close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

Все о будущей;pdf

код для вставкиСкачать
ТИМОЛОВАЯ ПРОБА
Кат. №: 031.001 – 1000 мл
Набор реагентов для постановки тимоловой пробы,
позволяющей оценить устойчивость белков в сыворотке
крови турбидиметрическим методом.
Согласно стандартной процедуре анализа набор рассчитан на 330 определений.
ПРИНЦИП МЕТОДА
При взаимодействии сыворотки крови с тимолом в трисмалеатном буфере (рН 7,55) возникает помутнение, обусловленное образованием глобулино-тимоло-липидного
комплекса. Интенсивность помутнения, которая зависит от
количества и соотношения отдельных белковых фракций,
измеряется турбидиметрически при длине волны 650
(630-690) нм. Результаты измерений выражаются в единицах помутнения по Shank-Hoagland (ед. S-H).
ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ
Сыворотка крови без следов гемолиза.
Количество определений зависит
от характеристик используемого анализатора
и минимального рабочего объема кюветы.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
1. Построение калибровочного графика:
ПРОБИРКА
№:
РАБОЧИЙ Р-Р
СЕРНОЙ К-ТЫ, МЛ
КАЛИБРОВОЧН.
СУСПЕНЗИЯ СУЛЬФАТА
БАРИЯ, МЛ
ЕДИНИЦЫ
ПОМУТНЕНИЯ,
ЕД S-H
1
4.5
1.5
1.0
2
3.0
3.0
-
3
1.5
4.5
-
4
-
6.0
0.05
Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать в течение 30 минут при +18-25°С. Непосредственно перед измерением содержимое пробирок
еще раз перемешать и измерить величину оптической
плотности при длине волны 650 (630-690) нм в кювете
с длиной оптического пути 1 см против холостой пробы
(рабочего раствора серной кислоты).
2. Стандартная постановка тимоловой пробы:
ВНЕСИТЕ В ПРОБИРКУ:
СОСТАВ НАБОРА
Реагент №1. Концентрированный раствор тимола (21 мл).
Реагент №2. 2,5 моль/л серная кислота (11 мл).
Реагент №3. 48 ммоль/л барий хлористый (5 мл).
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К ПРОЦЕДУРЕ АНАЛИЗА
И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ
Тимоловый реактив:
В мерную колбу на 1000 мл налить примерно 900 мл дистиллированной воды и, при постоянном перемешивании,
пипеткой постепенно добавить 20 мл реагента №1, при
этом наконечник дозатора должен быть погружен в воду
в колбе. Раствор довести дистиллированной водой до
метки и тщательно перемешать. Готовый тимоловый
реактив стабилен в течение 3 месяцев при комнатной
температуре в плотно закрытой посуде. При появлении
осадка профильтровать через бумажный фильтр.
Рабочий раствор серной кислоты:
В мерную колбу на 250 мл налить 200 мл дистиллированной воды и, при постоянном перемешивании, пипеткой
постепенно добавить 10 мл реагента №2. Долить до
метки дистиллированной водой и перемешать. Перед
применением реагент должен быть охлаждён до +10°С.
Калибровочная суспензия сульфата бария:
В мерную колбу на 50 мл налить примерно 40 мл
охлаждённого до +10°С рабочего раствора серной
кислоты и, при постоянном перемешивании, пипеткой
постепенно добавить 1,5 мл реагента №3. При указанной
температуре размеры частиц преципитированного
сульфата бария дают относительно стабильный результат.
Раствор довести охлаждённым рабочим раствором
серной кислоты до метки и тщательно перемешивать.
Калибровочную суспензию сульфата бария необходимо
готовить непосредственно перед анализом, хранению не
подлежит.
Невскрытые реагенты стабильны не менее 24 месяцев
при температуре 18-25°С. Срок годности, серия и номер
набора по каталогу указаны на упаковке.
Тщательно закрывайте флаконы с реагентами после
каждого использования!
ОПЫТНАЯ
ПРОБА
ХОЛОСТАЯ
ПРОБА
БЛАНК ПРОБЫ
(для липемичных
сывороток)
0.05
Сыворотка, мл
0.05
-
Тимоловый реактив, мл
3.0
3.0
-
-
0.05
3.0
Физ. раствор, мл
Тщательно перемешать и инкубировать в течение 30
минут при 18-25°С. Непосредственно перед измерением
содержимое пробирок еще раз перемешать и измерить
величину оптической плотности при длине волны 650
(630-690) нм в кювете с длиной оптического пути 1 см
против холостой пробы. Если используется липемичная
сыворотка, то в качестве холостой пробы (бланк пробы)
используют пробу, содержащую 0,05 мл сыворотки и 3 мл
физиологического раствора.
Объёмы опытных проб и реагентов могут быть пропорционально изменены, соблюдая соотношение образец/
реагент - 1:60.
РАСЧЕТ
Величину помутнения определить по калибровочному
графику, где по оси абсцисс откладывают полученные
значения оптических плотностей, по оси ординат – соответствующие значения единиц помутнения.
При получении значений помутнения выше 20 ед. S-H,
анализируемый образец необходимо развести физраствором в соотношении 1:1, повторить анализ и полученный результат умножить на 2.
НОРМАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ
0 – 4 ед. S-H. Рекомендуется в каждой лаборатории
уточнить диапазон нормальных величин.
ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ:
Для приготовления тимолового реактива и для
постановки пробы использовать чистую посуду
без следов синтетических моющих средств, т.к.
они препятствуют развитию преципитата.
!
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Линейность – 20 ед. S-H.
Коэффициент вариации - не более 8%.
ЛИТЕРАТУРА
Mac Lagan N.F.: Brit. J. Exper. Path. 23, 234 (1944).
Reinhold J.G.: Clin.Chem. 8, 475 (1962).
64
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа