close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

Парки и скверы проверят «народные» инспекторы;pdf

код для вставкиСкачать
Инструкция по применению «Комплекта реагентов для
выделения РНК из сыворотки или плазмы крови» (кат.№0221)
Состав комплекта (на 100 образцов):
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Раствор 1 ----------------------------------------------------------------------------------- 45 мл
Раствор 2 ----------------------------------------------------------------------------------- 40 мл
Раствор 3 ---------------------------------------------------------------------------------- 100 мл
Раствор 4 ----------------------------------------------------------------------------------- 40 мл
Сорбент ------------------------------------------------------------------------------------ 3х1 мл
РНК-буфер -------------------------------------------------------------------------------- 5х1 мл
1. Взятие, доставка и хранение клинического материала.
2 мл венозной крови собрать в одноразовую пластиковую пробирку с 200 мкл раствора
антикоагулянта (0,05М раствор ЭДТА или 4% раствор цитрата натрия. Использовать
гепарин строго не рекомендуется!).
Внимание! При использовании для забора крови вакуумных пробирок с ЭДТА или
цитратом натрия дополнительное внесение антикоагулянта не требуется. При этом
объем крови, необходимый для исследования, заранее маркируется на пробирке в
соответствии с количеством антикоагулянта, помещенного в пробирку.
Неохлажденные пробы хранить при +2...+8 °С - не более 1 суток; не замораживать!
1. В пробирку типа «Эппендорф» внести 1 мл цельной крови. Если кровь
расслоилась в процессе хранения, то перед внесением ее необходимо
перемешать до однородности.
2. Закрыть пробирку и центрифугировать со скоростью 3000 об/мин в течение 5
минут при комнатной температуре. После центрифугирования кровь разделится на
плазму и форменные элементы. На поверхности осадка форменных элементов
расположен тонкий слой лейкоцитов.
3. Аккуратно, не захватив лейкоциты, перенести плазму в чистую пробирку.
Внимание! Сыворотку или плазму отделить от форменных элементов крови не позднее,
чем через 6 часов. В случае необходимости сохранения образцов для исследования
сыворотку или плазму хранить при температуре +2...+8 °С не более 72-х часов, для более
длительного хранения заморозить при -20°С. Замороженная сыворотка или плазма может
храниться в течение 1 месяца.
2. Порядок работы.
1. За 20-30 мин до начала работы растворы 1 и 2 для выделения РНК перенести в
комнатные условия до полного растворения кристаллов.
2. В пробирки на 1,5 мл внести по 450 мкл раствора 1.
3. В каждую пробирку внести по 100 мкл исследуемого образца, закрыть крышку и
тщательно перемешать на вортексе. Для осаждения капель с внутренней стороны
крышки отцентрифугировать пробирки в течение 3-5 сек на микроцентрифуге-вортексе.
4. Ресуспендировать сорбент, интенсивно перемешивая на вортексе. Добавить в каждую
пробирку отдельным наконечником по 25 мкл ресуспендированного сорбента.
5. Перемешать содержимое пробирок на вортексе, оставить на 1-2 мин при комнатной
температуре, повторно перемешать и оставить на 5 мин при комнатной температуре.
6. Отцентрифугировать пробирки в течение 30 сек при 10 тыс. об/мин на скоростной
центрифуге, удалить надосадочную жидкость из каждой пробирки отдельным
наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
7. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора 2, перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента, отцентрифугировать пробирки в течение 30 сек при 10 тыс.
об/мин на скоростной центрифуге, удалить надосадочную жидкость из каждой пробирки
отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
8. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора 3, перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента, отцентрифугировать пробирки в течение 30 сек при 10 тыс.
об/мин на скоростной центрифуге, удалить надосадочную жидкость из каждой пробирки
отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
9. Повторить отмывку раствором 3 (пункт 8).
10. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора 4, перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента, отцентрифугировать пробирки в течение 30 сек при 10 тыс.
об/мин на скоростной центрифуге, удалить надосадочную жидкость из каждой пробирки
отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
11. Поместить пробирки с открытыми крышками на 12-15 мин в термостат, нагретый до 60
°С.
12. Добавить в пробирки по 50 мкл РНК-буфера, перемешать содержимое пробирок на
вортексе до полного ресуспендирования сорбента.
13. Поместить пробирки на 2-3 мин в термостат, нагретый до 60 °С. Перемешать на
вортексе и осадить сорбент центрифугированием в течение 2 мин при максимальных
оборотах (12-14,5 тыс.об/мин). Использовать надосадочную жидкость для дальнейшего
анализа.
Внимание! Полученная РНК-проба хранению не подлежит, ОТ-ПЦР должна быть
проведена в течение 20-30 мин после выделения РНК.
3. Условия хранения и эксплуатации.
1. «Комплект реагентов для выделения РНК из сыворотки или плазмы крови» должен
храниться при температуре +2..+8 °С в течение всего срока годности. Срок годности
реагента - 6 месяцев.
2. Допускается хранение и транспортировка при температуре +18..+25°С.
3. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению.
По вопросам, касающимся качества реагентов, следует обращаться в ООО НПФ “Литех”
по адресу: 119435, г. Москва, ул. Малая Семеновская, д.3А, стр.2
телефон/факс: (495) 258-39-47; e-mail: [email protected]
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа