 …г dmj-м=2!,ц/, 12.5 C*l C!=Lме!= , 1.25 ед. BioTaq (&d,=л=2 kŠd[,
p%““, ). dл =мCл,-,*=ц,, ,“C%льƒ%"=л, “лед3ю?,L 2емCе!=23!…%"!еме……%L C!%-,ль: Cе!"/L ц,*л #
940q 3 м,….; C%“лед3ю?,е 35 ц,*л%" # 940q 30 “, 370q 40 “ , 720q
1 м,…; %*%…ч=2ель…= .л%…г=ц, #
7 м,… C!, 720q. o!%д3*2 =мCл,-,*=ц,, =…=л,ƒ,!%"=л, .ле*2!%-%!еƒ%м
" =г=!%ƒ…%м геле , д%*3ме…2,!%"=л, C!, C%м%?, “,“2ем/ UVP GelDoc
(bел,*%K!,2=…, ).
m=л,ч,е ,л, %2“32“2",е AFLP-!=гме…2%" 3 %2дель…/. ш2=мм%"
3ч,2/"=л, *=* 1 ,л, 0 “%%2"е2“2"е……%, , C%C=!…%е -е…е2,че“*%е !=““2% …,е ме›д3 ш2=мм=м, %C!едел л, C%
C%*=ƒ=2елю, !="…%м 1 # *%.--,ц,е…2 *%!!ел ц,, o,!“%…=.
pеƒ3ль2=2/ , ,. %K“3›де…,е
p=“2е…, *=!2%-ел “ 2,C,ч…/м,
“,мC2%м=м, че!…%L …%›*, , м%*!%L
K=*2е!,=ль…%L г…,л, K/л, C%л3че…/ ,ƒ …е“*%ль*,. .%ƒ L“2" k,Cец*%L
%Kл. ле2%м 2009 г. b !еƒ3ль2=2е "/деле…,
K=*2е!,L ,ƒ C%!=›е……/.
*л3K…еL *=!2%-ел …= “!ед3 j` “
ге…ц,=…",%ле2%м
*%л%…,,
,мел,
“Cец,-,че“*,L ",д, = ,ме……% # “г3“2%* Kлед…%-Kел%г% ц"е2= " це…2!е
“ C!%ƒ!=ч…%L “л,ƒ,“2%L *=Lм%L. Š=*
*=* Cе*2%л,2,че“*,е K=*2е!,, !=ƒ›,›=ю2 Cе*2=2…/L гель, 2% ,ƒ%л,!%"=л, *%л%…,,, -%!м,!3ю?,е 3гл3Kле…, " “!еде k%г=…=. a/л% "/деле…% , ,ƒ3че…% C% -,ƒ,%л%г,че“*,м
д,=г…%“2,че“*,м C!,ƒ…=*=м 134 ,ƒ%л 2=. b/деле……/е K=*2е!,, " %“…%"…%м C!,…=дле›=л, Pcc (K%лее 60%),
…% ! д ,ƒ%л 2%" %Kл=д=л .=!=*2е!…/м, дл Dsp м%!-%л%г,че“*,м, ,
-,ƒ,%л%г,че“*,м, C!,ƒ…=*=м, [11]
(2=Kл. 2).
b“е ,““лед3ем/е ш2=мм/ K/л,
C!%"е!е…/ …= ,. “C%“%K…%“2ь "/ƒ/"=2ь “"е!.ч3"“2",2ель…3ю !е=*ц,ю
(qb)) …= л,“2ь . 2=K=*=. x2=мм=м,
“ C%л%›,2ель…%L qb)-!е=*ц,еL K/л,
,…%*3л,!%"=…/ л%м2,*, *=!2%-ел .
b“е ,““лед3ем/е ш2=мм/ K/л, C=2%ге……/м, дл .2,. !=“2е…,L-.%ƒ е",
…% ,. =г!е““,"…%“2ь K/л= !=ƒл,ч…%L.
o!,…=дле›…%“2ь K=*2е!,L * !%д3
Dickeya K/л= C%д2"е!›де…= =мCл,-,*=ц,еL " o0p, “Cец,-,ч…/. дл
.2%г% !%д= -!=гме…2%" “ C!=Lме!=м,
ADE1/2.
`…=л,ƒ C%“лед%"=2ель…%“2еL -!=гме…2%" ге…= dnaX C%*=ƒ=л "/“%*%е
“.%д“2"% ш2=мм%" D8, D9, D17 ,
D33 , 2,C%"/. *3ль23! D. dianthicola
(!,“. 1). o%“лед%"=2ель…%“2, !=ƒл,ч=л,“ь 2%ль*% " %д…%L C%ƒ,ц,, “е*"е…,!%"=……%г%
-!=гме…2= дл,…%L
464 C.%. p=ƒл,ч, C%“лед%"=2ель…%“2еL dmj .2%г% ге…= “% ш2=мм=м,
д!3г,. ",д%" " “!ед…ем “%“2="л л, 5%, …% …=,K%лее Kл,ƒ*%L г!3CC%L
K/л= D. &solani[ (д% 3% !=ƒл,ч,L).
r ! д= 2,C%"/. ш2=мм%" Dickeya …е
K/л C%л3че… %›,д=ем/L C!%д3*2 =мCл,-,*=ц,, c C!=Lме!=м, ADE1/2
(“м. 2=Kл. 1). `…=л,ƒ C%“лед%"=2ель…%“2, ге…= pelB, =мCл,-,ц,!3ем%L
.2,м, д,=г…%“2,че“*,м, C!=Lме!=м,, "/ ",л K%лее "/“%*3ю “2еCе…ь
C%л,м%!-,ƒм= (д% 10% !=ƒл,ч,L),
ч2% %K3“л%"ле…% …=л,ч,ем …е“*%ль*,. л%*3“%" , =ллель…/. "=!,=…2%"
,ƒ3ч=ем%г% ге…=.
`…=л,ƒ C%л3че……/. “Cе*2!%" AFLP-!=гме…2%" C%д2"е!д,л C!,…=дле›…%“2ь ш2=мм%" D8, D9, D17 , D33,
"/деле……/. ,ƒ *=!2%-ел " k,Cец*%L %Kл. * ",д3 D. dianthicola (!,“. 2),
" 2% "!ем *=* !=…ее "/деле……/е ,ƒ
C%д“%л…еч…,*= ш2=мм/ 201 , 204, C%л%›,2ель…% !е=г,!%"="ш,е “ д,=г…%“2,че“*,м, C!=Lме!=м, ADE1/2, …е
,мел, =…=л%г%" “!ед, 2,C%"/. *3ль23! 6 ",д%" , г!3CC/ D. &solani[ , C%
C%“лед%"=2ель…%“2, -!=гме…2= ге…=
Таблица 2
Основные диагностические признаки штаммов бактерий Dikeya spp. из Липецкой обл.
Тест
Штамм
3
32
33
35
36
D8
D9
D17
D33
РСЧ
ПЦР ADE1/2
синтез
индола
рост на среде
Логана
пектолитическая
активность
образование
редуц. сахаров
+
+
+
+
+
+
+
+
+
–
–
–
–
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
–
–
–
–
–
–
–
–
–
137
D8
D9a
100
D17a
D. dianthicola
D9b
D. dianthicola_2116
74
D33
D17b
2094
95
100
2222
100
2124
2125
89
79
D. solani
D. dieffenbachiae
2126
100
2120
81
2122
D. dadantii
2117
100
2118
100
D.chrysanthemi
2119
2133
100
2131
73
D.zeae
2132
2128
100
2127
67
D. paradisiacal
2129
201
100
204
Рис. 1. Филогенетическое дерево для последовательности фрагмента гена dnaX 23 штаммов
Dickeya sp. и 2 штаммов Pectobacterium carotovorum sbsp. atrosepticum (201 и 204),
построенное методом ближнего соседа, (NB) с помощью программы MEGA4.
Достоверность топологии дерева определена методом бутстрепа с 1000 повторений
dnaX K/л, “ K%льш%L д%леL "е!% 2…%“2, %2…е“е…/ * ",д3 Pectobacterium
carotovorum sbsp. =trosepticum (“.%д“2"% 97%) (“м. !,“. 1). q!="…е…,е “Cе*2!%" AFLP (“м. !,“. 2) 2=*›е C%*=ƒ=л%
K%льш3ю Kл,ƒ%“2ь "…%"ь "/деле……/.
ш2=мм%" ,ƒ k,Cец*%L %Kл. * D. dianthicola (“!ед…ее !=““2% …,е 0,12), чем
* д!3г,м ",д=м !%д= Dickeya (“!ед…ее
!=““2% …,е 0,56).
138
D. dianthicola %K/ч…% "/ƒ/"=е2
медле……%е 3" д=…,е !=“2е…,L, “%C!%"%›д=ю?ее“ "…32!е……,м …е*!%ƒ%м
“2еKл , = "C%“лед“2",, 3“/.=…,ем
,…-,ц,!%"=……%г% “2еKл . b %2л,ч,е
%2 .2,. “,мC2%м%" C!,ƒ…=*, ƒ=!=›е…, D. &solani[ K%льше “.%д…/ “ “,мC2%м=м, 2,C,ч…%L че!…%L …%›*,, "/ƒ"=……%L Pca, 2.е. 3" д=…,е м%›е2 K/2ь
K/“2!/м “ че!…%L м г*%L г…,лью,
(а)
(b)
Рис. 2. Оценка межвидового и внутривидового разнообразия Dickeya методом AFLP
c использованием рестриктаз XbaI и NotI.
(a) 1–4 штаммы D. dianthicola 2116, D8, D9, D17, 5 и 6 — P. carotovorum sbsp. atrosepticum 204
и 201, М — Маркер Dialat M1kb, (b) 1 и 2 — D. solani 2094 и 2222, 3–5 — D. zeae 2131-2133;
6 –8 — D. paradisiaca 2127-2129; 9 — D. dieffenbachiae 2124; 10–12 — D. dadantii 2120-2122;
13–15 — D. chrysanthemi bv. parthenii 2117-2119; 16 и 17 — D. dianthicola 2115 и 2116;
М — Маркер Dialat M1kb
!=ƒ","=ю?еL“ ""е!. C% “%“3д,“2%L
“,“2еме %2 ,…-,ц,!%"=……%г% *л3K… . D. dianthicola , D. &solani[ K%льше
=д=C2,!%"=…/ * 2еCл%L C%г%де, чем
Pca , C%.2%м3 !=……
2еCл= C%г%д=,
*%2%!= 3“2=…%",л=“ь " `…гл,, " 2007
, 2009 гг., C!,"ел= * “,ль…%м3 C%!=›е…,ю D. &solani[ *=!2%-ел " C%ле ,
* м%ме…23 3K%!*, ƒ…=ч,2ель…= ч=“2ь
*л3K…еL …%"%г% 3!%›= ,мел, “,мC2%м/ K=*2е!,=ль…%г% ƒ=г…,"=…, [5].
Dickeya C%!=›=е2 2=*›е ц"е2%ч…/е л3*%",ч…/е !=“2е…, , " ч=“2…%“2,, “,ль…% “2!=д=е2 г,=ц,…2. Š=*, "
2007 г. C%2е!, %2 .2%г% C=2%ге…= C!,
"/!=?,"=…,, л3*%",ч…/. " c%лл=…д,, “%“2=",л, 15 мл… е"!%. q 3че2%м
ƒ…=ч,м%“2, .2%L C!%Kлем/ " c%лл=…д,, 32"е!›де…= ,““лед%"=2ель“*=
C!%г!=мм=, C%“" ?е……= ,ƒ3че…,ю
C=2%ге…%" Dickeya, " !=ƒме!е 7,5 мл…
е"!%, *%2%!= K3де2 -,…=…“,!%"=2ь“
ƒ= “че2 г%“3д=!“2"е……%г% Kюд›е2= ,
C!%,ƒ"%д“2"е……/. *%мC=…,L [5].
Š=*,м %K!=ƒ%м, " C%C3л ц,, "%ƒK3д,2елеL че!…%L …%›*,, "/деле……/. ,ƒ *=!2%-ел " k,Cец*%L %Kл.,
…=м, "Cе!"/е K/л, %K…=!3›е…/
ш2=мм/ …%"%г% дл p%““,L“*%L tеде!=ц,, %C=“…%г% C=2%ге…= *=!2%-ел
D. dianthicola. dл 3че2= !=“C!%“2!=…е……%“2, .2%г% "%ƒK3д,2ел , %це…*,
"%ƒм%›…%г% .*%…%м,че“*%г% 3?е!K=
2!еK3ю2“ д=ль…еLш,е ,““лед%"=…, .
a,Kл,%г!=-,че“*,L “C,“%*
1. l=2"ее"= e.b., hг…=2%" `.m. a=*2е!,%ƒ/ *=!2%-ел / b “K.: h…2ег!,!%"=……= “,“2ем= ƒ=?,2/ *=!2%-ел %2 -,2%-2%!%ƒ=, г!,K…/., ",!3“…/. , K=*2е!,=ль…/. K%леƒ…еL. l., 2007. q. 16$27.
139
2. Bradbury J.F. Guide to plant pathogenic bacteria. Wallingford, UK: CABI. 1986.
3. Chatterjee A.Y., Liu Y., Chatterjee A.K. Nucleotide sequence of pectate
lyase structural gene, pel 1 of Erwinia carotovora subsp. atroseptica strain71 and
relationshi p of pel 1 with other pel genes of Erwinia species // MRMI, 1995. V.8,
1 1. P. 92$95.
4. Darrasse A., Priou S., Kotoujansky A., Bertheau Y. PCR and restriction fragment length polymorphism of a pel gene as a tool to identify Erwinia carotovora in
relation to potato diseases // Appl. Environ.Microbioology, 1994. V. 60. P. 1437$1443.
5. Elphinstone J. Erwinia chrysanthemi (Dickeya spp.) update // Plant Clinic
News, 2009. No. 8.
6. Felsenstein J. Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap
// Evolution, 1985. V. 39. P. 783$791.
7. Grabe G., van der Wolf J.M. Biochemical and genetical an alysis reveal a
new clade of biovar 3 Dickeya spp. strains isolated from potato in Europe // European
Journ al of Plant Pathology, 2009. V.125. P. 245$261.
8. Hoepelman A., de Neeling A.J., Bonten M.J.M. Epidemic and Nonepidemic
Multidrug-Resistant Enterococcus faecium // Emerging Infectious Diseases, 2003
Vol. 9. No.9. P. 1108$1115.
9. Leavis H.L., Willems R.J.L., Top J., Spalburg E., Mascini E.M., Fluit A.C., Perombelon M.C.M., Kelman A. Ecology of the soft$rot erwinias // Ann. Rev.
Phytopathology., 1980. V. 18. P. 361$387.
10. Saitou N., Nei M. The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees // Molecular Biology and Evolution, 1987. V. 4.
P. 406$425.
11. Samson R, Legrandre J.B, Christen R, Fischer-Le Saux M., Achouak W.,
Gardan L. Transfer of Pectobacterium chrysanthemi (Burkholder et al., 1953)
Brenner et al. (1973) and Brenneria paradisiaca to the genus Dickeya gen. nov. as
Dickeya chrysanthemi comb. nov. and Dickeya paradisiaca comb. nov. and delineation
of four novel species, Dickeya dadantii sp. nov., Dickeya dianthicola sp. nov.,
Dickeya dieffenbachiae sp. nov. and Dickeya zeae sp. nov.Intern ation al // Journ al of
Systematic and Evolution ary Microbiology, 2005. V.55. P. 1415$1427.
12. Schaad N.W., Jones J.B., Lacy G.H. Laboratory guide for the identification of
plant pathogenic bacteria. 3rd edition. St. Paul, Minnesota // American
Phytopathological Society, 2001.
13. Sławiak M., van Beckhoven J.R.C.M., Speksnijder A.G.C.L., Czajkowski R.,
Stanghellini M.E., Meneley J.C. Identification of soft$rot Erwinia associated with
blackleg of potato in Arizon a // Phytopathology, 1975. V.65. P. 86$87.
14. Tamura K., Dudley J., Nei M., Kumar S. MEGA4: Molecular Evolution ary
Genetics An alysis (MEGA) software version 4.0. Molecular Biology and Evolution,
2007. 10.1093/molbev/msm092.
15. Thompson S., Hilderbrand D.C., Schroth M.N. Identification and nutrition al differentiation of the Erwinia sugar beet pathogen from members of Erwinia
carotovora and Erwinia chrysanthemi // Phytopathology, 1981. V.71. P. 1037$1042.
pеце…ƒе…2 # д. K. …. `.`. q%л%"ье"
SUMMARY
Research into species composition of phytopathogenic pectolytic bacteria, affecting
both stems and potato tubers, has been done. Strains of bacteria, secured from
affected potato samples, have been identified as both species and subspecies, by
means of basic biochemical tests and PCR-an alysis with specific primers. It is the
first time in Russian Federation, when an alyzing samples from Li petsk region, among
140
causative agents of both black stem and wet rot, phytopathogenic bacteria strains
have been secured, the bacteria belonging to Dickeya type, identified according to
sequences of genes pelB, dn aX and AFLP spectrum as D. dianthicola.
Key words: black stem (blackleg) of potato, Dickeya dianthicola PCR, AFLP.
j=!л%" `ле*“=…д! m,*%л=е",ч # =“C. л=K%!=2%!,, ƒ=?,2/ !=“2е…,L pc`r $
lqu` ,ме…, j.`. Š,м,! ƒе"=. Šел. 976-12-79. }л. C%ч2=: [email protected]
g%2%" b=“,л,L qе!гее",ч # =“C., bmhh -,2%C=2%л%г,, p`qum.
Šел. 8 (498) 694-09-04. }л. C%ч2=: [email protected]
oе.2е!е"= }!…= x=!,-%"…= # *. K. …., bmhh -,2%C=2%л%г,, p`qum.
Šел. 8 (498) 694-09-04. }л. C%ч2=: [email protected]
l=2"ее"= e"ге…, bл=д,м,!%"…= # *. K. …., bmhh -,2%C=2%л%г,, p`qum.
Šел. 8 (498) 694-09-04. }л. C%ч2=: [email protected]
d›=л,л%" tе"ƒ, qе,д-rме!%",ч # д. K. …. Šел. 976-12-79.
}л. C%ч2=: [email protected]
tе“е…*% hг%!ь `ле*“=…д!%",ч # *. K. …. Šел. 977-70-01.
j=!л%" cе……=д,L hль,ч # *. K. …. Šел. 977-70-01.
}л. C%ч2=: [email protected]
hг…=2%" `ле*“=…д! m,*%л=е",ч # д. K. …., 0е…2! &a,%,…›е…е!, [ p`m.
Šел. +7 (916) 671-21-47. }л. C%ч2=: An.ign [email protected]
141