close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

;ppt

код для вставкиСкачать
Бегалиев Ш.С., Адуллабекова Р.М.
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА
ЙОДПОЛИМЕРОВ
Астана, 2014
УДК 615.1/4
ББК 51.56
Б 37
Авторы
Бегалиев Ш.С.
к.ф.н., руководитель
Абдуллабекова Р.М. д.ф.н., профессор
Рецензенты
Датхаев У.М. Декан фармацевтического факультета
Казахского национального медицинского
университета имени С.Д. Асфендиярова,
доктор фармацевтических наук
Зурдинов А.З. Ректор Кыргызской Государственной
медицинской академии имени И.К. Ахунбаева
по клинической и научной работе,
доктор медицинских наук, профессор.
Б 37 Бегалиев Ш.С., Абдуллабекова Р.М. Лекарственные средства йодполимеров.- Астана - 2014 - 128 с.
ISBN 978-9967-430-60-0
В монографии представлены информация о биологической роли йода
в организме человека, влияние недостаточности и избытка йода на состояние здоровья человека. В монографии также рассмотрены проблемы создания, исследования и применения препаратов йода для лечения различных инфекционных и неинфекционных заболеваний и для профилактики
недостаточности йода. Также представленны данные доклинических и клинических испытаний йоддекстринного препарата Renessans.
Монография предназначена для врачей клиницистов, фармацевтов,
фармакологов, преподавателей и студентов медицинских ВУЗов и колледжей.
Б 410803000000-14
УДК 615.1/4
ББК 51.56
Данная монография может использоваться, воспроизводиться
только с разрешения авторов и соответствующей ссылкой.
ISBN 978-9967-430-60-0
© Бегалиев Ш.С., Абдуллабекова Р.М., 2014
© ТОО «Типография Форма Плюс», 2014
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ................................................................................. 4
ВВЕДЕНИЕ....................................................................................................... 5
ГЛАВА 1 ЙОД И ЗДОРОВЬЕ ЧЕЛОВЕКА...................................................... 7
1.1 Трансформация элементарного йода в организме человека
и его биологическая роль.................................................................... 7
1.2. Влияние недостаточного и избыточного поступления
йода в организм на состояние здоровья людей.............................. 13
1.3. Профилактика йоддефицитных заболеваний................................. 20
ГЛАВА 2 ТЕОРИТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ РАЗРАБОТКИ И
ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА ЙОДПОЛИМЕРНОГО
ПРЕПАРАТА RENESSANS............................................................ 32
2.1. Общая характеристика йодполимеров............................................. 32
2.2. Теоретическое обоснование состава йодполимера
Renessans.......................................................................................... 37
2.3. Обоснование технологии получения йодполимера
Renessans........................................................................................... 52
2.4. Применения различных методов по определению
качественных показателей йодполимерных
препаратов......................................................................................... 58
2.5. Исследования по стандартизации препарата
Renessans........................................................................................... 61
ГЛАВА 3 ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ И КЛИНИЧЕСКИЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА
RENESSANS................................................................................... 83
3.1. Исследование токсичности препарата Renessans.......................... 83
3.2. Исследование влияния препарата Renessans
на иммунную систему здоровых добровольцев............................ 105
3.3. Изучение эффективности препарата Renessans при
лечении хронических вирусных гепатитов......................................114
3.4. Изучение эффективности применения препарата
Renessans при хроническом вирусном гепатите С....................... 120
3.5. Изучение эффективности применения препарата
Renessans при лечении туберкулеза............................................. 126
3
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АлАТ
АсАТ
БАД
ГОСТ
ВОЗ
ДНК
ЙДЗ
КОЕ
мм
нм
ООН
ПЦР
РНК
СНГ
Т3
Т4
ТТГ
Ув.
УЗИ
ХВГD
ХВГВ
ХВГС
ХГ
ЮНИСЕФ
DL50
n
Іg
НBV
НСV
Аланинаминотрансфераза
Аспартатаминотрансфераза
Биологически активная бобавка
Межгосударственный стандарт в СНГ
Всемирная организация здравоохранения
Дезоксирибонуклеиновая кислота
Йоддефицитные заболевания
колонеобразующая единица
Миллиметр
Нанометр
Организация объединенных наций
Полимеразная цепная реакция
Рибонуклеиновая кислота
Союз независимых государств
Трийодтиронин
Тироксин
Тиреотропный гормон
Увеличение
Ультразвуковое исследование
Хронический вирусный гепатит D
Хронический вирусный гепатит В
Хронический вирусный гепатит С
Хронический гепатит
Детский фон организации объединенных наций
Средняя доза вещества, вызывающая гибель половины членов испытуемой группы
Численность выборочной совокупности
Иммуноглобулин
Вирус гепатита В
Вирус гепатита С
4
ВВЕДЕНИЕ
Йод относится к группе жизненно необходимых для нормального функционирования организма человека микроэлементов, так
как он участвует в синтезе гормонов щитовидной железы, являясь
их составной частью.
Тиреоидные гормоны в свою очередь играют чрезвычайно важную и разнообразную роль. Так они участвуют в регулировании:
Физического и интеллектуального развития организма человека.
Дифференцировке различных тканей, прежде всего нервной
(кора головного мозга).
Физиологической и репаративной регенерации тканей.
Внутриклеточных биоэнергетических процессов организма человека.
Всех видов обменных процессов в организме человека.
В общем тиреоидные гормоны регулируют уровень базального
метаболизма всех клеток организма человека, включая гепатоциты,
что сказывается на функционировании печени. Печень, в свою очередь, метаболизируя тиреоидные гормоны регулирует их системные эндокринные эффекты.
При нарушении поступления йода в организм человека, нарушается выработка тиреоидных гормонов и снижается их активность, что приводит возникновению различных, тяжелых заболеваний человека.
С другой стороны, элементарный йод оказывает выраженное
противомикробное действие, а его растворы широко применяются
для наружной обработки ран, подготовки операционного поля и др.
При этом элементарный йод, применяемый в качестве лечебных
средств для лечения не инфекционных и инфекционных заболеваний человека, является достаточно токсичным веществом при введении его организм человека. Так как в основном применяется либо
элементарный йод, или его неорганические соединения.
Очевидно, что для более широкого использования йода в качестве лекарственного средства, необходимо создание его менее
токсичных соединений. Однако в последнее время в научной литературе сведения по созданию подобных препаратов йода практически отсутствуют.
Данное обстоятельство побудило нас провести серию исследований по изысканию безопасной органической формы йода, об5
ладающей достаточной терапевтической эффективностью при лечении инфекционных и не инфекционных заболеваний. За основу
нашей работы, было взято направление Ленинградских ученных
(Мохнач В.О., и его сотрудники), по созданию йодполимерных лекарственных средств, то есть неорганических препаратов йода с
крахмалом, поливинилспиртом и поливинилпирролидоном.
Мы предлагаем широкому кругу читателей наиболее полную
информацию по созданию и исследованию клинической эффективности разработанного нами йоддекстринного препарата Renessans.
6
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
ГЛАВА 1
ЙОД И ЗДОРОВЬЕ ЧЕЛОВЕКА
1.1 Трансформация элементарного йода в организме человека и его биологическая роль
Йод – относится к группе эссенциальных (жизненно необходимых) микроэлементов. Это единственный микроэлемент, который
участвуют в синтезе гормонов, и является их составной частью.
Биологическая роль йода в организме человека связана с его
участием в образовании гормонов щитовидной железы – трийодтиронина и тироксина. Йод и аминокислота тирозин являются главными компонентами синтеза тиреоидных гормонов, которые активно
участвуют в разнообразных биохимических процессах организма
человека [1].
В организме взрослого человека содержится от 20 до 50 мг
йода, из которого 70–80% находится в щитовидной железе, главным образом, в составе йодированного гликопротеина – тиреоглобулина. При поступлении йода в организм человека, значительная
его часть избирательно поглощается щитовидной железой, где йод
трансформируется в органическую форму. В щитовидную железу
йод поступает только в неорганической форме [2].
Щитовидная железа как эндокринный орган продуцирует три
основных гормона:
• тироксин;
• трийодтиронин;
• тиреокальцитонин.
Гормоны тироксин и трийодтиронин являются йодсодержащими гормонами, синтез которых тесно связан с обменом йода в организме человека.
Одним из обязательных условий, обеспечивающих нормальную функцию щитовидной железы, является регулярное поступление йода в организм человека. Суточная потребность человека в
йоде в среднем составляет 150–200 мкг. Организм получает йод в
основном с пищей – растительной (около 58%) и животной (около
33%), и в меньшей мере с водой (около 4,2%) и вдыхаемым воздухом (до 4,8%) [2, 3].
Для нормального функционирования и удовлетворения потребности организма человека в йоде Всемирная организация здраво7
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
охранения (ВОЗ) рекомендуются следующие нормы его ежедневного потребления с пищей (табл. 1.1.).
Таблица 1.1.
Физиологические нормы потребления йода, в различных
возрастных группах населения, по данным ВОЗ [4]
Возрастная группа
Дети грудного возраста
Дети от 2 до 6 лет
Дети от 7 до 12 лет
Подростки от 12 лет и взрослые
Беременные и кормящие женщины
Количество потребляемого йода
50 мкг
90 мкг
120 мкг
150 мкг
200 - 250 мкг
Поступив в кишечник с пищей, йод отщепляется от пищевых
продуктов и в виде йодидов (NaI, KI) поступает в кровь. Щитовидная железа обладает способностью захватывать йодид, несмотря
на то, что концентрация йода в щитовидной железе во много раз
больше, чем в крови.
В синтезе тиреоидных гормонов участвует только чистый элементарный йод. В связи с этим, йодид в щитовидной железе прежде
подвергается окислению и превращается в элементарный йод. Это
происходит при участии окислительных ферментов пероксидазы и
цитохромоксидазы. Процесс поступления йодидов в щитовидную
железу и их окисление в элементарный йод стимулирует тиреотропный гормон гипофиза.
Образование гормонов щитовидной железы начинается с йодизации – включения йода в аминокислоту тирозин. При включении
одного атома йода образуется монойодтирозин, а при включении
двух атомов йода – дийодтирозин. Монойодтирозин и дийодтирозин еще не обладают свойствами гормонов. Следующим этапом
является слияние (конденсация) двух молекул дийодтирозина, или
моно– и дийодтирозина, и образование тиронинов. Тиронины являются гормонами щитовидной железы. При слиянии двух молекул дийодтирозина образуется тетрайодтиронин (тироксин, Т4) при
конденсации ди– и монойодтирозина – гормон трийодтиронин (Т3)
(рисунок 1.1.) [5].
Одновременно под влиянием специфических ферментов происходит процесс дейодирования, заключающийся в отщеплении от
моно– и дийодтирозина молекулярного йода. Йод вновь поступает
во внутренний кругооборот, и далее используется в биосинтезе тироксина и трийодтиронина.
8
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 1.1. Формулы гормонов щитовидной железы (иодтиронинов)
Коллоид фолликулов щитовидной железы содержит специфический белок тиреоглобулин который выполняет функцию акцепторной молекулы, на которой синтезируются и запасаются тиреоидные
гормоны. Биосинтез йодсодержащих гормонов совершается внутри
молекулы тиреоглобулина. Треоглобулин представляет собой гликопротеид с молекулярной массой около 600 000 дальтон, размеры
которого настолько велики, что это препятствует попаданию его в
кровь из интактной щитовидной железы. Лишь при ее патологии,
сопровождающейся утратой целостности клеток, тиреоглобулин
может попасть в общий кровоток.
Следовательно, тиреоидные гормоны образуются не как свободные единицы, а как часть молекулы тиреоглобулина. В дальнейшем происходит протеолитическое расщепление тиреоглобулина,
освобождение тироксина и трийодтиронина и поступление их в кровяное русло. При этом выделяется свободный йод, который может
вновь использоваться для образования гормонов щитовидной железы. На рисунке 1.2. схематично изображен процесс синтеза тетрайодтиронина (Т4) и трийодтиронина (Т3) в щитовидной железе
[5, 6].
В нормальных условиях щитовидная железа содержит около
200 мкг/г тироксина (Т4) и 15 мкг/г трийодтиронина (Т3). Ежедневная секреция щитовидной железой Т4 составляет 80 – 90 мкг, что в
9
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
десятки раз больше, чем секреция Т3 (9 мкг). Процесс образования
Т3 очень важен для проявления биологического эффекта Т4. Биологическая активность Т3 в 3-5 раз выше, чем у Т4.
Избыток тиреоидных гормонов накапливается в тиреоглобулине коллоида щитовидной железы и используется в зависимости от
потребностей организма. В норме щитовидная железа обладает запасом гормонов на 2-10 недель, что резко отличается от количества
гормонов, имеющихся в других эндокринных органах.
Рис. 1.2. Синтез йодтиронинов в щитовидной железе
Биосинтез тиреоидных гормонов, как мы упоминали выше, осуществляется под контролем центральной нервной системы, гипоталамуса и гипофиза. Уровень продукции тироксина и трийодтиронина регулируется тиреотропным гормоном передней доли гипофиза
(ТТГ). Он оказывает влияние на основной процесс биосинтеза гормонов – конденсацию, то есть слияние ди– и монойодтирозинов в
тиронины (тироксин и трийодтиронин). Под воздействием ТТГ фермент протеаза расщепляет тиреоглобулин, и тиреоидные гормоны
выделяются из щитовидной железы в кровь. Тиреотропный гормон
гипофиза усиливает кровоснабжение и рост щитовидной железы
[5].
Высвобождение ТТГ регулируется уровнем свободных тиреоидных гормонов по принципу обратной связи, так при повышении
концентрации Т3 и Т4 в крови выброс ТТГ уменьшается, а при снижении – увеличивается. При этом нормальный уровень ТТГ в крови
составляет 0,3–4,0 мЕ/л.
10
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Деятельность щитовидной железы и аденогипофиза находится под контролем высшего регулятора нейроэндокринной системы
– гипоталамуса. В последнем содержится тиролиберин (тиретропин-рилизинг-гормон, ТРГ), стимулирующий тиреотропную функцию передней доли гипофиза (рисунок 1.3.).
Гипоталамус реагирует на изменение концентрации тиреоидных гормонов в крови понижением или повышением уровня выделяемого нейросекрета – тиролиберина.
Тиреоидная система, как и другие эндокринные системы человека, имеет циркадный ритм. Секреция тиролиберина гипоталамусом максимальна утром и минимальна в полночь. Содержание
тиреотропного гормона гипофиза повышено в вечерние и ночные
часы, и снижено утром и в первой половине дня. Концентрация тиреоидных гормонов также подвержена суточным колебаниям с максимумом в утренние часы и минимумом в ночные часы.
Рис. 1.3. Регуляция синтеза и секреции гормонов щитовидной железы
Физиологические функции, контролируемые тиреоидными гормонами, являются жизненно важными и чрезвычайно разнообразными. К ним относятся теплообразование, или скорость метаболизма (основой обмен); рост и развитие организма; метаболические
процессы - общий белковый, углеводный и жировой обмен - отло11
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
жение жира, обмен жирных кислот, холестерина и фосфолипидов;
превращение каротина в витамин «А»; промежуточный белковый
обмен - накопление белка в тканях, особенно в связи с гормонами роста, мобилизация тканевых белков при неадекватной по калорийности пище; обмен витаминов, кальция, креатина; водный и
электролитный обмен; функционирование всех систем организма
[3, 5, 7].
Гормоны щитовидной железы участвуют в регуляции роста и
дифференцировке тканей организма. Так гипотиреоз приводит к замедлению роста организма, вызывая карликовость. Рост организма
зависит от развития костной ткани. Так соматотропный гормон гипофиза влияет на рост трубчатых костей, но не оказывает действия
на их минерализацию (дифференцировку), которую в свою очередь
усиливают гормоны щитовидной железы [5, 8].
Также тиреоидные гормоны оказывают сильное влияние на
адаптационные реакции организма, осуществляемые с их участием.
Гормоны щитовидной железы абсолютно необходимы для нормального развития нервной системы. Так при недостаточном поступлении йода в организм детей развивается кретинизм, который проявляется не только в деформации скелета, но и в сильной задержке
умственного развития.
Гормоны щитовидной железы ускоряют ряд обменных процессов: усиливают обмен углеводов, жиров, холестерина. Тиреоидные
гормоны являются индукторами синтеза большого количества ферментов. В клетках под их воздействием возрастает число митохондрий. Тироксин и трииодтиронин увеличивают не только общую
продукцию энергии в митохондриях, но и теплообразование; а также влияют на обмен холестерина [5, 7, 8].
Таким образом физиологическая роль тиреоидных гормонов в
организме чрезвычайно велика и разнообразна, так они участвуют
в регулировании:
• Физического и интеллектуального развития организма человека.
• Дифференцировке различных тканей, прежде всего нервной (кора головного мозга).
• Физиологической и репаративной регенерации тканей.
• Внутриклеточных биоэнергетических процессов организма
человека.
• Всех видов обменных процессов в организме человека.
12
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Несмотря на такое разнообразие физиологических эффектов
йода на организм человека, в их основе лежит всего одна реакция - превращение в щитовидной железе с помощью специальных
ферментов йодидов поступающих в организм, в органический йод и
соответственно изменение знака его заряда (валентности) с (1-) на
(1+). Таким образом, атомы йода в тиреоидных гормонах выполняют функцию переноса электронов благодаря переходам атомов из
положительно одновалентной формы в отрицательно одновалентную, и обратно [5, 9, 10].
1.2. Влияние недостаточного и избыточного поступления
йода в организм на состояние здоровья людей
Заболевания, связанные с недостаточным поступлением йода
в организм человека известны еще с древних времен. Так наиболее
распространенным из них является зоб, сведения о котором встречаются в медицинских трактатах Древнего Китая, Индии и Египта.
Более 36 веков назад, китайские врачеватели обратили внимание
на лечебные свойства морских водорослей и жженой морской губки, применение которых устраняло или уменьшало опухоли шеи.
Эти же средства для лечения зоба применял Гиппократ (IV в. до
н. э.), а затем и его ученик римский врач Клавдий Гален (II в. н. э.).
Жженая губка и морские водоросли упоминаются также в рецептах
врачевателей европейских медицинских школ в конце ХII – начале ХIII вв., чем вероятно, объясняется широкое применение этих
средств европейскими врачами в более позднее время. Дары моря
использовались как основные средства лечения зоба вплоть до открытия йода Б. Куртуа [11].
Современный этап в борьбе с зобом начался в конце сороковых
годов прошлого столетия. Большую роль в этом сыграла созданная
при ООН в 1948 г. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ).
В течение 50-60-х годов ВОЗ совместно с Детским фондом ООН
(ЮНИСЕФ) и правительствами заинтересованных стран создала
программы по контролю над распространением зоба и его профилактике. С учетом ряда факторов, формирующих зоб были разработаны рекомендации по применению индивидуальной, групповой
и массовой профилактики. В качестве основного профилактического средства для предотвращения зоба предлагалось использовать
йодированную соль [12].
Новый всплеск интереса к проблеме заболеваний, связанных с
дефицитом поступления йода в организм человека связан с введе13
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
нием австралийским ученым Б. Гетзелем в 80-е годы прошлого столетия, в научный оборот понятия «йоддефицитные заболевания»
(ЙДЗ). Так помимо зоба и кретинизма, к ЙДЗ была отнесена большая группа психо-соматических расстройств, включая умственную
отсталость, врожденные аномалии, задержку физического развития у детей, а также нарушение когнитивной (познавательной)
функции у взрослых. Понятие «ЙДЗ» помогло по-новому взглянуть
на проблему йоддефицита и осознать ее масштабы.
Йоддефицитные заболевания (ЙДЗ) возникают преимущественно на территориях, характеризующихся дисбалансом ряда
микроэлементов в биосфере. Важную роль в развитии ЙДЗ играют
социальные, экономические, культурные факторы и состояние здоровья населения. На территориях с выраженным дефицитом йода
отмечается высокий уровень перинатальной смертности, мертворождений, а также врожденных пороков развития [13]. Помимо этого недостаток йода вызывает задержку психического, физического
и полового развития, снижение интеллектуальных способностей,
приводит к развитию узловых форм зоба и нарушению всех видов
обмена веществ. Самым тяжелым проявлением йод-дефицита является кретинизм, сопровождающийся необратимыми нарушениями функций головного мозга [14, 15].
Йоддефицитные заболевания являются проблемой здравоохранения для многих стран мира. Так, более миллиарда людей проживают в районах с низким содержанием йода в почве и воде, из
которых 680,0 миллионов – в Азии, 60,0 миллионов – в Латинской
Америке, 227,0 миллионов – в Африке и 30 миллионов в Европе.
По данным ВОЗ, более 30% жителей Земли имеют недостаток
йода в питании, приводящего к развитию йоддефицитных заболеваний, а более 10-15% людей на Земле проживают в регионах с
тяжелым дефицитом йода, и высокой распространенностью эндемического зоба. Около 43 миллионов людей во всем мире страдают
умственной отсталостью, развившейся в результате йодной недостаточности, а у 11 миллионов был зарегистрирован скрытый эндемический кретинизм.
По инициативе ВОЗ в конце 20-го века проблема йоддефицитных заболеваний среди населения Земли признана ООН глобальной. В период с 1993 по 2006 год, ВОЗ проводила глобальное
исследование по изучению содержания йода в моче, и распространенности зоба у детей школьного возраста в различных странах. В
результате было выявлено, что недостаточное поступления йода в
организм детей является проблемой общественного здравоохране14
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
ния в 54 странах. В целом, 31,5% (266 миллионов) детей школьного
возраста имели недостаток йода в питании. При этом данный показатель варьировал от 10,6% на американском континенте до 52,4%
– в европейском регионе [4].
При нормальном поступлении йода в организм человека от
85% до 90% его выводится с мочой, поэтому уровень йода в моче
является хорошим индикатором йодного статуса, и как следствие
индикатором развития у населения йоддефицитных заболеваний.
Средняя концентрация йода в моче составляет 100-200 мкг/л, и
свидетельствует об адекватном (нормальном) потреблении йода.
В исследовании ВОЗ были определены страны население которых
испытывает дефицит в потреблении йода, страны, в которых потребление йода населением является оптимальным, а также страны имеющие риск йод-индуцированных заболеваний (гипертиреоз)
вследствие повышенного потребления йода (рисунок 1.4.).
Как видно из рисунка 1.4., страны СНГ относятся региону со
слабовыраженным йодным дефицитом среди населения, за исключением Кыргызской Республики и Беларуссии.
Умеренный дефицит йода (20-49 мкг/л)
Слабый дефицит йода (50-99 мкг/л)
Оптимальное потребление йода (100-199 мкг/л)
Риск йод-индуцированного гипертиреоза (200-299 мкг/л)
Риск неблагоприятных последствий для здоровья (> 300 мкг/л)
Нет данных
Рис. 1.4. Среднее содержание йода в моче у населения различных
стран, по данным исследования ВОЗ (мкг/л)
15
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Эндемический зоб в настоящее время является важнейшей медико-социальной проблемой, являясь наиболее распространенной,
но далеко не единственной и не самой страшной йоддефицитной
патологией людей [16].
Так, наиболее неблагоприятные последствия, вследствие недостаточного поступления йода в организм возникают на ранних этапах развития человека. Даже при незначительном дефиците йода у
беременных женщин быстро падает уровень свободного тироксина
в крови до нижней границы нормы и меньше. Беременность, и роды
у женщин с дефицитом йода и как следствие этого патологией щитовидной железы характеризуются высокой частотой осложнений,
таких как гестоз, хроническая внутриутробная гипоксия плода и его
гипотрофия, дискоординация родовой деятельности, преждевременные роды, угроза прерывания беременности, спонтанные выкидыши и мертворождения. Дефицит внутриутробного поступления
йода плоду, повышает риск формирования у него врожденных пороков развития, возникновение респираторного дистресс-синдрома
после родов, ослабления иммунитета, что в конечном итоге повышает риск развития перинатальной и ранней младенческой смертности. В условиях даже легкого дефицита поступления йодного в
организм беременных женщин и плода формируется вторичная
тиреоидная недостаточность, которая может привести к развитию
у ребенка неврологического кретинизма и субкретинизма, транзиторного неонатального эндемического зоба или диффузного эндемического зоба [17, 18, 19].
Недостаток поступления йода в организм детей и подростков
приводит к расстройствам нервной системы и психической деятельности, умственной отсталости, а также является одной из причин низкорослости и глухонемоты. У детей с эндемическим зобом,
в сравнении со здоровыми детьми в 3 раза чаще выявляется патология опорно-двигательного аппарата, в 2,5 раза чаще – функциональная кардиопатия, в 2 раза чаще – хронические очаги инфекции
носоглотки и умственная отсталость и в 1,5 раза чаще – заболевания пищеварительной системы.
На уровне популяции дефицит йода приводит к снижению в
среднем на 10 – 15 пунктов коэффициента интеллекта IQ. Более
чем 200 миллионов детей в возрасте до 5 лет, в развивающихся
странах, из-за недостаточного поступления йода не достигают своего потенциала развития.
У взрослых дефицит йода приводит к снижению интеллектуальной функции и физической работоспособности, способствует
16
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
развитию ожирения, гормонально-метаболических сдвигов, фиброзно-кистозной болезни молочных желез, нарушений иммунных
реакций, остеопороза и патологических изменений в сердечнососудистой системе [14, 20].
Дефицит йода повышает онкологический риск, прежде всего,
органов эндокринной и репродуктивной системы. Так недостаток
йода в питании увеличивает риск возникновения рака щитовидной
железы. Частота развития рака щитовидной железы повышена у
лиц страдающих узловым зобом и проживающих в регионах эндемичных по зобу. В популяциях с богатым потреблением йода реже
встречаются агрессивные формы рака щитовидной железы и чаще
– более благоприятные доброкачественные опухоли.
Дефицит йода, увеличение щитовидной железы в объеме,
гипотиреоз, нетоксический зоб, тиреоидит также повышают риск
возникновения рака молочной железы. Так было установлено, что
аутоиммунный тиреоидит повышает риск развития рака молочной
железы у женщин. При тиреотоксикозе, повышенном уровне тиреоидных гормонов в крови, и избыточном потреблении йода риск
развития рака молочной железы, наоборот, снижается, что объясняется способностью тиреоидных гормонов и йода индуцировать
апоптоз опухолевых клеток [10, 21].
Также дефицит поступления йода в организм взрослых мужчин
повышает риск развития у них рака предстательной железы, а в регионах с пищевым дефицитом йода повышена смертность населения от рака желудка. В частности в Польше выявили достоверную
корреляцию между повышением потребления йода населением и
снижением заболеваемости раком желудка, что указывало на защитную роль йодной профилактики в отношении рака желудка.
Достаточное поступление йода в организм людей приводит к
снижению риска возникновения рака щитовидной железы, рака молочной железы и желудка. Йод в тканях щитовидной и молочной
желез, а также в тканях желудка оказывает антиоксидантное действие. Клетки щитовидной железы филогенетически происходят из
примитивных желудочно-кишечных клеток, концентрирующих йод.
Во время эволюции эти клетки мигрировали и специализировались
для захвата и хранения йода с целью адаптации организмов к переходу из богатой йодом морской среды в бедную йодом земную
среду. Клетки молочной железы также происходят из примитивных
эктодермальных клеток, способных концентрировать йод. В результате эволюции, щитовидная железа, молочная железа и желудок
являются органами млекопитающих, в том числе и человека, обла17
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
дающими важной для нормального функционирования организма
способностью – концентрировать и накапливать йод. В клетках этих
органов содержатся активные пероксидазные ферменты, которые
переводят электроны из йодидов на кислород перекиси водорода, и
таким образом защищают клетки от повреждения, вызываемого перекисным окислением липидов. Данное обстоятельство полностью
объясняет антиканцерогенное действие йода и его влияние на возникновение рака щитовидной железы, молочной железы и желудка
[7, 10, 21].
Как указывалось выше, йод, поступающий в организм в виде
неорганических соединений, практически полностью всасывается в
кровоток из желудочно-кишечного тракта. Из крови он легко проникает в различные органы и ткани. Также в крови йод вступает в
химические реакции с органическими веществами и разносится по
всему организму. В связи с этим достаточно легко получить передозировку и токсические эффекты минерального йода при избыточном его поступлении.
Еще в начале 19 века женевский врач Ж. Франсуа Куанде первым описал симптомы токсического воздействия йода (йодизма)
избыточно поступающего в организм людей. Ж. Куанде для лечения зоба использовал спиртовой раствор йода. При трехкратном
ежедневном приеме по 10 капель в течение 7 - 8 дней опухоль шеи
у больных значительно уменьшалась, при более длительном сроке лечения наблюдалось ее полное исчезновение. Полученные им
данные были опубликованы в Швейцарии и соседней Франции, что
вызвало большой энтузиазм у европейских врачей того времени. В
новом средстве они увидели панацею от многих болезней, а йодная
терапия приобрела характер повального увлечения, вызвав массовые случаи йодизма [11].
Избыток поступления йода в организм, хотя и встречается значительно реже по сравнению с его дефицитом, однако также неблагоприятен для здоровья, как и его недостаток. В ежедневном
рационе не рекомендуется потребление йода более 300 мкг в сутки. Наивысший переносимый уровень суточной дозы йода, установленный для взрослых, беременных и кормящих матерей составляет 1100 мкг, для детей от 1 года до 8 лет – 300 мкг, для детей от 9 до
13 лет – 600 мкг.
Избыток йода, поступающий в сравнительно небольших дозах
из йодированных продуктов и соли, в течение длительного времени
и в дозах превышающих максимальные уровни потребления, может, как и йодная недостаточность, привести к развитию заболеваний щитовидной железы.
18
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Так избыточное потребления йода может вызывать гипертиреоз. Гипотиреоз при избытке йода развивается, в основном, у новорожденных или пожилых людей с аутоиммунным тиреоидитом.
Гипертиреоз вследствие избытка йода бывает двух типов. Первый
тип развивается у пациентов с предтоксическим состоянием щитовидной железы. Второй тип гипертиреоза развивается у пациентов
без предтоксического состояния щитовидной железы. Этот тип гипертиреоза в течение нескольких месяцев спонтанно переходит в
эутиреоз, несмотря на продолжающееся избыточное потребление
йода [22].
Однако, среднее потребление йода японским жителем составляет 1200 мкг в день, причем избыток йода получают главным образом в результате широкого потребления морских водорослей и морепродуктов. При этом распространенность патологии щитовидной
железы в Японии существенно не отличается от других развитых
стран, а показатели продолжительности жизни и популяционного
здоровья – одни из лучших в мире. Также в Японии практически
отсутствует проблема йоддефицитных заболеваний. Это связано с
тем, что органически связанный йод не кумулируется в организме, а
при повышенном его поступлении выводится из организма с мочой
[22, 23].
Органически связанный йод безвреден даже при длительном
употреблении его в высоких дозах. Например, у здоровых людей
при употреблении 1–5 мг йода в составе морских водорослей практически весь йод в течение 48 часов выводился с мочой. Только
очень высокие дозы органически связанного йода, поступающего
в организм человека из морских водорослей могут оказывать временный неблагоприятный эффект на работу щитовидной железы.
Однако большинство людей легко переносят избыток йода в пище
без каких-либо последствий. Ежедневное потребление органического йода в количестве нескольких миллиграмм (в 10–20 раз больше физиологической потребности) не оказывает явного вредного
действия.
Однако, проблема побочных эффектов, возникающих при избыточном потреблении йода населением, является достаточно актуальной. Так проведенный анализ безопасности массовой йодной
профилактики показал, что побочные и токсические эффекты вызванные йодом, добавленным в продукты питания и поваренную
соль, встречаются достаточно редко, а наиболее часто встречающимся побочным эффектом является индуцированный йодом тиреотоксикоз. Данная патология наблюдается преимущественно у
19
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
пожилых людей с автономным узловым зобом, при этом показатели
тиреоидных гормонов спонтанно возвращаются к исходному уровню или даже ниже исходного уровня после 1–10 лет приема йода
[18].
В научных кругах, дискутируется предположение, что длительный прием йода может вызывать аутоиммунный тиреоидит. Так
глобальное внедрение массовой йодной профилактики решило
проблему дефицита йода, однако одновременно наблюдалось увеличение количества людей с аутоиммунным тиреоидитом.
Хронический аутоиммунный тиреоидит характеризуется инфильтрацией ткани щитовидной железы клетками, вызывающими
воспаление, и выработкой аутоантител к тиреоид-специфическим
антигенам: тиреоглобулину, тиреоидной пероксидазе и тиреоидным
гормонам. Прием йода может усугублять течение тиреоидита, только у лиц, генетически предрасположенных к этому. В начале развития аутоиммунного тиреоидита может наблюдаться гипертиреоз,
тогда прием любых йодсодержащих препаратов противопоказан.
По мере прогрессирования аутоиммунного тиреоидита и перехода
его в хроническую форму появляется гипотиреоз. В этом случае
для лечения аутоиммунного тиреоидита и гипотиреоза назначают
тиреоидные гормоны и йодсодержащие препараты в зависимости
от формы гипотиреоза и показателей уровня тиреоидных гормонов
в крови. В целом, носительство аутоантител к тиреоид-специфическим антигенам, а также хронический аутоиммунный тиреоидит,
не являются противопоказаниями для приема препаратов йода и
йодной профилактики [5, 18, 23].
Существует гипотеза, что йод может вызывать различные аллергические реакции. Однако в мире нет ни одной публикации, описывающие случаи возникновения аллергических реакций на йод
немедленного и замедленного типов, так как йод, сам по себе не
является аллергеном.
1.3. Профилактика йоддефицитных заболеваний
Жженая губка и морские водоросли с древних времен использовались как основные средства лечения зоба вплоть до открытия
йода Б. Куртом, занимавшегося изготовлением селитры (KNO3),
для производства пороха [11].
Обнаружение йода в морских водорослях и морепродуктах,
традиционно использовавшихся для лечения зоба, привело к мысли о том, что своим лечебным эффектом они обязаны наличию но20
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
вого химического элемента. Поэтому в первой половине ХIХ века
врачи стали использовать препараты йода в качестве лекарственного средства. При этом поиски средств борьбы с зобом не прекращались. В 1833 г. идея применить обогащенную йодом соль для
лечения и профилактики зоба появилась у французского горного
инженера и агрохимика Ж. Батиста Боссино, который продолжительное время работал на рудниках Южной Америки. Наблюдения
за жителями предгорий Анд, где зоб был массовым явлением, и
населением, проживающим у океанического побережья (не страдавших зобом), и употреблявших богатую йодом природную соль
из соляных шахт, привели его к мысли использовать йодированную
соль в борьбе против зоба [11].
Успехи и неудачи в борьбе с зобной болезнью положили начало более глубокому и основательному изучению ее этиологии.
Французский химик Г. Шатен посвятил этой проблеме 26 лет (18501876 гг.). Он первым занялся исследованием объектов окружающей
среды (воды, воздуха, почвы) и продуктов питания (прежде всего
молока и овощей) на содержание йода. Полученные результаты позволили сделать вывод, что причиной зоба является недостаточное
поступление йода в организм [10, 11]. Изучение экологических причин развития зоба привело Г. Шатена к идее «обогащения» йодом
воды в целях профилактики. Главной и отличительной особенностью его профилактической программы было использование микродоз йода в борьбе с зобом.
Отчет об исследованиях и программа по профилактике зоба
были представлены в Академию наук Франции, которая по достоинству оценила вклад ученого в изучение окружающей среды, однако
вывод о причинной зависимости между низким содержанием йода
в природных объектах и наличием эндемического зоба принят не
был. Главной причиной неприятия идей Шатена было то, что научное сообщество того времени еще не «созрело» до концепции
микроэлементозов [11].
Тем не менее, вторая половина 19 века в целом была плодотворной как в отношении достигнутого уровня понимания этиологии
и патогенеза зоба, так и в создании теоретической базы для его
лечения и профилактики. Большую роль в этом, помимо частных
исследований, сыграли так называемые зобные комиссии, сформированные во Франции и Швейцарии которые выполняли исследовательские, лечебные и профилактические задачи [24, 25].
К началу 20 века создались все предпосылки для перехода к
массовой профилактике зоба. Первые широкомасштабные профи21
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
лактические мероприятия с использованием йодированной соли в
1916 - 1920 гг. были в Акроне (США). Затем этот опыт был успешно повторен в Швейцарии хирургом Г. Эггенбергером [11]. Именно
Швейцария стала первой страной в мире, принявшей закон в 1922
году о промышленном производстве йодированной соли для массовой профилактики зоба. Несколькими годами позже йодированную
соль стали производить и в других странах Европы [24].
Что развеяло сомнения на счет эффективности микродоз йода,
и йодированную соль признали наиболее удобным и надежным
средством массовой профилактики зоба.
В 1952 г. ВОЗ рекомендовала йодировать соль по единому стандарту: две части йодида калия на 100000 частей соли. На третьей
конференции ООН по питанию, проходившей в 1953 г. в Латинской
Америке, ведущие ученые предложили максимальную (1:10000) и
минимальную (1:20000) концентрации йодизации соли [19]. Многие
специалисты выступили против единого уровня йодирования соли
и других продуктов. По их мнению, в каждом эндемичном районе
йодизация соли должна проводиться с учетом уровня йодной недостаточности и наличия зобогенных факторов. Так, в Швейцарии и
Германии на килограмм поваренной соли добавляли 5-10 мг йодида калия, в США – до 100 мг, в СССР – 25 мг [16].
Эффективность внедрения йодированной соли в качестве
массового профилактического средства была неоднократно подтверждена в ряде стран. Опыт послевоенных лет показал, что успех
профилактики зоба зависит от многих факторов: длительности использования профилактических средств, их качества, доступности,
уровня организации профилактической работы и благосостояния
населения. Благодаря правильно организованной профилактической деятельности в течение 60-70-х годов многие очаги зобной эндемии были ликвидированы [26].
Однако в 1990 г. состоялся Международный форум всемирного
саммита по детству, на котором постановили к 2000 году устранить
во всемирном масштабе главные причины йоддефицитных заболеваний. Для этого была создана всемирная база данных по йоддефициту [27, 28]. ВОЗ и ЮНИСЕФ представили унифицированные
рекомендации по использованию йодированной соли как наиболее
доступного, дешевого и надежного средства профилактики йоддефицитных заболеваний. На специальной сессии комитета ООН
по политике в области здравоохранения была поставлена задача
организовать производство универсальной йодированной соли в
22
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
течение 10 лет во всех странах, население которых страдает йоддефицитными заболеваниями [28].
Таким образом, последовательная политика в борьбе с йоддефицитом, способствовала значительному прогрессу в производстве и потреблении йодированной соли в мировом масштабе.
К развитым странам Европы, Америки и Азии, добавились и развивающиеся страны Северной Африки, Ближнего и Среднего Востока (Иран, Ирак, Пакистан, Судан, Сирия и др.), в которых были
приняты законы об организации массовой профилактики йоддефицитных заболеваний. Производство и потребление йодированной
соли началось и в странах Азиатско-Тихоокеанского региона (Камбодже, Китае, Лаосе, Малайзии, Монголии, Вьетнаме, Филиппинах
и др.). Около 76% населения в этих странах стали потреблять соль,
обогащенную йодом. Благодаря принятым мерам в Китае, где 90%
населения потребляют йодированную соль, заболеваемость зобом
снизилась с 80 до 4,5%, школьная неуспеваемость – с 50 до 2%,
исчез врожденный кретинизм [29, 30].
В ряде промышленно-развитых стран, испытывавших природный дефицит йода (США, Канада, Швейцария, Скандинавские страны), реализация программ йодной профилактики привела к полной
ликвидации йоддефицитных заболеваний [31].
Показатель регулярного использования йодированной соли населением многих стран вырос к концу 2000 года до 70% в сравнении
с 10% в 1990 году. Благодаря проделанной работе, удалось ликвидировать угрозу развития отклонений в работе мозга у 90 миллионов новорожденных и значительно снизить последствия дефицита
йода более чем в 80 странах Европы, Азии, Африки и Америки [32].
На современном этапе ВОЗ рекомендует в каждой стране, имеющей очаги йоддефицитных заболеваний, проводить всеобщее
йодирование соли по единому стандарту с учетом климатических
условий и уровня влажности (табл. 1.2.) [33].
Таблица 1.2.
Рекомендуемое ВОЗ содержание йода в соли (в мг/кг)
Климат
Теплый,
сухой
Холодный,
влажный
Потребление соли в
сутки
Производитель
Розничная Домашнее
вне
внутри
торговля хозяйство
страны страны
5
60
50
45
40
10
30
25
22,5
20
23
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Таким образом, вся соль, выпускаемая промышленностью и
имеющаяся в продаже, должна быть йодированной. Так как опыт
многих стран показывает, что существенного прогресса в борьбе с
йоддефицитными заболеваниями им удалось добиться лишь после
перехода к всеобщему йодированию соли.
Тем не менее, несмотря на достигнутый прогресс причины йоддефицитных заболеваний не были устранены во многих странах
Европы, Азии, Африки и Латинской Америки, в том числе и в странах СНГ [34].
По оценкам Эндокринологического научного центра РАМН, недостаточное потребление йода создает угрозу здоровью 100 млн
россиян и требует проведения у них постоянных мероприятий по
эффективной профилактике йоддефицитных заболеваний.
Результаты исследования потенциальной зобной опасности
в разных территориальных геокомплексах Республики Казахстан
обязывают вести в широком аспекте дифференциальную профилактику зоба по всей териитории страны. Профилактика эндемического зоба, как и борьба с гиповитаминозами, туберкулезом и
другими заболеваниями в Казахстане, должна быть особой заботой
Правительства.
На основании полученных результатов исследований, проведенных Академией питания Республики Казахстан в 1999 году о
распространенности и степени тяжести йодного дефицита в раличных регионах республики была показана необходимость активизации массовой йодной профилактики среди населения.
Разработка комплексных мер с привлечением промышленного
сектора в лице производителей соли, всех слоев общества и активного участия государственных структур привело к принятию нормативно-правовой базы и ее поэтапному внедрению. На основании
результатов исследований разработаны и приняты следующие нормативно-правовые документы:
• Постановление Правительства Республики Казахстан №
1283 от 5 октября 2001 года «О профилактике йоддефицитных расстройств среди населения Республики Казахстан
на 2001 - 2005 годы»;
• специальное Постановление Правительства Республики
Казахстан № 86 от 23 января 2003 года «О ратификации соглашения «О профилактике йоддефицитных расстройств
среди населения государств - участников СНГ»;
• Закон Республики Казахстан от 14.10.2003 года № 489 П
ЗРК «О профилактике йоддефицитных заболеваний в Республике Казахстан».
24
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Данные исследования были учтены и при подготовке утвержденной Указом Президента Республики Казахстан «Государственной программы реформирования и развития здравоохранения
Республики Казахстан на период 2005 - 2010 годы» в части обязательной бесплатной саплементации беременных женщин с помощью йодсодержащих препаратов.
В настоящее время выделяют несколько методов профилактики йоддефицитных заболеваний [35, 36, 37]:
• Массовая йодная профилактика.
• Групповая йодная профилактика.
• Индивидуальная йодная профилактика.
Массовая йодная профилактика
При массовой профилактике соединения йода (йодид калия
или стабильный йодат калия) добавляют в наиболее распространенные продукты питания: поваренная соль, молочные продукты,
хлеб, вода.
В мире используются 4 метода йодной профилактики эндемического зоба:
• йодирование соли (Северная Америка, Европа, страны
СНГ);
• йодирование хлеба (Австралия, Голландия);
• йодирование масла (Южная Америка, Новая Гвинея);
• прием йодистых препаратов.
Основным способом ликвидации йодного дефицита является
всеобщее йодирование соли. В связи с большим или меньшим недостатком йода в пище и воде применяют йодирование поваренной
соли, содержащей обычно 10-25 г йодистого калия на 1 тонну соли.
Употребление йодированной соли на практике является самым
простым, дешевым и эффективным способом массовой йодной
профилактики. Однако этот способ имеет и ряд недостатков.
Потребление йодированной соли связано с соблюдением ряда
условий:
• йодированная соль сохраняет свои свойства только в течение 3-4 месяцев;
• йод почти полностью улетучивается из нее при кипячении;
Из увлажненной соли, или хранящейся в открытой таре, йод
тоже может улетучиваться.
Применение йодированной поваренной соли является базовым
способом массовой профилактики йоддефицитных заболеваний и
способно ликвидировать йодный дефицит. В практике здравоохра25
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
нения не существует более эффективной программы профилактики йоддефицита. При этом мировая практика показала, что альтернативы йодированной соли для проведения масштабной йодной
профилактики не существует, а использование йодированной соли
совершенно безопасно для людей.
В йоддефицитных регионах массовая йодная профилактика
должна проводиться постоянно, причем положительные эффекты
на уровне популяции отмечаются через достаточно продолжительный срок, как правило, более 10 лет.
Групповая йодная профилактика
В определенные периоды жизни (подростковый период, беременность, кормление грудью) потребность в различных микроэлементах и в йоде в частности возрастает, а организм нуждается в
регулярном дополнительном приеме физиологических доз йода. В
таких случаях может быть рекомендована групповая йодная профилактика.
Групповая йодная профилактика проводится в масштабе определенных групп повышенного риска развития йоддефицитных заболеваний: дети, подростки, беременные и кормящие женщины,
лица детородного возраста.
Групповая профилактика осуществляется путем регулярного
длительного приема препаратов, содержащих фиксированную физиологическую дозу йода:
• для детей до 12 лет - 50-100 мкг в день;
• для подростков и взрослых - 100 - 200 мкг в день;
• при беременности и во время кормления грудью - 200 мкг
в день.
Наиболее эффективна групповая профилактика в организованных коллективах населения - детские сады, школы, интернаты.
Индивидуальная йодная профилактика
Проводится у отдельных людей путем длительного приема
препаратов, содержащих физиологические дозы йода.
Потребность в йоде повышается в период роста организма,
особенно в возрасте 6–9 и 13–15 лет, у женщин во время беременности и лактации, при больших психоэмоциональных и физических
нагрузках, при травмах, интоксикациях, инфекциях с длительным
лихорадочным периодом, при переохлаждении организма. Патологическое состояние щитовидной железы (кроме тиреотоксикоза)
требует большего количества потребляемого йода, которое может
возрастать до 400–500 мкг в сутки.
26
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
В настоящее время для индивидуальной йодной профилактики
назначают лекарственный препарат «Калия йодид». Рекомендуемые дозы калия йодида при индивидуальной профилактике в группах повышенного риска по развитию йоддефицитных заболеваний:
дети до 12 лет – 50–100 мкг, подростки и взрослые – 100–200 мкг,
беременные и кормящие женщины – 200 мкг, 1 раз в сутки длительное время.
Резюмируя вышеизложенное, можно сказать, что биологическая роль йода в организме человека весьма значительна, и связана в основном с его участием в образовании гормонов щитовидной
железы – трийодтиронина и тироксина.
Физиологические функции тиреоидных гормонов весьма разнообразны. Так они контролируют основой обмен организма, рост и
его развитие, метаболические процессы (белковый, углеводный и
жировой обмен), водный и электролитный обмен и много другое. В
этой связи можно утверждать, что тиреоидные гормоны и входящий
в их состав йод, влияют в конечном итоге на функционирование
всех систем организма человека, включая нервную высшую деятельность. Несмотря на многогранность физиологических эффектов йода, входящего в состав тиреоидных гормонов, в их основе
лежит всего одна химическая реакция - превращение йода в щитовидной железе в органический йод и соответственно изменение
знака его заряда (валентности) с (1-) на (1+). Поэтому регулярное
поступление йода в организм человек, является необходимым условием его нормального существования.
При недостаточном поступлении йода в организм человека
развиваются йоддефицитные заболевания, которые чаще возникают преимущественно на территориях, характеризующихся недостаточным содержанием йода в пищевых продуктах и воде. Йоддефицитные заболевания являются проблемой здравоохранения для
многих стран мира. Так, по данным ВОЗ более 1/3 жителей Земли
имеют недостаток йода в питании, приводящего к развитию йоддефицитных заболеваний, и более 1/10 людей проживают в регионах
с тяжелым дефицитом йода, и высокой распространенностью эндемического зоба.
Также на территориях с выраженным дефицитом йода отмечается высокий уровень перинатальной смертности, мертворождений, а также врожденных пороков развития у детей. Помимо этого
недостаток йода вызывает задержку психического, физического и
полового развития у детей и подростков, снижение интеллектуальных способностей, приводит к развитию узловых форм зоба и нару27
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
шению всех видов обмена веществ. Самым тяжелым проявлением
йод-дефицита является кретинизм, сопровождающийся необратимыми нарушениями функций головного мозга.
Избыток поступления йода в организм, хотя и встречается значительно реже по сравнению с его дефицитом, однако также неблагоприятен для здоровья, как и его недостаток. В ежедневном
рационе взрослого человека не рекомендуется потребление йода
более 300 мкг в сутки. Наивысший переносимый уровень суточной
дозы йода, установленный для взрослых, беременных и кормящих
матерей составляет 1100 мкг, для детей до 8 лет – 300 мкг, до 13
лет – 600 мкг. При этом избыток йода, поступающий в сравнительно небольших дозах из йодированных продуктов или соли, в течение длительного времени, и в дозах превышающих максимальные
уровни, может привести к развитию заболеваний щитовидной железы.
Для предотвращения развития йоддефицитных заболеваний
среди населения, проживающего на территориях с выраженным
дефицитом йода, ВОЗ рекомендует йодировать поваренную соль.
При этом эффективность внедрения йодированной соли в качестве
массового профилактического средства была неоднократно подтверждена в ряде стран в течении длительного периода лет.
В настоящее время выделяют несколько методов профилактики йоддефицитных заболеваний: массовая йодная профилактика,
групповая йодная профилактика, индивидуальная йодная профилактика.
При массовой профилактике соединения йода (йодид калия
или стабильный йодат калия) добавляют в наиболее распространенные продукты питания: поваренная соль, молочные продукты,
хлеб, вода.
Групповую профилактику проводят среди людей, в определенные периоды их жизни (подростковый период, беременность,
кормление грудью), когда потребность в йоде возрастает, и организм нуждается в регулярном дополнительном приеме физиологических доз йода. Наиболее эффективна групповая профилактика
в организованных коллективах населения - детские сады, школы,
интернаты.
Индивидуальная йодная профилактика проводится у отдельных людей путем длительного приема препаратов, содержащих
физиологические дозы йода.
28
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Литературные источники
1. Велданова М.В., Скальный А.В. Йод знакомый и незнакомый. –
Петрозаводск: ИнтелТек. - 2004. – 187 С.
2. Герасимов Г.А. Йоддефицитные заболевания в России. – М.:
Адамат.- 2002. – 132 С.
3. Allen L et al., eds. Guidelines on food fortification with micronutrients.
Geneva, World Health Organization and Food and Agricultural
Organization of the United Nations, 2006.
4. Technical consultation for the prevention and control of iodine
deficiency in pregnant and lactating women and in children less
than two years old. Geneva, World Health Organization, 2007. (To
be published).
5. Хворостинка В.Н., Лесовой В.Н., Моисеенко Т.А. Клиническая
эндокринология. — Харьков: Факт, 2008. — 543 с.
6. Болотова Н.В. Эндемичный зоб у детей (этиология, клиника,
прогноз): Автореф. дис... д-ра мед. наук. — Саратов, 1995. — 30
с.
7. Лукьянчук В.Д., Кравец Д.С., Коробков А.А. Биологическая роль
йода и фармакокоррекция его недостаточности (Методические
рекомендации) // Современная педиатрия. — 2006. — № 2(11).
— С. 88-94.
8. Герасимов Г.А. Йодный дефицит в странах Восточной Европы и
Центральной Азии – состояние проблемы в 2003 году // Клиническая тиреоидология, 2003. Т. 1. № 3. С.5–12.
9. Мохнач В.О. Йод и проблемы жизни. - Л.: Наука. - 1974. - 254 с.
10. Мельниченко Г.А., Абдулхабирова Ф.М. Йоддефицит и здоровье
нации // Лекции для практикующих врачей / Под ред. А.Г. Чучалина, А.И. Мартынова, Ю.Б. Белоусова. – М.: Общероссийский
общественный фонд «Здоровье человека», 2008. – С. 204–218.
11. Rosenfeld L. Discovery and Early Uses of Iodine //Journal of
Chemical Education Vol. 77 (8), August 2000. p. 985.
12. Progress towards the elimination of Iodine Deficiency Disorders //
WHO. NHD. 1999. № 4. 33 p.
13. Петеркова В.А. Йодный дефицит и его последствия у детей
/media/consilium/0114c/36.shtml.
14. Свириденко Н.Ю. Микроэлемент интеллекта //Наука и жизнь
2003. №10. 1999. 28 С. 66-70.
15. Герасимов Г.А., Свириденко Н.Ю. Йоддефицитные заболевания. Диагностика, методы профилактики и лечения (обзор) //
Терапевтический архив. 1997. Т 69. № 10. С. 17-19.
16. Писаревская И.В. Эндемический зоб. М.: Медицина, 1990. 22 с.
29
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
17. UNICEF. The state of the world’s children 2008: Child survival. New
York: UNICEF, 2007
18. World Health Organization. Resolution WHA60.21. Sustaining the
elimination of iodine deficiency disorders. In: Sixtieth World Health
Assembly, Geneva, 23 May 2007. Geneva: WHO, 2007.
19. Коломийцева М.Г., Неймарк И.И. Зоб и его профилактика. М.:
Изд-во мед. лит., 1963. 298 с.
20. Zimmermann MB et al. High thyroid volume in children with excess
dietary iodine intakes. American Journal of Clinical Nutrition, 2005,
81:840–844.
21. Велданова М.В. Проблемы дефицита йода с позиции врача//
Проблемы эндокринологии.- 2001.- № 5 . – С. 10-12.
22. Network for Sustained Elimination of Iodine Deficiency Country
Review Guidelines. New York, United Nations Children’s Fund, 2006
23. Sullivan KM, May S, Maberly G. Urinary iodine assessment: a
manual on survey and laboratory methods. 2nd ed. Atlanta, GA,
Program Against Micronutrient Malnutrition, 2000.
24. Николаев О.В. Эндемический зоб. М.: Медгиз, 1955. 257 с.
25. Бургер А. Теодор Кохер (1841-1917) – пионер в области хирургии щитовидной железы. //http://www.nycomed.ru/index_e.jsp.
26. F. van der Haar Проблема полной ливидации йоддефицитных
заболеваний //Тиронет №4. 2000.
27. Progress towards the elimination of Iodine Deficiency Disorders //
WHO. NHD. 1999. № 4. 33 p.
28. Prevention and control of iodine deficiency disorders FIFTYSECOND WORLD HEALTH ASSEMBLY 13 April 1999 //http://www.
who.int/gb/EB_WHA/PDF/WHA52/ew11.pdf.
29. Данн Д. Отрицательные эффекты йодной недостаточности и
ее ликвидация путем йодных добавок //Болезни щитовидной
железы Под ред. Л.И. Бравермана. Пер. с англ. М.: Медицина,
2000. С. 378-391.
30. Elimination of iodine deficiency disorders in South-East Asia //
Report of a Regional Consultation. New Delhi, 1997. 34 p.
31. Герасимов Г.А., Джатдоева Ф.А. Что вы хотели бы знать о
йоддефицитных заболеваниях? М.: Интерсэн, 1999. 48 с.
32. Commentary: Reaffirming the Goal of IDD Ellimination //The IDD
Newssletter, Vol. 18 (2) May 2002. pp. 63-68.
33. Конюхов В.А. Методические подходы к гигиенической оценке
риска йодного дефицита //Гигиена и санитария. 2002. №1. С.
71-73.
30
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
34. Gerasimov G Iodine Deficiency Disorders (IDD) in the Russian
Federation: A Review of Policies towards IDD Prevention and
Control and Trends in IDD Epidemiology (1950-2002) //http://www.
webiodine.com/dl/engl/html/report/IDD_overview_Russia.htm.
35. Постановление главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 05.10.99 № 14 «О мерах по профилактике заболеваний, связанных с дефицитом йода и других
микронутриентов».
36. Постановление Правительства РФ от 05.10.99 № 1119 «О
мерах по профилактике заболеваний, связанных с дефицитом
йода».
37. WHO Nutrition. The WHO Global Database on Iodine Deficiency.
2008.
31
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
ГЛАВА 2
ТЕОРИТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ
РАЗРАБОТКИ И ТЕХНОЛОГИИ
ПРОИЗВОДСТВА ЙОДПОЛИМЕРНОГО
ПРЕПАРАТА RENESSANS
2.1. Общая характеристика йодполимеров
За всю историю широкого применения препаратов йода никто, и никогда не сообщал, о каком бы то ни было снижении антибактериальной активности препаратов молекулярного йода. Так,
единственным антисептическим средством, применявшимся для
профилактики инфицирования раны на протяжении всей Великой
Отечественной войны, был йод. Возбудители инфекций чувствительны к йодсодержащим препаратам от природы и формирование
приобретенной устойчивости к ним не характерно, поэтому препараты йода по-прежнему занимают лидирующее место среди современных антисептиков [1, 2].
Спиртовые и водные растворы йода каждому из нас известны с
детства. Мы всю жизнь применяем их как эффективное антисептическое средство для обработки ран.
Йодсодержащие неорганические препараты обладают широким спектром фармакологического действия и имеют ряд преимуществ перед другими антибактериальными средствами.
Длительный опыт применения различных препаратов йода показал, что обладая выраженными антимикробными свойствами, с
широким спектром действия они являются резко токсичными при
введении в организм человека, что значительно суживает область
их клинического применения, также эти препараты не лишены различных побочных эффектов [3].
Проблема использования препаратов йода, заключается в том,
что в высокой концентрации они раздражают кожу и слизистую оболочку, а однократное введение 2-3 г йода для человека смертельно.
В связи с высокой токсичностью неорганических соединений йода,
многие ученые занимались поиском безопасных и эффективных
его органических соединений [4,5].
Поиск альтернативных путей решения данной проблемы привел ученых к идее о необходимости разработки технологий получения органических комплексов, содержащих йод.
32
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Так в 60-х годах ХХ столетия были созданы йодполимеры, в
которых йод в комплексе с полисахаридами и различными полимерами в значительной мере терял токсичность, действовал более
медленно, сохранял при этом свои антимикробные свойства [4, 6,
7].
Было установлено, что комплексные соединения йода с природными или синтетическими полимерами губительно действовали
на многие бактерии, в том числе и на патогенные, также обладали
антивирусными и фунгицидными свойствами. Главными преимуществами йодполимеров являлось их высокое химиотерапевтическое
действие, низкая токсичность и стоимость, а также отсутствие формирования резистентности у микроорганизмов к йоду [8]
Основоположником исследований антибактериального, противовирусного и антимикотического эффектов различных соединений
йода с крахмалом и его компонентами являлся ученый Мохнач В.О.,
который начал проводить данные исследования в 1956 году [5].
Мохнач В.О. дал наиболее полное описание лечебных свойств
йодполимера, получившего название – синий йод и впервые опробовал этот препарат на себе еще в годы Великой Отечественной
войны, когда заболел тяжелой формой бактериальной дизентерии.
Присутствующие в препарате сахар и лимонная кислота необходимы для улучшения его вкуса. Кроме того, они препятствуют разложению синего йода, поэтому он может храниться в закрытом сосуде при комнатной температуре, не теряя своих свойств, в течение
многих месяцев.
Это очень важный факт, так как в микстуре синего йода применена йодкрахмальная реакция биологически сходная с натуральными процессами, происходящими в растительной морской среде.
По своей сути это реакция получения биологически активного положительного одновалентного йода [5, 8].
Синий йод – это йодированный крахмал. Соединение йода с
крахмалом нейтрализует его токсические свойства по отношению к клеткам человека и животных, усиливая действие йода на
болезнетворные микроорганизмы. При этом, полезная микрофлора желудочно-кишечного тракта тоже не подвергается цидному
воздействию синего йода, в связи с чем, синий йод не вызывает
отравления организма и может употребляться в значительных дозах. Кроме того, входящий в состав препарата крахмал при приеме
внутрь обволакивает имеющиеся язвы и другие пораженные места
слизистой желудочно-кишечного тракта, создавая защитный слой,
способствующий быстрому излечению [9].
33
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
В научной литературе синий йод стали называть йодистым
крахмалом, амилойодином, йодамилозой, йодамилом, йодкрахмалом и йодполисахаридом.
На основе синего йода был разработан комплексный препарат
- микстура синего йода, содержащий дополнительные физиологически активные вещества - янтарную кислоту, витамин РР и фруктозу. За основу микстуры был взят рецепт амилойодина, разработанный Мохначом В.О. Как показала практика профилактического
применения «микстуры синего йода», ее влияние на человеческий
организм носило комплексный характер. Обладая антимикробным
эффектом, микстура была способна защищать организм от многих
болезней. Ее влияние на метаболические процессы и клетку проявлялась даже после непродолжительного применения [10].
Также был придуман чисто аптечный препарат - йодинол, приготовленный на основе поливинилового спирта. Йодинол - это тоже
синий йод. Он тоже является прекрасным антисептиком, нетоксичный, недорогой и очень стабильный препарат, который может долго
храниться. Основным действующим веществом йодинола является
также молекулярный йод [1, 6].
В Российской Федерации был запатентован состав для лечения дерматомикозов в котором в процентном отношении входят:
йод - 1,6-4,1; йодистый калий – 2,9-7,3; поливиниловый спирт - 8,313,4; этиловый спирт - 14,7-36,7; глицерин - 3,1-5,0; вода – до 100,0.
Изобретение относится к лекарственным препаратам для лечения
дерматомикозов [11].
На современном этапе развития медицины, в практику внедрены новые препараты антисептиков из группы йодофоров, представляющих собой препараты йода с природными и/или синтетическими полимерами.
Йодофоры, в которых йод иммобилизован на полимерах или
солюбилизирован с помощью поверхностно активных веществ,
позволяют устранить побочные эффекты йода, повысить стабильность препарата при его длительном хранении, сохранив при этом
его антимикробные свойства.
Йодофоры стабильны при длительном хранении. Высокая клиническая и бактериологическая эффективность современных йодофоров позволяет считать эту группу антисептиков препаратами
выбора, как в госпитальной, так и в амбулаторной хирургической
практике.
Преимуществом йодофоров является также их хорошая растворимость в воде, наличие моющих свойств у большинства из них.
34
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Благодаря преимуществам в настоящее время йодофоры во многих странах применяются в качестве кожных антисептиков. Йодофоры по бактерицидной и вирулицидной активности значительно
превосходят обычную спиртовую настойку йода и растворы Люголя
[12].
Йодофоры сохраняют высокие антисептические свойства йода
в течение длительного периода нахождения их на коже, не токсичны при длительном и частом их применении, редко вызывают раздражение кожных и слизистых оболочек, более устойчивы при хранении. Антимикробное действие основано на повреждении йодом
клеточной стенки патогенных микроорганизмов [13].
Йодофоры существуют в различных лекарственных формах
– раствор, мазь, аэрозоль, шампунь, жидкое мыло, гели, суппозитории, пудра, салфетки разового употребления, шовный и перевязочный материал, пропитанный препаратом. Зачастую йодофоры
сочетают с такими органическими веществами, как полиэтиленгликоль, поливиниловый спирт, при этом йод не только не теряет
свои свойства, а наоборот, приобретает новые. Данные йодофоры
успешно применяются для обеззараживания кожи рук хирурга и
операционного поля, профилактики и лечения раневой инфекции,
местного лечения ожогов и др. [14].
Наиболее широко используемым йодофором является комплекс йода с поливинил пирролидоном, содержащим 9-12% йода
– «повидон-йод». Он входит в состав многих наружно применяемых
лекарственных средств, например, йокс [15, 16].
Аналогом повидон-йода является йодопирон. Концентрация активного йода в его комплексе составляет 0,1-1%. Йодопирон – это
жёлто-коричневый аморфный порошок без запаха или со слабым
специфическим запахом, гигроскопичен, изменяется под действием света. Легко растворим в воде и на 95% в этаноле, практически
нерастворим в эфире и хлороформе [17].
Описано антибактериальное и фунгицидное действие йодированного полистерена. Такие полимеры не высвобождают активный
йод и проявляют антимикробную активность лишь при контакте с
патогеном [18].
Широкое распространение получил препарат липиодол, разработанный лабораторией Гуэрбет в Париже. Он представляет собой
маковое масло, 38% массы которого составляет йод. Препарат депонируется в коже и медленно всасывается в кровь. Одна капсула
липиодола содержит 200 мг йода.
35
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Обеспечение программы восполнения йодного дефицита с помощью препарата липиодола не требует больших материальных
затрат, специально обученного персонала, трудоемких программ
наблюдения и контроля за его введением – препарат принимают
1 раз в год при пероральном применении, а при внутримышечном
введении эффект сохраняется до 2 – 3 лет. Пролонгация действия
связана с тем, что йодированные жирные кислоты в организме используются для синтеза жировой клетчатки и йод затем медленно
поступает в кровяное русло по мере метаболизма жира [19].
В НИИ СП им. Н.В. Склифосовского совместно с отделом биополимеров медицинского назначения ВНИИИМТ была разработана
лекарственная форма, содержащая иммобилизованный биосовместимым сополимером йод, обладающий выраженными бактерицидными свойствами. Препарат содержит 1,5% йода и получил название йодопор [13].
Для обработки операционного поля применяется специальная
пленкообразующая полимерная йодсодержащая форма, получившая название йодполиком. Концентрация йода в пленочной форме
составляет 33%. В отличие от спиртового раствора йода.
Ввиду способности йодполикома образовывать пленочное антимикробное покрытие, этот препарат может быть рекомендован
для обработки послеоперационного шва, в период до и после снятия кожных швов. При этом использование марлевой повязки не
обязательно. Пленка, кроме физической герметичности, благодаря
выраженным бактерицидным свойствам, обеспечивает и полную
бактериологическую непроницаемость в течение длительного времени (более суток), легко снимается спиртом и постепенно смывается в течение 3-5 дней [20, 21].
Учитывая преимущества органических соединений йода перед
его неорганическими формами, в последние годы, наряду с традиционными способами йодной профилактики с помощью йодирования соли и назначения йодида калия, все шире используются
биологически активные добавки к пище, содержащие органические
формы йода
Йод-элам – БАД производства Архангельского опытного водорослевого комбината. Йод-элам создан научным отделом ООО
«Фитолон-Мед» (Санкт-Петербург) [22].
Йод-элам является комплексным препаратом, содержащим
йод, экстракт ламинарии, альгинат кальция; вспомогательные вещества (микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, поливинилпирролидон и кальция стеарат). Каждая таблетка йод-элама содер36
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
жит 80-100 мкг йода. Основноым компонентом йод-элама является
экстракт ламинарии, содержащий природный, совершенно безопасный для человека органически связанный йод [23, 24].
Достоинства и недостатки современных йодистых препаратов,
в том числе и ветеринарных, послужило основанием для создания
нового ветеринарного антисептика монклавит, где йод представлен
в виде сложного полимерного комплекса в водном растворе. Препарат разработан специалистами ООО «Оргполимерсинтез СПб»
в содружестве с профессорско-преподавательским коллективом
Санкт-Петербургской государственной академией ветеринарной
медицины.
Монклавит – лекарственное антисептическое и дезинфицирующее средство широкого спектра действия, представляющее собой водно-полимерную систему на основе йода в форме комплекса поли-N-виниламидациклосульфойодида. Монклавит содержит
положительно заряженный одновалентный йод в форме сложного
полимерного комплекса в водном растворе, поэтому препарат сохраняет все уникальные свойства созданного природой йода, как
антисептика и микробиоэлемента. Препарат не содержит спирта,
не раздражает кожу, абсолютно нетоксичен, не обладает аллергенностью, морфогенностью, иммунодепрессивностью и канцерогенностью [25, 26].
Одной из последних разработок йодполимеров, явлется изобретение армянскими учеными препарата арменикум. Арменикум
является достаточно сложным по химическому составу многокомпонентным лекарственным средством, содержащим йод, калий
йодид, лития хлорид, синтетический водорастворимый полимер,
моно-, олиго- и полисахариды. По своим физико-химическим свойствам арменикум представляет коллоидно-полимерный водный
раствор солей и низкомолекулярных органических соединений. [27,
28].
2.2. Теоретическое обоснование состава йодполимера
Renessans
Проблема использования элементарного йода заключается в
том, что в высокой концентрации он раздражает кожу и слизистую
оболочку, а однократное его введение в организм в дозировке 2-3 г
является для человека смертельным. Однако в комплексе с полисахаридами и различными органическими полимерами йод в значительной мере теряет токсичность, действует более медленно (в
37
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
течение 5 ч), сохраняя при этом свои антимикробные свойства [2,
5, 9].
Еще в 1917 году Lumiere применял йодистый крахмал для лечения инфицированных ран, как альтернативу большинству антисептиков, разлагающихся в белковых средах. Он поставил перед
собой задачу получить активный антибактериальный препарат,
достаточно устойчивый как «in vitro», так и «in vivo», действие которого могло бы продолжаться в течение нескольких часов или
дней. Последнее обстоятельство, безусловно, заслуживает особого внимания в связи с тем, что исследуемые нами полисахариды
– крахмал, амилоза – сами по себе не только не обладают никакими антимикробными свойствами, но, напротив, являются питательными веществами для бактерий. Соединение йода с природным
полимером - крахмалом дало Люмьеру очень обнадеживающие
результаты. Антимикробные свойства полученного препарата он
доказал следующим образом. Так в 2 стеклянных сосудах он поместил по 10 грамм мышечной ткани в начальной стадии микробного
разложения, в один сосуд добавил 100 мл водного раствора йода,
содержащего 25 мг свободного йода, а во второй сосуд – 10мл водного раствора йодистого крахмала, содержавшего также 25 мг
йода. Сосуды неоднократно встряхивались, и через полчаса в первом сосуде невозможно было уже обнаружить свободного йода, а
на следующий день содержимое сосуда демонстрировало картину
полного микробного разложения мышечной ткани. Во втором сосуде в течение месяца жидкость сохраняла синий цвет, а содержимое
не обнаруживало никаких признаков разложения [29].
Десятки и сотни молекул йода, вошедшие в состав полисахарида, образовывали единую молекулу с обобществленными электронами, стянутыми в значительной степени к молекуле полимерного соединения. Из-за флюктуации электронной плотности в этих
соединениях последние становились донорами соединений йода
в форме І+1. Такие соединения йода обладают сильными окислительными свойствами, что объясняет их резко выраженное антимикробное действие с широким антимикробным спектром [2, 5].
Сама по себе идея использования антимикробных свойств
йода в составе комплексов - йодполимеров – не является новой.
Так достаточно хорошо изучены соединения подвижных равновесных систем водных растворов йода и его солей с крахмалом, амилазой, амилопектином, поливиниловым спиртом. Были выявлены
преимущества йодвысокополимеров по сравнению с сульфаниламидами и антибиотиками, такие как широкий спектр антимикробно38
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
го действия как in vivo, так и in vitro. Данные йодвысокополимеры
проявляют хорошую эффективность при кратковременном лечении, исключая адаптацию патогенных микроорганизмов и как следствие выработку у них механизмов устойчивости. Они практически
не токсичны, и не проявляют кумулятивных свойств, и характеризуются высоким химиотерапевтическим индексом [5].
Теоретически механизм действия йодвысокополимеров на
мкробов достаточно сложен. Так механизм действия синего йода
на вирусы в узнавании и специфическом химическоом взаимодействии (йодировании) с ДНК или РНК вирусов как внутри, так и вне
клетки. Это происходит посредством замещения атома водорода
в группах пуриновых и пиримидиновых оснований, входящих в состав молекул ДНК или РНК вирусов. Вследствие галогенирования
образуются новые вещества, уже не обладающие свойствами вируса. Способность йода легко проникать через клеточные мембраны
делает препарат особо ценным при всех инфекциях, при которых
основной патологический процесс протекает именно во внутриклеточных структурах [30, 31].
Это легло в основу разработки препарата «Арменикум». Разработчиками была сформулирована идея создания лекарственного
средства, в котором бы органически сочетались универсальность,
широкий антимикробный спектр, низкая токсичность, «совместимость» с человеческим организмом, «узнавание чужого» в живом
организме по аналогии с клетками-киллерами, способность выводить продукты гибели этого «чужого» из организма, а также возможность его парентерального введения для обеспечения резорбтивного действия. При этом ученые, создавая препарат «Арменикум»,
использовали ранее широко применявшиеся в клинической медицине вещества с потенциально выраженным антивирусным действием: йод, литий, полисахариды [27].
При создании и регулировании фармакокинетики арменикума разработчики в качестве его коллоидного компонента выбрали
полисахариды [27], поскольку их углеводные цепи, в отличие от
других полимеров, более жесткие, а возможность изменения их
конформации в биологических средах довольно высока в связи с
разветвленностью структуры углеводной цепи, и наличием различных типов связей в точках ветвления [32].
Многолетние исследования свойств водных растворов йода с
крахмалом, поливиниловым спиртом, поливинилпирролидоном показали, что биологически активной является часть поляризованной
молекулы I2 и оксианиона IO-, а именно йод в положительно од39
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
новалентной форме со степенью окисления +1. Именно оксианион
йода, заключающий йод в состоянии окисления 1-/+ обусловливает
высокий антибактериальный эффект йодистого крахмала [2, 5, 9].
В организме человека под влиянием йодидоксидаз инертный
йодид анион превращается в физиологически активный I+1. Именно с этой формой йода, связаны синее окрашивание йодполимеров, а также их антисептические свойства. Тем самым подтверждается связь биологической активности галоидных соединений с их
цветностью [9].
Давно известно, что крахмал при реакции с йодом приобретает
синее окрашивание. Эта реакция очень чувствительна и специфична только для крахмала и йода. Чувствительность этой реакции в 5
раз больше, чем при выделении элементарного йода в бесцветных
жидкостях, так как глаз более чувствителен к синей окраске, чем к
желтой.
Йодкрахмальный комплекс, который характеризуется в спектре
мощной полосой поглощения с Х м — ~ 600 нм и, как показали исследования Мохнача В.О., заключающий йод в положительно одновалентной форме и разъясняет: поскольку речь идет о растворах йодистого крахмала, элементарного йода как такового в виде
молекулы I2 в них вообще нет, чем объясняется их нетоксичность.
В основном антибактериальное действие приписывает оксианиону
/0~(/1+), который содержит высокоактивный положительно одновалентный йод. Можно предполагать, что йодкрахмальный комплекс
сам по себе обладает антисептическими свойствами [33].
Поливиниловый спирт - высокомолекулярное соединение, синтетический полимер – дает с раствором йода-йодида такую же интенсивно синюю цветную реакцию, как и природный полимер крахмал. Содержание поливинилового спирта в йодиноле замедляет
выделение йода и удлиняет его взаимодействие с тканями организма, уменьшает также раздражающее действие йода на ткани [7,
34, 35].
Поливинилпирролидон – синтетический полимер, способен
обратимо присоединять другие вещества, в том числе лекарственные токсины, препараты, гормоны. Поливинилпирролидон в соединении с йодом образует водорастворимый комплекс, в котором на
19 молекул поливинилпирролидона приходится 1 молекула йода,
связанная с комплексом электростатической связью. Микроструктура молекулы имеет спиральную форму, макроструктура – глобулярную [36].
40
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Йод образует с молекулами органических соединений - донорами электронов - комплексы:
Донор + I2 = [Донор I]+ + IТакие переносы заряда способствуют стабилизации соединений включения с йодом. Условия йодкрахмальной реакции довольно сложные. Синее йодкрахмальное соединение образуется
комплексными ионами [I (I2)]-и [I (I2)2]-. Было установлено, что
молекулы йода закрепляются электростатическими связями в пространственной структуре амилопектина (n = 600-6000) - разветвленной фракции крахмала (не разветвлённая форма - амилоза, n
= 200-400).
В 1952 г изменение окраски йода с амилозой было подробно
изучено Б.Н. Степаненко и Е.М. Афанасьевой. Было установлено,
что не только амилоза и амилопектин, но и многие другие химические соединения дают подобную реакцию с йодом. В настоящее
время их известно около двадцати (агар-агар, алкалоиды хинной
коры и спорыньи, инсулин, набухшая целлюлоза, холевая кислота
и др.) [37]. Это очень важный факт, так как в процессе взаимодействия йода с полимерами, и в частности с крахмалом, происходит
йодкрахмальная реакция биологически сходная с натуральными
процессами, происходящими в растительной морской среде. Эта
реакция получения биологически активного положительного одновалентного йода (амилойодина) [30].
Крамер Ф. предложил считать все синие соединения, образуемые йодом, соединениями включения, содержащими цепочки йода
внутри каналов различных молекул органических веществ. При
этом атомы йода не занимают определенных координационных
мест и размеры молекул йода составляют 6,21 А, что соответствует
приблизительно удвоенному расстоянию между центрами атомов
йода. Величина 3,06 А отвечает возбужденному состоянию атомов
йода, когда отдельные молекулы сливаются в длинную йодную
цепь, в которой каждый атом йода связан с соседним посредством
одного электрона. Энергетические условия канала гигантской молекулы органического вещества обуславливают образование этой
модификации йода, которую Ф. Крамер назвал «синим йодом» [35,
38].
Делая выводы относительно строения йодно-крахмального
комплекса, можно отметить, что это тип соединения, в котором комплексообразование осуществляется за счет донорно-акцепторных
взаимодействий. Донор должен обладать достаточно высокой в
41
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
энергетическом отношении заполненной молекулярной орбиталью
и низким потенциалом ионизации, акцептор – достаточно низкой
вакантной молекулярной орбиталью и значительным сродством к
электрону [39].
Одним из признаков образования комплекса с переносом заряда является появление в электронном спектре поглощения полосы
переноса заряда, дополнительно к полосам поглощения исходных
компонентов, а также появление окраски.
Результаты спектрофотометрических исследований водных
растворов йода и растворов йода в присутствии высокополимеров
дают возможность утверждать, что они представляют собой равновесные системы и что цветность и антимикробные свойства этих
растворов зависят от присутствия йода в форме I-. Вопрос о форме
йода связанного с полимером, до сих пор является неизученным, и
представляет наибольший теоретический и практический интерес
[36].
Кроме того, в литературе имеются сведения, указывающие на
то, что образование комплексов крахмала с йодом сопровождается
появлением окраски, которое приписано взаимному обмену электронов между компонентами, типа переноса заряда. Образование
комплексов с крахмалом приводит к внедрению галогена в спираль
полисахарида. При этих условиях геометрическое расположение
благоприятно для обмена электронов между галогеном и атомами
кислорода органического вещества. В связи с этим, важно отметить, что для олигосахаридов крахмала с относительно короткой
цепью [С6H10O5]х устойчивость комплекса падает с уменьшением
x. Обобщая вышеизложенное, необходимо отметить, что система
йод в декстрине обладает стандартной формой соединения включения, где декстрин является четко структурированным полимером.
Соединения включения образуются при внедрении молекул или
атомов одного вещества в полости кристаллической решетки, или
молекулярные полости другого вещества, именуемого «хозяином».
Внедренные молекулы принято называть молекулами - «гостями».
Соединения включения образуются в тех случаях, когда молекулы
«хозяина» являются достаточно большими и имеют форму, благоприятную для включения молекулы - «гостя».
Согласно общепринятому мнению, образование комплекса
амилоза-йод связано со спиральной конформацией цепи амилозы,
в центре спирали, которой образуется каналообразная полость с
размерами, достаточными для размещения молекул йода [40].
42
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Комплекс крахмал-йод образует гексагональные кристаллы
(рисунок 2.1.). Это трудно объяснить какой-либо другой геометрией
цепей амилозы. Было обнаружено, что образование йодного комплекса не изменяет вязкости растворов амилозы [41].
Рис. 2.1. Схематическое изображение кристаллов с гексагональной
сингонией
Таким образом, в отношении структуры йодно-крахмального
комплекса можно сказать, что это соединение включения с донорно-акцепторной связью и валентностью, определяющейся отношением одного атома йода к восьми мономерным звеньям полимера,
с зарядом йодной компоненты равном нулю.
Мы считаем, что немаловажную роль в определении формы
йода в комплексе йод-крахмал, с точки зрения изучения биологических свойств, сыграли в 60-х годах XX века работы В.О. Мохнача
[5, 9].
При этом главной для нашей цели задачей является идентификация той формы йода, которая обусловливает биологическую
активность этих соединений. При образовании синего комплекса
прибавление крахмала приводит к исчезновению из раствора йода
в форме I3 и I2, с образованием системы IO - H2O – йодкрахмал.
Полученные результаты позволяют сделать следующий вывод:
в присутствии крахмала молекулы I2 распадаются с образованием сложных ионов I3 и IO-, причем в образовании йодкрахмального
комплекса принимает участие, только сложный анион I3, который
исчезает из раствора. Сложный анион IO- – напротив, остается в
растворе, не входя в комплекс. Концентрация его резко повышается за счет расщепления I2.
43
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Исследование йодкрахмальной реакции дает основание представить ее механизм в следующем виде:
2I2 + Н2О + крахмал → HI + HIO + крахмал → HIO + йодкрахмал
Результаты опытов В.О. Мохнача позволяют сделать вывод,
что водные растворы йода в присутствии крахмала представляют
подвижные равновесные системы.
Органически связанный йод сохраняется в течение длительного времени (более двух лет) и может точно дозироваться при употреблении. Это отличает его от солей йода, которые не подлежат
длительному хранению, быстро разлагаются при высокой влажности [5, 9, 37].
В последние годы исследователи несколько активизировали
работу по получению йодполимеров.
Елигбаева Г.Ж., Парецкая Н.А., Шайхутдинов Е.М. (2010) изучили ИК-спектроскопическим методом комплексообразование йода
с полимерами на основе винилового эфира моноэтаноламина.
Сополимеры простых виниловых эфиров аминоспиртов, имея
активные функциональные группы в боковой цепи, могут быть использованы как комплексообразователи, флокулянты и ионообменники [42, 43, 44, 45, 46].
Синтез сополимеров осуществляли методом радикальной сополимеризации в присутствии инициатора динитрила азоизомасляной кислоты в количестве 0,5% от суммарной массы мономеров
в воде и в диоксане. Полученные сополимеры для очистки их от
непрореагировавших мономеров переосаждали из водных растворов в ацетон или диэтиловый эфир и сушили до постоянного веса в
вакууме при комнатной температуре. ИК-спектры полимеров и йодполимерных комплексов были сняты на приборе UR-20 в таблетках
KBr. Сополимеры гидрохлорида винилового эфира моноэтаноламина с метакриловой кислотой и винилового эфира моноэтаноламина с метакрилатом натрия получали по методике [47].
Полученные сополимеры исследованы на комплексообразование с йодом при извлечении его из солевых растворов методом
комплексообразования и ультрафильтрации при рН - 2-3.
Йодный комплекс получали экспозицией сополимеров в парах йода. ИК-спектры комплексообразования полимера с йодом
давали уменьшение интенсивности поглощения карбоксилат-иона
на 1630 см-1 по отношению к интенсивности поглощения карбоксильной группы на 1700 см-1, что свидетельствовало о координации йода по карбоксильной группе. Значительное уменьшение ин44
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
тенсивности деформационных колебаний NH-групп на 1645- 1650
см-1 говорило о координации йода по аминогруппе, либо по – N-Н-I
– группе.
На основании спектроскопических данных были показаны процессы кислотно-основного взаимодействия на примере винилового
эфира моноэтаноламина с метакриловой кислотой и винилового
эфира моноэтаноламина с метакрилатом натрия. При добавлении
к раствору полимера раствора йода вначале происходит восстановление йода за счет взаимодействия йода с NН2-группой. При дальнейшем добавлении йода происходит его комплексообразование.
Все сополимеры винилового эфира моноэтаноламина исследованы на комплексообразование с йодом при извлечении его из
солевых растворов методом комплексообразования и ультрафильтрации при рН - 2-3. В зависимости от вида применяемого сополимера менялась степень извлечения йода.
Экспериментальные данные показывают, что все исследуемые
сополимеры могут быть с успехом применены как комплексообразователи при извлечении йода из морской воды [48].
В научно-исследовательском центре филиала Московского государственного университета технологий и управления имени К.Г.
Разумовского в г. Мелеуз (Республика Башкортостан) разработаны технологии использования целого ряда полимерных систем на
основе пектина, хитозана, геллановой камеди для стабилизации
и пролонгированного высвобождения биологически активных веществ при их пероральном введении. В качестве объектов исследования были выбраны образцы водорастворимых полисахаридов
– хитозан и геллановая камедь. Комплексы гомополимеров с йодом
синтезировали смешением раствора полимеров с раствором йода
и йодидом калия ([I2] / [KI]). При содержании хитозана в растворе
менее 5·10-4 моль/л наблюдалось характерное желтое окрашивание раствора. При содержании хитозана в растворе более 5·10-2
моль/л наблюдалось фиолетовое окрашивание раствора. Раствор
геллановой камеди с йодом при любой концентрации полимера
окрашивался в желтый цвет. УФ-спектры водных растворов соединений регистрировали в кварцевых кюветах толщиной 1 см относительно раствора соответствующей кислоты на спектрофотометре
«Specord M-40».
Для регистрации УФ-спектров в тонких пленках раствор комплекса наносили шпателем на кварцевую подложку и высушивали
на воздухе. Для определения времени удерживания йода в комплексном соединении изучали зависимость оптической плотно45
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
сти раствора, соответствующей максимуму поглощения йода, при
погружении тонкой пленки в воду. Для определения устойчивости
полимерных комплексов были использованы методы изомолярных
серий и мольных отношений Исследование физико-химических
свойств индивидуальных полимеров – хитозана, геллановой камеди и комплексного соединения «хитозан-геллановая камедь-йод-йодид калия» было проведено методом ИК-спектроскопии на ИК-Фурье. Рабочий диапазон измерений от 10 нм до 300 мкм. ИК-спектр
полимеров имеет диффузный характер, что свидетельствует об их
полимерной природе.
Результаты опытно-экспериментальных исследований показали, что в спектре хитозана наблюдается широкая полоса поглощения в области 3700-3100 см-1, принадлежащая валентным колебаниям ОН- и NH-связей (неразрешенная структура). Ее положение
и ширина свидетельствуют о существовании межмолекулярной
водородной связи с участием этих функциональных групп. При изучении ИК-спектров фиолетового комплекса «хитозан-геллановая
камедь-йод-йодид калия» интенсивность полосы в области 1750
см-1, соответствующей валентным колебаниям карбонильной группы геллановой камеди, снижается и сдвигается в низкочастотную
область на 5 см-1. Полосы в области 1506 см-1 и 1610 см-1, соответствующие деформационным колебаниям аминогруппы хитозана, смещаются в область меньших длин волн на 10 и 15 см-1
соответственно. В области спектра 900-1200 см-1 максимумы трех
пиков с частотами: 1153, 1076 и 894 см-1, принадлежащих валентным колебаниям С-О, С-N и С-С связей остова молекул хитозана и
геллановой камеди, сдвигаются в область меньших длин волн на
5-12 см-1. Вследствие этого можно предположить, что главными
активными центрами комплексообразования в органоминеральном
комплексе «хитозан-геллановая камедь-йод-иодид калия» (БАД
«Йодхитозан») являются гидроксильные или аминогруппы хитозана, а также карбонильная группа геллановой камеди, способствующие стабилизации комплекса. Результаты измерений размеров
хитозана и йодхитозана в сравнительном аспекте представлены в
виде распределения, которое показывает долю частиц с данным
диаметром. Как показали результаты лазерного наноструктурного
анализа наиболее крупные частицы имеет хитозан – диаметром
порядка 141,2 мкм. Модификация хитозана йодом приводит к существенному снижению размеров частиц, образуемой им дисперсии
в воде, где диаметр частиц равен 4,5 мкм. При этом в последнем
случае распределение имеет бимодальный характер с наличием
мелкодисперсного «хвоста» в области 9-30 мкм
46
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
На основании данных метода молярных отношений был проведен расчет константы устойчивости полученных комплексных соединений. Суть метода молярных отношений заключается в установлении зависимости изменения оптической плотности раствора
∆А от концентрации одного из компонентов при постоянной концентрации второго компонента и наоборот. Константы устойчивости
комплексных соединений составили 4,4×104 л/моль в комплексе
«йод-геллановая камедь» и 8,1×104 л/моль в органоминеральном
соединении «йод-хитозан». При добавлении к водному раствору
«камедь-йод-йодид калия» второго полисахарида – хитозана – в
электронном спектре смеси наблюдали резкое падение интенсивности полос поглощения трийодид ионов и их батохромный сдвиг.
Поскольку хитозан имеет положительно заряженную аминогруппу,
а геллановая камедь – отрицательно заряженную карбоксильную
группу, они агрегируют за счет электростатических взаимодействий
и водородных связей, образуя полиэлектролитный комплекс. Вероятно, такое уменьшение концентрации трийодид ионов связано с
конкурентной реакцией между полианионом – геллановой камедью
и ионами йода за активные центры хитозана. На основании данных
метода молярных отношений был сделан расчет константы устойчивости системы «хитозан- геллановая камедь-йод-йодид калия»,
которая составила 1,2×105 л/моль.
Таким образом, вышеприведенный спектр исследований позволяет предположить, что йод в гетероассоциате «геллановая
камедь-хитозан» будет в существенной мере стабилизирован. С
целью проверки данного предположения были поставлены эксперименты по изучению кинетики выхода йода из синтезированного
смешанного комплекса («хитозан-геллановая камедь-йод») и комплексов йода с индивидуальными полимерами в водную среду.
Отметим, что растворимость комплексов «хитозан-йод», «геллановая камедь-йод» и «хитозан-геллановая камедь-йод» различна.
Наибольшей растворимостью (порядка 97%) обладает комплекс
«геллановая камедь-йод». Чуть меньшей растворимостью характеризуется комплекс «хитозан-йод» (порядка 90%), а растворимость
гетероассоциата «хитозан-геллановая камедь-йод» составила 75%.
С целью изучения кинетики выхода йода из комплексных соединений нерастворимый осадок был отделен от раствора и дальнейшему анализу был подвергнут фильтрат. Как показали проведенные исследования, выход йода из комплексов в водную фазу
осуществляется достаточно быстро – в течение получаса, пока
происходит растворение комплексов в воде. Именно пониженной
47
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
растворимостью органоминерального соединения «хитозан-геллановая камедь-йод» в воде объясняются несколько меньшие значения оптической плотности, обусловленные содержанием йода в
водной фазе (так как часть йода остается в нерастворимом осадке).
В случае комплекса «хитозан-йод» и в случае комплекса «геллановая камедь-йод», содержание йода в водной фазе снижается в
течение суток более чем вдвое. Через трое суток фильтрат комплексов «хитозан-йод» и «геллановая камедь-йод» практически не
содержит йода. Данный характер закономерностей наблюдается
как для ионов йода I3- (кинетика выхода изучена при длине волны
290 и 360 нм), так и для полийодид ионов (кинетика выхода изучена
при длине волны 510 нм) [49].
Несмотря на хорошую растворимость данных комплексов в
воде и на первоначально большее содержание йода в фильтрате
комплексов «хитозан-йод» и «геллановая камедь-йод», йод в данных комплексных соединениях не является стабильным. Обращает на себя внимание также факт, что в комплексе «геллановая
камедь-йод» фактически отсутствуют полийодиды. В отличие от
комплексов «хитозан-йод» и «геллановая камедь-йод», йод, выделившийся из комплекса «хитозан-геллановая камедь-йод», остается в растворе и является стабильным в течение 4-5 суток (о чем
свидетельствует постоянство оптической плотности). о стабилизации образующегося комплексного соединения.
Таким образом, изучены механизмы комплексообразования
неорганических форм йода с биополимерами. Методом ИК-спектрометрии установлено, что главными активными центрами комплексообразования в органоминеральном комплексе «хитозан-геллановая камедь-йод-иодид калия» (БАД «Йодхитозан») являются
гидроксильные или аминогруппы хитозана, а также карбонильная
группа геллановой камеди, способствующие стабилизации комплекса. Показано, что модификация хитозана йодом проводит к существенному снижению размеров диспергированных частиц биополимера. [50].
При создании препарата Renessans был проанализирован
массив литературных источников об аналогичных по химизму с ним
препаратов или с его активной субстанцией компонентов, проявляющих сходный эффект [51].
При этом, были учтены как химические, так и биологические
свойства выявленных в ходе поиска веществ, для формирования
физико-химической основы разрабатываемого препарата, причем
как его активной субстанции, так и его транспортной составляющей,
48
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
таким образом, чтобы конечный продукт отвечал трем основным
требованиям, предъявляемым к противомикробным препаратам:
• высокая микробицидность (бактериоцидность, вирулицидность);
• низкая токсичность;
• пролонгированный эффект.
Для формирования препарата как целостной субстанции были
применены современные принципы комбинаторной химии.
В настоящее время хорошо известно, что углеводы являются
обязательными компонентами бактериальных клеточных стенок,
первыми вступающими в контакт с иммунной системой макроорганизма. Благодаря этому обстоятельству, механизмы врожденного
иммунитета включают в себя этапы распознавания бактериальных
углеводов и гликоконъюгатов, связанные с функцией ряда клеточных рецепторов пектинового типа, обнаруженных недавно на поверхности фагоцитирующих клеток.
Одна из главных функций компонентов, используемых в составе препарата, заключается в формировании особой структуры, которая бы сохраняла окислительную способность йода в некотором
умеренном состоянии для того, чтобы была возможность транспорта этих частиц на большие расстояния, для размещения в конечном
итоге по всему организму.
Процесс взаимодействия вируса с лекарственным средством
включает в себя множество стадий, среди которых в качестве основных следует выделить доставку препарата в межклеточную
жидкость, взаимодействие с мембраной клетки компонентов препарата, транспорт компонентов препарата через мембрану, вызываемый этим процессом, обратный транспорт веществ из клетки и
общая реакция клетки на воздействие и, наконец, процессы химического взаимодействия компонентов препарата на элементы вируса, приводящие к его дезактивации по определенным механизмам.
В водных растворах йод присутствует в семи формах: элементарный йод (I2), гипойодная кислота (HOI), катион йода (H2OI),
трийодид ион (I-), гипойодид ион (OI-), йодат ион (IO3) [52].
Молекулы йода, входящие в состав препарата Renessans, находится в нескольких активных формах за счет реакций комплексообразования. Роль матрицы выполняют комплексные соединения
йода с низко- и высокомолекулярными лигандами, образующими
ассоциаты. Их водный раствор имеет некоторые свойства геля. Это
позволяет йоду активно взаимодействовать практически со всеми классами веществ, входящими в состав организма человека и
49
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
млекопитающих, равно как и в состав мембран клеток. При этом
происходят реакции комплексообразования и галогенирования. Последовательность биохимических реакций в живом организме приводит к тому, что после взаимодействия одной из активных форм
йода образуется его новая активная форма (йод-фермент, йод-гормон, йод-биологическая мембрана, йод-белок и т.д.). (рисунок 2.2.).
Рис. 2.2. Химические и биологические формы йода
Каждый из этих вновь образованных активных комплексов
является «своим» для организма человека. За счет механизма узнавания и специфического химического взаимодействия йод, входящий в состав препарата Renessans, а также его комплексы йодируют ДНК- и РНК содержащие вирусы как внутри, так и вне клетки.
Это происходит посредством замещения атома водорода в группах
пуриновых и пиримидиновых оснований, входящих в состав молекул ДНК- и РНК содержащих вирусов. Вследствие йодирования образуются новые вещества, уже не обладающие свойствами вируса.
Именно на этом основано вирулицидное действие препарата [30].
Введение в состав препарата соли калия позволяет добиться
образования физико-химической системы, позволяющей длительное время сохранять главный действующий агент от дезактивации,
что позволяет обеспечить его доставку в организме в активном состоянии.
50
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Общеизвестными являются данные об образовании йодидного комплекса, состоящего из молекулярного йода и калия йодида,
растворенных в воде. Йод хорошо растворяется в водном растворе
йодида калия, образуя неустойчивое комплексное соединение, чем
пользуются для растворения больших количеств йода:
І2 + KІ ↔ K [І3]
С участием аскорбиновой кислоты в организме происходит
образование коллагена, серотонина из триптофана, а также образование катехоламинов и синтез кортикостероидов. Аскорбиновая
кислота также участвует в превращении холестерина в желчные
кислоты. Аскорбиновая кислота необходима для детоксикации в
гепатоцитах при участии цитохрома P450. Аскорбиновая кислота
нейтрализует супероксид-анион радикал до перекиси водорода,
восстанавливает убихинон и витамин Е. Стимулирует синтез интерферона, следовательно, участвует в иммуномодулировании. Тормозит высвобождение и ускоряет деградацию гистамина, угнетает
образование простагландинов и других медиаторов воспаления
и аллергических реакций. Поддерживает коллоидное состояние
межклеточного вещества и нормальную проницаемость капилляров (угнетает гиалуронидазу). Переводит двухвалентное железо в
трёхвалентное, тем самым способствует его всасыванию. Тормозит
гликозилирование гемоглобина, тормозит превращение глюкозы в
сорбитол. Аскорбиновая кислота (Витамин «С») является сильнейшим антиоксидантом – защищает липопротеины от окисления, антиатерогенное вещество.
Аскорбиновая кислота поддерживает рН состава и предохраняет активный центр – молекулу йода от ощелачивания, то есть поддерживают его стабильность и биологическую активность.
Таким образом, подобранные компоненты препарата, с одной
стороны, направлены на поддержание его стабильности и структурированности, а с другой, ответственны за прямое проявление
ряда свойств. При этом, на основании полученной конечной композиции компонентов препарата, можно предполагать наличие у
него, по крайней мере, двух основных свойств: антимикробного и
иммунокоррегирующего, так как в составе предложенного препарата оптимальным образом сочетаются компоненты антимикробного
и иммунокоррегирующего действия.
В целом компоненты препарата подобраны таким образом,
чтобы обеспечить селективное окисление главным действующим
51
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
агентом, йодом, жизненно важных молекулярных компонентов вирусов и бактерий (табл. 2.1).
Таблица 2.1.
Компоненты, входящие в состав препарта Renessans (на 100
миллилитров)
№
1
2
3
4
5
6
7
Компоненты
Йода
Калия йодида
Крахмала
Кислоты аскорбиновой
Глюкозы
Натрия хлорида
Воды для инъекций
Количество (грамм)
0,4 - 2,0
0,8 - 4,0
10,0 - 40,0
0,4 - 2,0
1,2 - 4,8
0,3 - 1,8
До 100,0
По своей природе представленный нами препарат относится
к йодофорам, поскольку активная субстанция препарата является
йодно-полимерным комплексом, выполняющим роль матрицы, и
образующей ассоциаты, из которых постепенно выделяется действующий агент – активная форма йода [53].
Таким образом,нами была разработан состав йодполимера,
получившего название Renessans (Возраждение).
2.3. Обоснование технологии получения йодполимера
Renessans
Majewski в 1896 году предложил способ получения йодамила:
йодная настойка смешивается с обыкновенным крахмалом в соотношении 1:2 и тщательно растирается в ступке. Процентное соотношение йода в настойке не приводится. Затем смесь подвергается высушиванию в течение нескольких часов. Полученный продукт
представляет темно-синий, нерастворимый, очень гигроскопичный порошок, сладковато-вяжущего вкуса с легким запахом йода.
Majewski назначал йодистый крахмал по следующим показаниям:
гнойные запущенные раны (заживление которых под йодкрахмальной повязкой шло очень быстро), флегмоны, венерические язвы,
панариций, потертости кожи ног у солдат. Для приготовления йодкрахмальной повязки йодистый крахмал смешивается с абсолютным спиртом в соотношении 1:4, в эту смесь погружалась стерильная гидрофильная марля, так чтобы на 1 см2 приходилось 75 гр
52
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
смеси. Так как йодистый крахмал дает осадок, необходимо смесь
равномерно распределить по поверхности марли. Затем пропитанная йодистым крахмалом марля развешивалась, как белье, на
шнур, и сушилась в течение 15 минут. Для повязки берали 4-16 слоев такой марли [29, 51].
Рецепт приготовления синего йода, как он предложен В.О. Мохначом, научно-обоснованный и многократно апробированный. В 50
мл теплой воды развести 1 чайную ложку с верхом картофельного
крахмала, размешать, добавить столько же сахара и несколько кристалликов лимонной кислоты. В это время вскипятить 150 мл воды
и в кипяток влить полученный раствор крахмала, то есть заварить
его. И только после охлаждения полученной смеси влить 1 чайную
ложку 5% настойки йода. Синий йод готов [5].
Надо помнить: йод не терпит перегревания. При перегреве он
теряет лечебные свойства, поэтому если при приготовлении синий
йод обесцветится, он становится негодным. Хранится он в холодильнике, как правило, 15-20 дней и годен до тех пор, пока сохраняет интенсивную темно-синюю окраску. Если сверху появится слой
воды – надо размешать синий йод или слить воду.
При настаивании крахмала с водой, даже с горячей, крахмальные зерна лишь разбухают и только небольшая часть полисахаридов крахмала переходит в раствор. Коллоидный раствор крахмала
готовят, размешивая в небольшом количестве воды, и выливая постепенно в кипящую воду при интенсивном перемешивании.
При быстром нагревании крахмала происходит расщепление
его гигантской молекулы на более мелкие полисахариды, называемые декстринами, имеющие молекулярную формулу как у крахмала (С6Н1005)х. Еще быстрее декстринизация идет в присутствии
кислот, декстрины с постепенно убывающей величиной молекулы
окрашиваются йодом соответственно в сине-фиолетовый, фиолетовый, красно-фиолетовый, оранжевый и желтый цвета.
Схема постепенно идущего гидролиза крахмала в упрошенном
виде выглядит так:
(С6Н10О5)n
крахмал
→
(С6Н10О5)х
декстрины
→ (С12Н22О5 )11 →
мальтоза
С6Н12О6
глюкоза
Из множества известных йодсодержащих лекарственных
средств, для парентерального применения предназначены только
хиниофон (подкожно и внутримышечно), йодантипирин, раствор
Люголя в большом разведении, натрия йодид.
53
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
В связи с довольно высокой токсичностью и небольшой эффективностью все эти средства в настоящее время практически не применяют и, соответственно, не освещаются в современной научной
литературе. Довольно широкая практика применения этих препаратов в прошлом была эмпирической.
Учитывая широкий спектр фармакологической активности препаратов йодполимеров мы разработали технологию производства
препарата Renessans в двух лекарственных формах – суспензия
для перорального использования и суспензии для внутривенных
инъекции [54].
Технология приготовления суспензии для перорального
применения препарата Renessans
Технологическая схема производства препарата Renessans,
суспензии для перорального применения, представлена на рисунке 2.3.
Кт - технологический контроль,
Км – микробиологический контроль,
Кх – химический контроль
Рис. 2.3. Технологическая схема производства суспензии препарата
Renessans для перорального применения
54
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
ВР 1 Вспомогательные работы
ВР 1.1 Взвешивание сухих ингредиентов. На весах медицинских взвешивают йод, калия йодид, крахмал, глюкозу, натрия хлорид, аскорбиновую кислоту.
ВР 1.2 Отмеривание воды для инъекций. В мернике отмеряется вода для инъекций.
ВР 1.3 Измельчение кристаллического йода. В шаровой мельнице измельчают кристаллический йод. После этой операции проводится технологический контроль (Кт): определяется размер частиц йода и однородность порошка.
ТП 1 Приготовление композиций ингредиентов
ТП 1.1 Растворение калия йодида и йода. Калия йодид растворяют в воде для инъекций в соотношении 1:0,75, в коцентрированном растворе калия йодида растворяют йод.
ТП 1.2 Приготовление растворов. В воде для инъекций последовательно растворяют глюкозу, натрия хлорид и аскорбиновую
кислоту.
ТП 1.3 Приготовление суспензии крахмала. В реакторе с лопастным смесителем к воде для инъекций добавляется крахмал, и
смешивается в течение 30 минут.
ТП 2. Приготовление препарата
ТП 2.1 Смешивание композиций ингредиентов. Растворы и суспензию крахмала смешивают в купажной емкости, тщательно перемешивают. Здесь проверяют однородность смеси (Кт)
ТП 2.2 Гомогенизация препарата. Приготовленную смесь переносят в бочку через роторно-пульсационный аппарат и диспергируют. После этой операции из готового препарата берут пробу
и проводят анализ на соответствие нормативным требованиям в
контрольно-аналитической и микробиологической лабораториях
проводятся
контроль технологический (Кт): проверяется однородность препарата по цветности и распределению частиц крахмала по всему
объему препарата;
контроль химический (Кх): проводится определение подлинности количественного содержания ингредиентов;
контроль микробиологический (Км): проводится проверка на
микробную обсеменненость.
УМО 1 Фасовка, упаковка и маркировка
УМО 1.1 Фасовка. Готовую суспензию из бочки переносят в
дозирующий автомат и фасуют во флаконы из темного стекла по
200мл, укупоривают капроновыми пробками и закрывают завинчивающимися крышками.
55
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
УМО 1.2 Маркировка. На каждый флакон наклеивают этикетку из бумаги этикеточной. На этикетке и пачке указывают название
страны–производителя, название предприятия-изготовителя, его
товарный знак, адрес, название препарата на латинском, государственном и русском языках, состав, условия хранения, регистрационный номер, номер серии, срок годности, условия отпуска.
УМО 1.3 Упаковка. Каждый флакон вместе с листком вкладышем на государственном и русском языках помещают в пачку из
картона коробочного, марки «А» по ГОСТ 7933-89 Е. Допускается
текст инструкции по применению наносить на упаковку.
Технология приготовления суспензии для внутривенных
инъекций препарата Renessans
Технологическая схема производства суспензии для инъекций препарата «Renessans» представлена на рисунке 2.4.
Кт - технологический контроль,
Км – микробиологический контроль,
Кх – химический контроль
Рис. 2.4. Технологическая схема производства суспензии препарата
Renessans для внутривенных инъекционного применения
56
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
ВР 1 Вспомогательные работы
ВР 1.1 Создание асептических условий. Асептические условия
производства суспензии для инъекций «RENESSANS» приводятся
в соответствие с требованиями GMP.
ВР 1.2 Взвешивание и отмеривание ингредиентов. На весах
медицинских взвешивают йод, калия йодид, крахмал, глюкозу, натрия хлорид, аскорбиновую кислоту. В мернике отмеряется вода
для инъекций.
ВР 1.3 Измельчение кристаллического йода. В шаровой мельнице измельчают кристаллический йод. После этой операции проводится технологический контроль (Кт): определяется размер частиц йода и однородность порошка.
ТП 1 Приготовление композиций ингредиентов
ТП 1.1 Растворение калия йодида и йода. Калия йодид растворяют в воде для инъекций в соотношении 1:0,75, в коцентрированном растворе калия йодида растворяют йод.
ТП 1.2 Приготовление растворов. В воде для инъекций последовательно растворяют глюкозу, натрия хлорид и аскорбиновую кислоту.
ТП 1.3 Приготовление суспензии крахмала. В реакторе с лопастным смесителем к воде для инъекций добавляется крахмал, и
смешивается в течение 30 минут.
ТП 2. Приготовление препарата
ТП 2.1 Смешивание композиций ингредиентов. Раствор калия
йодида и йода, раствор глюкозы, натрия хлорида и аскорбиновой
кислоты и суспензию крахмала смешивают в купажной емкости,
тщательно перемешивают. Здесь проверяют однородность смеси
(Кт).
ТП 2.2 Гомогенизация препарата. Приготовленную смесь переносят в бочку через роторно-пульсационный аппарат и диспергируют. После этой операции из готового препарата берут пробу
и проводят анализ на соответствие нормативным требованиям в
контрольно-аналитической и микробиологической лабораториях
проводятся:
• контроль технологический (Кт): проверяется однородность
препарата по цветности и распределению частиц крахмала
по всему объему препарата;
• контроль химический (Кх): проводится определение подлинности количественного содержания ингредиентов;
• контроль микробиологический (Км): проводится проверка
на микробную обсеменненость.
57
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
УМО 1 Фасовка, упаковка и маркировка
УМО 1.1 Фасовка. Готовую суспензию из бочки переносят в
дозирующий автомат и фасуют во флаконы из темного стекла по
200мл, укупоривают капроновыми пробками и закрывают завинчивающимися крышками.
УМО 1.2 Маркировка. На каждый флакон наклеивают этикетку из бумаги этикеточной. На этикетке и пачке указывают название
страны–производителя, название предприятия-изготовителя, его
товарный знак, адрес, название препарата на латинском, государственном и русском языках, состав, условия хранения, регистрационный номер, номер серии, срок годности, условия отпуска,
УМО 1.3 Упаковка. Каждый флакон вместе с листком вкладышем на государственном и русском языках помещают в пачку из
картона коробочного марки «А» по ГОСТ 7933-89 Е. Допускается
текст инструкции по применению наносить на пачку.
Таким образом, нами была разработана технология производства суспензии препарата Renessans для перорального внутривенного применения.
2.4. Применения различных методов по определению
качественных показателей йодполимерных
препаратов
Химические и биологические свойства йодполимерных комплексов определяются главным образом теми формами йода, которые продуцируются комплексом и выделяются в раствор, поэтому
определение валентных состояний йода в самих комплексах представляет важную проблему.
Для исследования йодполимеров в этом направлении необходимо изолировать комплекс от остальных компонентов раствора,
извлечь из него йод и идентифицировать полученные таким образом формы этого элемента.
В результате были изолированы комплексные соединения йода
с крахмалом, поливиниловым спиртом и поливинилпирролидоном
в водном растворе с помощью нитрата серебра, что позволило обнаружить в спектре единственнную полосу поглощения с длиной
волны 375 нм (йодполивинилпирролидон) и 600 нм (йодистый крахмал и йодполивинилспирт).
В процессе диализа этих растворов в спектре диализата появляются две полосы поглощения:
58
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
• с длиной волны 288 нм, соответствующая инактивному I3-;
• с длиной волны 350 нм, соответствующая IО-.
Результаты проведенных иследований могут быть стимулом
для разработки надежных методов спектрофотометрического анализа.
Спектрофотометрические исследования показали, что водные
растворы йода в присутствии полимеров представляют собой сложные системы. Кроме йода, непосредственно связанного с полимером в растворе находятся ряд простых и сложных анионов. Водные
растворы йодполимеров можно сравнить с растворами йода в биологических жидкостях, поскольку последние содержат естественные полимеры – белковые соединения и разные полисахаридные
комплексы [55, 56].
Для количественного определения йода в биологических жидкостях предложен ряд методов, основанных на цветной реакций
йода с крахмалом с последующим колометрированием или спектрофотометрическим поглощением в видимой области при 575 –
625 нм.
Йодкрахмальной реакцией пользуются, начиная с XIX века
(1840 г - Дюпаскье, а в 1853 г - Бунзен предлагают метод количественного йодометрического анализа; метод улучшен Шварцем в
1857 г, предложившим титровать йод не сернистой кислотой, как
его предшественники, а тиосульфатом натрия). Однако до самого
последнего времени ей не было дано удовлетворительного объяснения.
Ясность в этот вопрос внесло открытие нового класса веществ,
названных соединениями включения и занимающих промежуточное
положение между твердыми растворами внедрения и химическими
соединениями. Соединения включения получаются при вхождении
молекул одного индивидуального химического вещества в свободные полости внутри молекул (или кристаллических решеток).
Эти методы дают возможность определять только ту часть
йода в растворах, которая непосредственно связывается с крахмалом или с другими аналогичными соединениями, давая окрашенный, чаще всего синий продукт, концентрация которого регистрируется той или иной оптической системой. В растворах йода
в присутствии естественных и синтетических полимеров находятся
простые или сложные анионы, поглощающие свет в ультрафиолетовой области и совершенно бесцветные или слабоокрашенные в
красновато-желтый цвет. Поскольку оптическое определение йода
основывается обычно на регистрации одного доминирующего спек59
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
трального поглощения в узком диапазоне в видимой области, эта
«ультрафиолетовая фракция» йода ускользает от определения.
Необходимо еще принять во внимание, что растворы йодполимеров представляют собой равновесные системы, в которых в зависимости от разных физических факторов, не поддающихся учету,
происходит постоянный обмен между йодом, связанным с полимером, и неорганической частью, состоящей из различных простых и
сложных йонов йода. Отсюда следует, что методы количественного
определения йода, основанные на регистрации окрашенных молекул, например йодистого крахмала, не могут дать удовлетворительных результатов, не только потому, что они не отражают содержание ионных компонентов раствора, но и потому, что количество
йода, связанного с полимером непостоянно и неустойчиво. Йод
отщепляясь от полимера, переходит в другие формы, не поглощающие в области 575 – 625 нм.
Большое разнообразие форм йода в состоянии равновесия наблюдается не только в присутствии полимеров, но и в сравнительно простых водных и неводных системах, спектрофотометрическое
исследование которых обнаруживает поглощение в широком диапазоне частот. Поэтому в этих растворах невозможно суммарное
определение йода в узкой области спектра.
Вышеизложенное объясняет непостоянные и заниженные значения, которые получаются при количественных определениях
йода колориметрическими и спектрофотометрическими методами.
Разработка надежного метода количественного определения
йода в присутствии полимеров, помимо своего очевидного практического значения, представляет большой теоретический интерес,
так как характер связи йода с полимером в значительной мере является «загадкой».
Разработано количественное определение йода в йодиноле,
полученного в результате взаимодействия молекулярного йода,
йодистого калия, поливинилового спирта и воды. Количественное
определение йода титрованием тиосульфатом натрия показала,
что такой метод применим для растворов йодинола.
Также применим метод аргентометрического титрования йода
в присутствии полимеров - поливинилспирта, поливинилпирролидона, крахмала. Этим методом можно с достаточной точностью
определять суммарное содержание йода в присутствии полимеров.
60
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
2.5. Исследования по стандартизации препарата
Renessans
Испытание препарата на пирогенность
Испытание проводили на здоровых кроликах обоего пола весом 1,5-2,5кг, содержащихся на полноценном рационе. Кроликов
отбирали за 5 дней до опыта. Каждого кролика содержали в отдельной клетке в помещении с постоянной температурой (допустимые
отклонения ±3º). При уборке клеток и взвешивании животных их
оберегали от возбуждения (избегая шума, стука, резких движений).
Взвешивание кроликов проводили через день, до дачи корма,
всего не менее 3 раз. В течение срока, предшествующего опыту,
следили, чтобы кролики не теряли в весе. Животные, теряющие в
весе, к опыту не допускались.
В течение 3 суток перед испытанием у каждого подопытного
кролика измеряли температуру. Измерения проводили ежедневно
утром, до дачи корма, при помощи медицинского термометра. Термометр вводили в прямую кишку на глубину 7-7,5см на время, необходимое для достижения максимальной температуры, но не менее чем на 5 минут. Исходная температура подопытных кроликов
должна была составлять 38,5-39,5º. Животные с более высокой или
низкой температурой к опыту не допускались.
За 24 часа до опыта кроликов переводили в помещение, в котором проводили испытание на пирогенность. Определение проводили в отдельной комнате с постоянной температурой 18-22 ºС,
изолированной от шума, в спокойной обстановке. Вечером накануне опыта у животных отбирали остаток корма. До опыта и во время опыта животные корма не получали (воду до опыта давали без
ограничения).
Препарат Renessans, растворители, шприцы и иглы были стерильные и апирогенные. Испытуемый препарат Renessans вводили кроликам в ушную вену. Для каждого кролика брали отдельную
иглу. Препарат вводили подогретый до 37 ºС. Количество вводимого раствора – 10 мл на 1 кг веса кролика. Все количество вводили в
течение 2 минут.
Испытуемый раствор применяли на 3 кроликах. Введение раствора производили не более чем через 30 минут после измерения
исходной температуры. После введения раствора температуру измеряли 3 раза с промежутками в 60 минут.
Препарат Renessans считали апирогенным, если после введения ни у одного из 3 подопытных кроликов ни при одном из трех
61
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
измерений не наблюдалось повышения температуры более чем на
0,6 ºС по сравнению с исходной температурой, и в сумме повышение температуры у 3 кроликов не превышало 1,4 ºС.
Количественное определение составных частей препарата
Йод. Около 5 г (точная навеска) исследуемого препарата помещали в коническую колбу с притертой пробкой, вместимостью 100
мл, хорошо перемешивали и титровали 0,1 М раствором натрия тиосульфата до обесцвечивания (без индикатора). Титрование вели
медленно, добавляя раствор по каплям. Оттитрованную жидкость
сохраняли для определения калия йодида и натрия хлорида.
Количество йода (Х), в процентах, вычисляли по формуле:
где:
1 мл 0,1 М раствора тиосульфата натрия соответствует 0,01269
г I (йода), которого в препарате должно быть от 0,8% до 1,2%.
Калия йодид и натрия хлорид. К раствору, полученному после
титрования йода, прибавляли 25 мл воды очищенной, доводили рН
0,1 М раствором натрия гидроксида до величины 7,0, прибавляли
2 мл кислоты уксусной разведенной, 5 капель раствора натрия эозината и титровали 0,01 М раствором серебра нитрата до ярко-розовой окраски.
Суммарное количество калия йодида и натрия хлорида (Х1) в
препарате определяли по формуле:
где:
62
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Содержание калия йодида и натрия хлорида в препарате должно было быть 2,3-3,1%.
Микробиологическая чистота
Испытания проводили методом прямого посева. В 1 мл препарата допускается наличие не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов (суммарно).
Не допускается наличие бактерий семейства Enterobacteriaceae,
Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus.
Определение общего числа бактерий, Определение общего
числа грибов. Аппаратура: автоклав Systec серии V 120 (Германия), термостат BD-53, Binder (Германия), ламинарный бокс Biostar
II A/G, Telstar (Испания), фазово-контрастный микроскоп с блоком
люминесценции Leica DM 2500 (Швейцария), весы лабораторные
ALC-210.4 «Sartorius AG» (Германия), фармацевтический холодильник Sanyo MPR 1013R (Япония), система очистки воды, Arium
611VF (Германия).
Физические и физико-химические характеристики
Определение запаха. Проводили в соответствии со статьей
2.3.4 Европейской Фармакопеи (Ch.2.3.4, Eur. Ph.5, р.99), от 0,5 г
до 2,0 г испытуемой субстанции распределяли тонким слоем на часовом стекле диаметром от 6 см до 8 см; через 15 мин определяли
запах или делали вывод о его отсутствии.
Величина рН. Потенциометрическое определение рН проводили в соответствии с Ch. 2.2.3, Европейской Фармакопеи (Ch. 2.2.3
Ph. Eur 6, р. 26-27).
Проводили калибровку рН-метра при температуре +20°С со
стандартными растворами (рН 4, 7 и 10) в стакане вместимостью 30
мл. Затем помещали в стаканчик испытуемый раствор, погружали
электрод и считали с дисплея значения рН.
Аппаратура: рН-метр РВ-11 с комбинированным рН-электродом со встроенным термодатчиком, калибровочные стандартные
растворы со значением рН 1,09, 4 и 7.
Растворимость. Растворимость (смешивание) определяли
в соответствии с Руководством OECD Guideline for the testing of
chemicals. #105: Water Solubility.
Растворимость в воде: помещали 0,1 мл препарата в пробирку
с притертой пробкой вместимостью 10 мл и постепенно добавляли дистиллированную воду всякий раз встряхивая и просматривая,
произошло ли растворение. Если препарат, при добавлении 10
63
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
мл воды, все еще не растворился, то следует переместить его в
100-миллилитровый мерный цилиндр.
Растворимость в растворителях. Прибавляют возрастающие
количества препарата к постоянному количеству (10 мл) растворителя.
Везде, где используется вода, и не указываются особенности,
подразумевается дистиллированная вода.
Аппаратура: стеклянные цилиндры вместимостью 10,0; 25,0;
50,0; 100,0 мл, пипетки вместимостью 1,0; 5,0; 10,0 мл.
Температура затвердевания. Температура затвердевания
представляет собой максимальную температуру, при которой происходит затвердевание переохлажденной жидкости. Ее определяют в соответствии со статьей 2.2.18 Европейской Фармакопеи. (Ch.
2.2.18, Eur. Ph. 5, р. 34).
Аппаратура: термостат жидкостный ТЖ-ТС-01НМ (Россия), стакан вместимостью 400 мл, пробирки из стекла «пирекс» диаметром
25 и 40мм и высотой 150мм, 2 термометра с диапазоном охвата
температуры от + 30 до -30 ºС и точностью ±0,1 ºС.
Выполнение измерений. Прибор (рисунок 2.5.) состоит из пробирки для проведения испытания диаметром около 25 мм и длиной около 150 мм, помещенной внутри другой пробирки диаметром
около 40 мм и длиной около 160 мм. Внутренняя пробирка закрыта пробкой, снабженной термометром длиной около 175 мм
с ценой деления 0,2°С, который закреплен
таким образом, чтобы ртутный шарик находился на расстоянии около 15 мм от дна
пробирки.
В пробке имеется отверстие, через которое проходит вал мешалки, изготовленный из стеклянного стержня или другого
подходящего материала, согнутый на конце под прямым углом в виде петли, внешний диаметр которой около 18 мм.
Внутреннюю пробирку вместе с внешней пробиркой располагают в центре стакана вместимостью 1 л, содержащего
подходящую охлаждающую жидкость, уровень которой находится в пределах 20 мм
Рис. 2.5. Прибор для
от верхнего края стакана. Охлаждающая
определения темперабаня также должна быть снабжена термотуры затвердевания
метром.
64
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Термометр укрепляют таким образом, чтобы ртутный шарик
находился посередине слоя испытуемого вещества. Температуру
отмечают каждые 30 с. Вначале происходит постепенное понижение температуры, затем, при появлении твердой фазы, она остается некоторое время постоянной или повышается перед тем, как
стать постоянной, а затем снова понижается. Отмечают наиболее
высокую температуру, остающуюся короткое время постоянной с
начала затвердевания вещества. Если вещество остается жидким
при ожидаемой температуре затвердевания, то затвердевание вызывают потиранием стенок внутренней пробирки, термометром или
внесением небольшого количества ранее полученного застывшего
вещества.
Плотность. Относительная плотность измеряется по Ch. 2.2.5,
Eur. Ph. 5, р. 27-28.
Выполнение измерений. Чистый сухой пикнометр взвешивают
с точностью до 0,002 г, заполняют с помощью сухой воронки дистиллированной водой немного выше метки, закрывают пробкой и
выдерживают в течение 20 минут в термостате, в котором поддерживают постоянную температуру воды 20 ºС с точностью до 0,1ºС.
При этой температуре уровень воды в пикнометре доводят до метки, быстро отбирая излишек воды при помощи пипетки или свернутой в трубку полоски фильтровальной бумаги. Пикнометр снова
закрывают пробкой и выдерживают в термостате еще 10 мин, проверяя положение мениска по отношению к метке. Затем пикнометр
вынимают из термостата, фильтровальной бумагой вытирают внутреннюю поверхность горлышка пикнометра, а также весь пикнометр снаружи, оставляют под стеклом аналитических весов в течение 10 минут и взвешивают с той же точностью.
Пикнометр освобождают от воды, высушивают, споласкивая
последовательно спиртом и эфиром (сушить пикнометр путем нагревания не допускается), удаляют остатки эфира продуванием
воздуха, заполняют пикнометр испытуемой жидкостью и затем производят те же операции, что и с дистиллированной водой.
Плотность р20 (г/см3) вычисляют по формуле:
где:
65
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Аппаратура: пикнометр на 10 или 25 мл, термостат жидкостный
ТЖ-ТС-01НМ (Россия).
Вязкость методами капиллярной и ротационной вискозиметрии. Вязкость разбавленных растворов препарата определяют методом капиллярной вискозиметрии на капиллярном вискозиметре
Освальда, а вязкость самого препарата – методом ротационной вискозиметрии (Ch. 2.2.9, Eur. Ph. 5, р.29-30).
Выполнение измерений. В колено вискозиметра (рисунок 2.6.)
следует налить измеренный объем раствора препарата. Поместить
вискозиметр с анализируемой жидкостью в термостат. Когда жидкость достигнет необходимой температуры (с погрешностью ± 0,05
оС) произвести подсасывание анализируемой жидкости (резиновой
грушей) через верхнее отверстие капилляра до тех пор, пока анализируемая жидкость не поднимется выше верхней отметки измерительного резервуара. Измерить время, за которое анализируемая
жидкость стечет от верхней отметки измерительного резервуара до
нижней отметки измерительного резервуара под действием силы
тяжести.
1 и 2 трубка,
3 – измерительный резервуар,
М1 и М2 – отметки измерительного резервуара.
Рис. 2.6. Вискозиметр стеклянный капиллярный серии ВПЖ
66
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Относительная вязкость. Измеряют время истечения между верхней и нижней меткой той жидкости, относительно которой
проводится измерение (в данном случае дистиллированная вода).
Затем в том же чистом и сухом вискозиметре при тех же условиях
определяют время истечения исследуемой жидкости. Одновременно измеряют плотности изучаемых жидкостей пикнометром. Расчет
ведут по формуле:
где:
Используемое оборудование: Вискозиметр стеклянный типа
ВПЖ с внутренним диаметром 0,99мм, значение постоянной
0,08291 (ГОСТ 10028-81), термостат жидкостный ТЖ-ТС-01НМ
(Россия).
Измерение вязкости препарата выполняют методом ротационной вискозиметрии на ротационном вискозиметре Visco Star plus L
фирмы «Фунгилаб», Испания (диапазон измерения вязкости 1,52000000 мПа·с) согласно п. 2.2.9 Eur. Ph. 5, р.29-30. Прибор заранее калибруется стандартными растворами RT1000 и RT5000 с
значениями вязкостей 1106 и 5585 мПа·с при 20ºС, соответственно.
Принцип действия наиболее часто используемых ротационных
вискозиметров заключается в измерении силы сдвига в жидкой среде, расположенной между двумя коаксиальными цилиндрами, один
из которых вращается двигателем, а второй приводится во вращение первым. Вязкость (структурная, эффективная или кажущаяся
вязкость) характеризуется углом (М), на который поворачивается
второй цилиндр; этот угол пропорционален моменту силы, выраженному в ньютон-метрах (Н.м).
В случае ламинарного потока, динамическую вязкость η, выраженную в паскаль-секундах (Па.с), рассчитывают по формуле:
67
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
где:
Выполнение измерений. В пункте меню «Измерения» следует
задать параметры измерения вязкости: тип шпинделя, число оборотов и плотность испытуемого раствора. Выбор типа шпинделя и
скорости его вращения является важным моментом для получения
достоверных результатов. В данном случае наиболее подходящим шпинделем является TL7, а скорость вращения 200 об/мин.
В общем случае значение вязкости, определяемое вискозиметром
должно находиться в диапазоне 15-95 % от максимального значения
данной шкалы. Если известна ориентировочная вязкость исследуемого раствора, то следует скорректировать комбинацию шпиндель/
скорость вращения с помощью таблиц, приведенных в руководстве к прибору. По умолчанию плотность жидкости устанавливается равной единице, поэтому на дисплее выводится динамическая
вязкость (единица измерения задается оператором заранее). Если
необходимо получить кинематическую вязкость, оператор заранее
должен внести в память прибора значение известной плотности:
ν
=
η
ρ
Препарат в количестве около 18 мл поместить в адаптер LCP,
который в свою очередь помещается в лабораторный стакан емкостью 600 мл (диаметр 83мм или больше). Погружают стакан в водяную баню Thermovisc 100-B9 и термостатируют в течение 30 мин
при заданной температуре с точностью 0,1оС. Измеренное значение вязкости отображается на дисплее
Присутствие солей тяжелых металлов. Проверяют на предельное содержание свинца согласно (Ch.2.48 Eur. Ph. 5, р.104-107).
Содержание сахаров. Определение сахаров согласно Межд.
Фарм. 3-изд, т.2, с.148.
Содержание белков (протеинов). Для количественного определения белков используется колориметрический метод в соответствии.
68
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Стабильность препарата Renessans
Испытания стабильности проводят в соответствии с Руководством CPMP/ICH/2736/99 «Stability Testing of New Drugs and
Products».
Вид испытаний стабильности: долгосрочные (каждые 6 месяцев).
Условия испытаний стабильности: средняя температура хранения 6 ± 2 ºС; Влажность 60% ±5% ОВ;
Порядок отбора проб: От каждой партии выборочно отбирают
10% препарата. Объем средней пробы должна быть не менее 100
см3. Среднюю пробу делят на две части. Половину средней пробы
используют для анализа, другую упаковывают в полиэтиленовый
пакет, снабжают этикеткой, опечатывают и отдают на хранение в
архив (арбитражные пробы). Срок хранения арбитражных проб –
до истечения срока годности.
Частота и продолжительность испытаний: Каждые 6 месяцев.
Методы испытаний для исследования стабильности препарата
1. Определение цвета и консистенции проводят визуально
при дневном естественном освещении и комнатной температуре.
2. Определение запаха проводят органолептическим методом - в соответствии со статьей 2.3.4 Европейской Фармакопеи (Ch.2.3.4, Eur. Ph. 5, р. 99).
3. Определение величины рН – потенциометрическим методом (Ch. 2.2.3 Ph. Eur. 5, р. 26-27).
4. Температура затвердевания (Ch. 2.2.18, Eur. Ph. 5, р. 34)/
5. Измерение вязкости разведенных растворов.
6. Определение плотности (Ch. 2.2.5, Eur. Ph. 5, р. 27-28).
7. Количественное определение йода.
8. Определение массовой доли общего иодид иона.
9. Содержание белков (протеинов). Для количественного
определения протеинов используется колориметрический
метод в соответствии с ГФ Х1, вып.2, с.30.
10. Определение сахаров согласно Межд. Фарм. 3-изд, т. 2,
с.148.
11. Критерии стабильности: отклонение показателей не более
чем 5 % от базовых показателей.
69
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
12. Методы микробиологического контроля лекарственных
средств согласно Ch.5.1.4, Eur. Ph.6, p. 529-531
Все эксперименты проводились в стерильных условиях, в 3-х
повторениях. Использовались готовые питательные среды фирмы
«Hi Media» производства Индия. Среды готовились согласно прилагаемым прописям.
В результате проведенных исследований по стандартизации нами были определены стандартные показатели препарата
Renessans для перорального и внутривенного введения.
Препарат «RENESSANS для перорального приема
Описание. Сиропообразная жидкость от темно-синего до черного цвета, с характерным вкусом и запахом, свойственным препаратам йода.
Подлинность. К 5 мл препарата прибавляли 5 мл раствора натрия тиосульфата 0,1 М; раствор мгновенно обесцвечивается (йод).
Значение рН. от 3,0 до 5,0.
Сухой остаток. Не менее 9,0 %.
Плотность. 1,03-1,08 г/см3.
Микробиологическая чистота. Не допускается наличие бактерий семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa и
Staphylococcus aureus.
Количественное определение. Йод от 0,8% до 1,2%, калия йодид и натрия хлорид 2,3-3,1%.
Упаковка. Стеклянные флаконы по 10 мл типа ФО-1-10 герметически укупоренные пробками пластмассовыми и с завинчивающими пластмассовыми крышками. На каждый флакон наклеивают
этикетку из бумаги этикеточной по ГОСТ 7625-86 или писчей по
ГОСТ 18510-87. По 1 флакону с инструкцией по медицинскому применению на государственном и русском языках, помещают в картонную пачку из картона коробочного согластно ГОСТ 7933-89. По
10 флаконов в картонной пачке помещают в коробку картонную.
Групповая и транспортная упаковка в соответствии с ГОСТ 1776890.
Маркировка. Утвержденные макеты упаковок. Маркировка
транспортной тары в соответствии с ГОСТ 14192-96.
Транспортирование. В соответствии с ГОСТ 17768-90.
70
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Препарат «Renessans», суспензия для внутривенных
инъекций
Описание. Сиропообразная жидкость от темно-синего до черного цвета, с характерным вкусом и запахом свойственным препаратам йода.
Подлинность. К 5 мл препарата прибавляли 5 мл раствора натрия тиосульфата 0,1 М; раствор мгновенно обесцвечивается (йод).
Значение рН. От 3,0 до 5,0.
Сухой остаток. Не менее 9,0 %.
Плотность. 1,03-1,08 г/см3
Стерильность. Препарат должен быть стерилен. Испытания
проводят методом прямого посева.
Пирогенность. Препарат должен быть апирогенен. Тест-доза
0,1 мг препарата разведенная в 1 мл воды для инъекций на 1кг массы животного, внутривенно.
Количественное определение. Йод от 0,8% до 1,2%, калия йодид и натрия хлорид 2,3-3,1%.
Упаковка. Стерильные стеклянные флаконы по 10 мл типа ФО1-10 из трубки стеклянной по ТУ 9461-010-00480514-99 или ИСО
8362-1, герметически укупоренные пробками резиновыми по ТУ
38.0061108-90 или импортными (ИСО 8362-2), обжатые колпачками
алюминиевыми по ТУ 9467-003-05749470-94 или по ГОСТ 51314-99
или импортными (ИСО 8362-2). На каждый флакон наклеивают этикетку из бумаги этикеточной по ГОСТ 7625-86 или писчей по ГОСТ
18510-87.
По 1 флакону с инструкцией по медицинскому применению на
государственном и русском языках, помещают в картонную пачку
из картона коробочного согластно ГОСТ 7933-89. По 10 флаконов
в картонной пачке помещают в коробку картонную. Групповая и
транспортная упаковка в соответствии с ГОСТ 17768-90.
Маркировка. Утвержденные макеты упаковок. Маркировка
транспортной тары в соответствии с ГОСТ 14192-96.
Транспортирование. В соответствии с ГОСТ 17768-90.
71
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Определение сроков хранения препарата Renessans для
перорального применения и для внутривенных инъекции
Испытания стабильности препарата «Renessans», суспензии для внутреннего применения, в соответствии с Руководством
CPMP/ICH/2736/99 «Stability Testing of New Drugs and Products».
Вид испытаний стабильности: Долгосрочные (каждые 6 месяцев).
Условия испытаний стабильности: Средняя температура хранения 6±2 ºС, Влажность 60% ±5% ОВ;
Частота и продолжительность испытаний: Каждые 6 месяцев.
Результаты испытаний стабильности суспензии для перорального применения препарата Renessans и суспензии для внутривенных инъекций препарата Renessans приведены в таблицах 2.2. и
2.3. соответственно.
Результаты исследования по стандартизации препарата
Renessans проведенные по физико-химическим показателям для
суспензии для внутреннего применения и для суспензии для инъекций показали, что разработанные лекарственные препараты соответствует требованиям нормативных документов.
Определены сроки годности препаратов для внутреннего применения и для инъекции по всем параметрам качества и количественного определения и установлен срок годности для обоих препаратов в 2 года.
72
22.03.06
27.09.06
20.03.07
24.09.07
27.03.08
серии
220303
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Описание
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Подлинность
3,98
3,95
3,87
4,01
4,02
рН
Сухой
9,31
9,29
9,35
9,46
9,48
остаток
Плот-
1,049
1,051
1,053
1,057
1,064
ность
1,11
0,99
0,97
0,93
0,82
йода
2,84
2,81
2,83
2,88
2,81
натрия хлорида и калия йодида
Количественное содержание
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Стерильность
73
22.03.06
27.09.06
20.03.07
24.09.07
27.03.08
16.03.06
17.09.06
20.03.07
24.09.07
26.03.08
серии
220302
160302
Дата
анализа
Номер
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Описание
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Подлинность
3,98
3,95
3,87
4,01
4,02
4,03
4,02
3,99
4,01
4,01
рН
9,31
9,29
9,35
9,46
9,48
9,55
9,55
9,61
9,67
9,64
остаток
Сухой
1,049
1,051
1,053
1,057
1,064
1,047
1,048
1,051
1,057
1,059
ность
Плот-
1,11
0,99
0,97
0,93
0,82
1,16
1,15
1,13
1,11
1,09
йода
2,84
2,81
2,83
2,88
2,81
2,50
2,51
2,49
2,53
2,54
натрия хлорида и калия йодида
Количественное содержание
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Стерильность
Таблица 2.3.
Испытания стабильности суспензии для инъекционного применения препарата Renessans
Дата
анализа
Номер
Таблица 2.2.
Испытания стабильности суспензии для перорального применения препарата Renessans
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
24.03.06
21.09.06
22.03.07
20.09.07
25.03.08
27.03.06
20.09.06
24.03.07
27.09.07
29.03.08
29.03.06
28.09.06
27.03.07
27.09.07
30.03.08
серии
240302
290302
270302
Дата
анализа
Номер
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Описание
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Подлинность
4,09
4,07
4,03
4,01
4,01
3,81
3,92
3,97
3,99
3,94
4,17
4,14
4,16
4,19
4,19
рН
Сухой
9,44
9,41
9,47
9,43
9,41
9,61
9,59
9,62
9,63
9,64
9,38
9,35
9,37
9,39
9,40
остаток
Плот-
1,053
1,056
1,061
1,064
1,066
1,061
1,063
1,064
1,067
1,069
1,058
1,062
1,065
1,068
1,071
ность
1,12
1,11
1,08
0,97
0,91
1,18
1,15
1,14
1,11
1,01
1,17
1,16
1,13
1,11
1,03
йода
2,70
2,69
2,68
2,71
2,73
2,63
2,64
2,61
2,62
2,63
2,57
2,56
2,58
2,60
2,61
натрия хлорида и калия йодида
Количественное содержание
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Стерильность
Продолжение таблицы 2.3.
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
74
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Резюмируя вышеизложенное, можно сказать, что при создании нашего препарата Renessans был проанализирован массив
литературных источников об аналогичных по химизму с ним препаратов или с его активной субстанцией компонентов, проявляющих сходный эффект. При этом были учтены как химические, так и
биологические свойства, выявленных в ходе поиска веществ, для
формирования физико-химической основы разрабатываемого препарата, причем как его активной субстанции, так и его транспортной
составляющей, таким образом, чтобы конечный продукт отвечал
трем основным требованиям, предъявляемым к противопикробным
препаратам:
• высокая микробицидность,
• низкая токсичность,
• пролонгированный эффект.
В процессе содания Renessansa мы обнаружили, что в последние десятилетия, в научной литературе содержится очень мало
сведений о йодполимерах, обладающих высокой терапевтической
эффективностью на фоне незначительных побочных эффектов.
Кроме того, единичные препараты йодполимеров применяются в
основном в научных иссследованиях. Не организовано их массовое производство. В связи с этим, мы поставили перед собой цель
возродить исследования йодполимеров и создать новый препарат
с дальнейшей организацией его массового производства.
Нами был разработан состав препарата «Renessans», представляющий собой йодполимер. Подобранные компоненты препарата, с одной стороны, направлены на поддержание его стабильности и структурированности, а с другой, ответственны за прямое
проявление лечебных свойств йода.
Введение в состав препарата соли калия позволило добиться
образования физико-химической системы, позволяющей длительное время сохранять главный действующий агент от дезактивации,
что обеспечвает его доставку к мишениям в организме, в активном
состоянии.
Аскорбиновая кислота входящая в состав препарата предохраняет его активный центр – молекулу йода от ощелачивания, то есть
поддерживают его стабильность и биологическую активность.
На основании полученной конечной композиции компонентов
препарата, мы предполагали наличие у него, по крайней мере, двух
основных свойств: антимикробного и иммунокоррегирующего.
В целом компоненты препарата были подобраны таким образом, чтобы в конечном счете обеспечить селективное окисление
75
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
главным действующим агентом, йодом, жизненно важных молекулярных компонентов вирусов и бактерий.
Для формирования препарата как целостной субстанции нами
были применены современные принципы комбинаторной химии.
По своей природе разработанный нами препарат относится к
йодофорам, поскольку активная субстанция препарата является
йодно-полимерным комплексом, выполняющим роль матрицы, и
образующей ассоциаты, из которых постепенно выделяется действующий агент – активная форма йода.
После научно-обоснованной разработки состава препарата
Renessans Нами была проведена большая исследовательская
яработа по разработке технологии его производства в двух лекарственных формах – суспензии для перорального использования и
суспензии для внутривенных инъекции.
Также были проведены исследования по стандартизации разработанного препарата. Результаты исследования по стандартизации Renessansa проведенные по физико-химическим показателям
суспензии для перорального и внутривенного применения показали, что разработанные лекарственные препараты соответствуют
требованиям нормативных документов. Определен срок годности
разработанного препарата, который для обоих форм составил в 2
года.
Также нами была разработана Концепция основных звеньев
создания йодполимеров. Данная концепция может быть использована в качестве методологической основы создания любых других
йодполимерных препаратов с использованием различной технологии (рисунок 2.7.).
На схеме Концепции показан весь путь создания йодполимеров от разработки состава с научно-теоретическим обоснованием
до применения их в медицине, между ними звенья разработки технологии, регистрации и производства йодполимерных препаратов.
В процессе создания препарата Renessans нами был пройден весь этот путь: разработан и обоснован состав, разработана
технология препарата Renessans в двух лекарственных формах,
препарат был зарегистрирован и перерегистрирован в Кыргызской
Республике, налажено опытно-промышленное производство препарата, планируется массовое проиводство препарата Renessans.
76
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 2.7. Концепция основных звеньев создания йодполимеров
77
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Литературные источники
1. Алексеев В.А., Миронова Т.Я. О влиянии йодинола на кишечную
микрофлору// В кн.: Иодинол в медицине и ветеринарии.- Л.:
Наука.- 1967.- С. 70 - 71.
2. Мохнач В.О. Йод и проблемы жизни. - Л.: Наука. - 1974. - 254 с.
3. Лупачик С.В., Надольник Л.И., Нецецкая З.В., Виноградов В.В.
Влияние длительного введения высоких доз йодида калия на
метаболизм йода в щитовидной железе крыс // Биомед. хим. –
2006. – Т. 52, № 2. – С. 161–168.
4. Велданова М.В., Скальный А.В. Йод знакомый и незнакомый. –
Петрозаводск: ИнтелТек. - 2004. – 187 С.
5. Мохнач В.О. Соединения йода с высокополимерами, их антимикробные и лечебные свойства. - Л.: АН СССР. - 1962. - 178 с.
6. Курбангалеев С.М., Елецкая О.И., Мельникова Е.И. Применение йодинола для лечения больных с острыми и хроническими
гнойными заболеваниями// В кн.: Иодинол в медицине и ветеринарии.- Л.: Наука.- 1967.- С. 79 - 83.
7. Волынский Б.Г., Гликман С.А., Корчагина Е.П. Биологические
свойства гелей поливинилового спирта, содержащие противотуберкулезные и рентгеноконтрастные вещества // Сб. матер.
4-й Поволжской конференции физиологов, фармакологов и
биохимиков. – Саратов, 1966.- С. 12-13.
8. Мохнач В.О. Йодвысокополимеры и их применение в медицине
и ветеринарии// В кн.: Иодинол в медицине и ветеринарии.- Л.:
Наука.- 1967.- С. 5-20.
9. Мохнач В.О. Теоретические основы биологического действия
галоидных соединений. – Л.: Наука, 1968. – 123 С.
10. Бегалиев Ш.С. Йод в медицине и фармации. 2010. - Астана. –
230 с.
11. Дроздов В.В. Состав лекарственного средства для лечения дерматомикозов // Патент Российской Федерации: 2192869 Класс
патента: A61K33/18, 2001 Дата публикации: 20.11.2002.
12. Блатун Л.А. Современные йодофоры – эффективные препараты для профилактики и лечения инфекционных осложнений //
Media Medica. - 2000. - №2.- С. 16-18.
13. Каншин Н.Н., Воленко А.В., Титова Г.П., Меньшиков Д.Е., Куприков С.В. Местная профилактика послеоперационной раневой
инфекции иммобилизованными йодсодержащими препаратами
// Хирургия. - 2006. - № 2.- С. 23-28.
78
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
14. Shelling C.F. Comparative evalution of pouvidon – iodine aerosol,
foam, solution and silver sulfadiazine cream as prophylactic topical
antibacterial agents for treatment of the burn wound. // Rurns. –
1980. – №7 (2). – Р. 143–149.
15. Gilmore OJA, Reid C. Prevention of intraperitoneal Adhesoins
A comparison of Noxythiolin and a new povidone – iodine (PVP
solution) // Brit. J. Surg. – 1989. - №66 (3). – Р. 197–199.
16. Kawana R. et al. Inactivation of human viruses by povidone-iodine
in comparison with other antiseptics // Dermatology. - 1977. - №195
(2). - Р.29-35.
17. Sindelar W.F., Mason R. Irrigation of subcutaneous tissue with
povidone-iodine solution for prevention of surgical wound infections
// Surg. Gyn. Obstet. – 1979. – № 148 (2). – Р.227–231.
18. Lin K., Tani T., Endo Y. et al. Antimicrobial activities of io-dinated
polyсtyrene derivatives // Artif. Organs. - 1996. - № 20(11). - Р.11911195.
19. Бегалиев Ш.С., Изатуллаев Е.А., Дильбарханов Р.Д., Шадибеков
С.А. Применение йодополимеров в медицине (обзор литературы) // Фармацевтический бюллетень. - 2009. - № 7-8. - С. 60-64.
20. Воленко А.В., Куприков С.В., Коломиец Е.В. Местная профилактика нагноений операционных ран // Сб. матер. V Российского
научного форума «Хирургия». - 2004.- С. 34–35.
21. Белозер А.А, Смирнов О.А., Петкова В.А. Инфекционный контроль над внутрибольничными инфекциями в стационаре скорой медицинской помощи //Сб.: Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики внутрибольничных
инфекций. - СПб. - 2003. - С. 75–77.
22. Некрасова В.Б., Беспалов В.Г. Биологически активная добавка к
пище «Элам» и профилактика пищевого дефицита йода // Клин.
питание. – 2004. – № 1. – С. 34–35.
23. Некрасова В.Б., Беспалов В.Г., Никитина Т.В. и др. Разработка йодсодержащей биологически активной добавки к пище
«Элам» и изучение ее фармакологического действия // Изучение и применение лечебно-профилактических препаратов
на основе природных биологически активных веществ / Под
ред. В.Г. Беспалова, В.Б. Некрасовой. – СПб: Эскулап, 2000. –
С. 287–293.
24. Шабашова Н.В., Фролова Е.В., Бобровская М.В., Учеваткина
А.Е. Влияние элама на клинико-иммунологические показатели у здоровых лиц: Отчет. – СПб: ГОУ ДПО «Санкт-Петербург-
79
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
ская медицинская академия последипломного образования
Росздрава», 2008. – 4 с.
25. Кузнецов А.Ф. Новый йодсодержащеий препарат монклавит в
ветеринарной медицине / А.Ф. Кузнецов, С.В. Литвяков, Д.М.
Дегусаров, А.Г. Петропавловский, В.Г. Головкин // Зооиндустрия.
- 2004. - № 4. - С. 21-24.
26. Шантыз А.Х. Фармакология и эффективность йодполимеров в
ветеринарии: Автореф. Дисс. ... канд. вет. наук: 16.00.03. – Краснодар, 2008. - 16 с.
27. Ильин А.И. Препарат «Арменикум» как новое лекарство с противовирусными и антимикробными свойствами. //«Арменикум»
— экспериментальные исследования. Ереван.: Гутуюн, 2000.—
С.7—16.
28. Федоренко А. А. Аrmenicum: некоторые прототипы и аналоги
Украінський журнал дерматологіі, в венерологіі, косметологіі №
№4, 2002. с. 67-71.
29. Бегалиев Ш.С. Йодсодержащие препараты антимикробного
действия (обзор литературы) // Consilium (Алматы).- 2010. - №
4. – С. 108-111.
30. Мохнач И.В. Йодвысокополимеры и биологические возможности организма. - 1979. - 80 С.
31. Карпенко Л.Ю., Андреева А.Б. Биологическая роль йода в организме животных / Актуальные проблемы эпизоотологии на
современном этапе. Материалы международной научно-производственной конференции // ФГОУ ВПО СПб. ГАВМ - СПб.
- 2004. - с. 50-51.
32. Кочетков Н.К. Липиды, углеводы, макромолекулы, биосинтез
//Общая органическая химия. — М.: Химия. 1986.— т.11.—
С.117—121.
33. Мохнач В.О., Русакова Н.М. Спектрофотометрическое исследoвание соединений йода с одной положительной валентностью // Доклады АН СССР, М.-Л.- 1962. – С. 122-125.
34. Мохнач В.О. Экспериментальное и клиническое изучение раствора йодполивинилового спирта (йодинола) // В сб.: Йодинол и
его применение. – 1962. – С. 24-28.
35. Волынский Б.Г., Гликман С.А., Корчагина Е.П. Физико-механические свойства и биологическая активность гелей йодополивинилового спирта // Сб.матер. 4-й Поволжской конференции
физиологов, фармакологов и биохимиков.– Саратов, 1966.- С.
13-14.
80
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
36. Мохнач В.О., Зуева И.П. Изменения в спектрах поглощения водных растворов йодполивинилпирролидона и йодполивинилалкоголя в процессе их диализа // Журнал неорг. Химии. – 1963.
– С. 668-671.
37. Степаненко Б.Н. Курс органической химии. - М., 1972. - С. 243244.
38. Cramer F. Über Einschlussverbindungen II Die blauen
Jodadditionsverbindungen organischer Molekǖle // Chem. Ber. 1951. - №23. – P. 855-859.
39. Эндрюс Л., Кифер Р. Молекулярные комплексы в органической
химии. – М. «МИР», 1967. – С. 91-92.
40. Kappep П. Курс органической химии. - Л., 1962. – С. 940.
41. Кудайбергенов С., Бектуров Е., Шаяхмет Ш., Физическая химия
растворов полимеров. – Алматы: Санат, 1995. - С.180-182.
42. Шайхутдинов Е.М.,Шащанов М.Б., Осадчая Э.Ф., Бейсенова
Р.У., Андрусенко А.А., Черняк Ю.В., Данчина А.А., Шерер В.А.
Способ очистки сточных вод углевых фабрик /А.С. 1261914.
СССР. /;опубл. 07.10.86, Бюлл. № 37.
43. Ергожин Е.Е., Иманбеков К.И., Кендиржанов Е.Р. Иониты на основе полимеров винилоксиэтиленамина и эпоксидных соединений // Ж.прикладной химии. - 2007. - Т. 80. Вып.4. - С.658-662.
44. Nurkeeva Z.S., Mun G.A., Shaikhutdinov E.M. Koblanov S.M., Nam
I.K., Khutaryanskiy V.V., Kan B.A. Radiation processing of stimuliresponsive hydrogels and membranes based on vinyl ether //Book
of extended synopses of International Symposium on radiation
technology in Emerging Industrial Applications, China. 2000, IAEASM-365/44. - P.83-84.
45. Шайхутдинов Е.М., Хусаин С.Х., Абдиев К.Ж., Женисова А.Ж.,
Сейткалиева Н.Ж. Новые сополимеры на основе простых виниловых эфиров //Тезисы докл. XVIII Менделеевского съезда по
общей и прикладной химии. – Москва. 2007. -Т. 2. -608 с.
46. Шайхутдинов Е.М., Абдиев К.Ж., Хусаин С.Х., Сейткалиева
Н.Ж., Идрисова Р. Комплексообразование сополимера 2-акриламидо-2-метилпропан-сульфоната натрия и винилового эфира моноэтаноламина с полиэлектролитами //Докл. HAH PK. –
2005. - № 2. - С. 13-21.
47. Сигитов В.Б., Кудайбергенов С.Е., Андрусенко А.А., Бектуров
Е.А., Вожжова Н.А. Синтез, свойства растворов и комплексообразование нового полиамфолита на основе винилового эфира моноэтаноламина и метакриловой кислоты // Изв. АН КазССР. - 1986. – № 5 (239). -С. 42-49
81
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
48. Елигбаева Г.Ж., Парецкая Н.А., Шайхутдинов Е.М. ИК-спектроскопическое изучение комплексообразования йода с полимерами на основе винилового эфира моноэтаноламина // Вестник
Каз НТУ. - 2010.-№ 3.-.с. 12-13.
49. Темирбаева Г.Р. Комплексы пектина с йодом / Г. Р. Темирбаева,
И.А. Бондарева, И.М. Борисов // Известия ВУЗов, серия Хим. и
хим. технол. – Т. 52, 2009. – С. 53-56.
50. Мамцев А.Н., Динякова М.В., Мехоношин Е.П., Козлов В.Н. К
вопросу о механизмах стабилизации йода в биополисахаридах
//Технологии21 века. – 2013. - № 6. – с. 7-10.
51. Бегалиев Ш.С. Разработка технологии лекарственных форм
йодвысокополимера // Дисс. на соискание ученой степени к.
фарм. н. – 2010. – 156 с.
52. Мохнач В.О., Пропп Л.И. О форме йода в комплексных соединениях с высокополимерами и причине их биологической активности // В кн.: Иодинол в медицине и ветеринарии.- Л.: Наука.1967.- С. 21-31.
53. Дильбарханов Р.Д., Бегалиев Ш.С. Обоснование состава препарата йода «Ренессанс». // Материалы международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования35 и производства». – Шымкент,
2009. - С. 26-28.
54. Дильбарханов Р.Д., Бегалиев Ш.С. Разработка состава и технологии суспензии йоддекстрина для приема внутрь // Материалы конференции, посвященной 70 - летию профессора Ушбаева К.У. - Казахский Национальный медицинский университет
имени С.Д.Асфендиярова.- Алматы, 2010. - С. 188-191.
55. Gross W.G., L.K. Wood and J.S. Mc Hargue Spectrophotometric
determination of iodine // Analyt. Chem. – 1948 - №20. – Р.900-901.
56. Мохнач В.О., Пропп Л.И. Количественное определение йода в
присутствии высокополимеров методом прямого аргентометрического титрования // В кн.: Иодинол в медицине и ветеринарии.- Л.: Наука. - 1967. - С. 32-38.
82
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
ГЛАВА 3
ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ И
КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА RENESSANS
3.1. Исследование токсичности препарата Renessans
Исследование токсичности на лабораторных крысах
Исследование было проведено на белых беспородных крысах-самцах трехмесячного возраста с исходной массой тела 150200,0 гамм. Выбор самцов для исследования был обусловлен тем,
что у самок в различные сроки эстрального цикла чувствительность
к различным факторам может меняться, а также возможно попадание в опыт беременных самок.
Животные, отобранные для опыта, отвечали требованиям,
предъявляемым к постановке эксперимента (Good Laboratory
practice – GLP). Животные были подобраны по полу, возрасту, массе, получены из одного питомника. При подборе дозы руководствовались рекомендациями о максимально допустимых количествах
жидкости для введения в брюшную полость, которая для крыс составляет 5 мл. Выбор дозы препарата для инъекций был определен согласно классификации токсичности химических веществ в
соответствии с ГОСТ 12.1.007-76. Использованные в эксперименте
дозы (от минимальной до максимальной) относились к классу малотоксичных, поскольку при внутрибрюшинном введении препарата DL50 (средне-смертельная доза) по расчету должна была быть
более 1250 мг/кг. В нашем исследовании даже максимальная доза
в объеме 5 мл на средний вес крысы в 200г, в пересчете 1 кг веса
животного, была значительно меньше указанного значения. В период эксперимента крысы были разделены на контрольные и опытные группы. Опытных было четыре группы, различные по дозам
препарата и по срокам.
1 группа. Животным первой группы ежедневно внутрибрюшинно вводились по 0,06 мл препарата + 3,0 мл физиологического раствора, что превышает рекомендуемую лечебную дозу в 1,7 раза.
Крысы забивались через 5, 10 и 15 дней после начала эксперимента.
2 группа. Животным второй группы однократно вводили по
0,66 мл препарата + 3,0 мл физиологического раствора, что пре83
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
вышает рекомендуемую лечебную дозу в 11 раз, забой животных
производили через 5 дней после начала введения.
3 группа. Животным третьей группы однократно вводили по 2
мл препарата + 3,0 мл физиологического раствора, что превышает
рекомендуемую лечебную дозу в 33 раза и забивали животных через 10 дней после начала эксперимента.
4 группа. Животным четвертой группы однократно вводили 5
мл чистого препарата без разведения, что превышает рекомендуемую лечебную дозу в 83 раза, и забивали животных через 15 суток
после начала эксперимента.
После завершения эксперимента декапитацию крыс производили в строго фиксированное время между 9-10 часами утра. Забой
животных проводился на 15 день исследования, макроскопические
наблюдения разреза учитывались на 5, 10 и 15 день, коэффициенты массы внутренних органов – на 15 день. Параллельно с каждой
группой животных забивались контрольные крысы. Контрольные
животные делились на 2 группы: интактные животные и животные,
которым вводился физиологический раствор в тех же объемах.
Объектами гистологического исследования были почки, печень, легкие, сердце, селезенка. Кусочки органов фиксировались в
10%-ном растворе формалина; обработка полученного материала
проводилась по общепринятой методике. Гистологические препараты окрашивались гематоксилин - эозином. Изучение срезов и фотосъёмку проводили с использованием микроскопа МБИ- 6.
Помимо гистологического материала у всех крыс была взята на
исследование периферическая кровь. В ходе эксперимента нами
проводился также морфологический анализ крови животных всех
опытных групп, а также крыс обеих контрольных групп.
Результаты патоморфологических исследований
Забор проб крови осуществлялся во время забоя животных,
производимого в соответствии со схемой эксперимента. Аликвоты
периферической крови помещали в целлоскоп, для подсчета форменных элементов крови, их количество усреднялось по каждой
группе крыс. Нами производился анализ следующих основных
показателей: количество эритроцитов; содержание гемоглобина в
эритроцитах, цветной показатель, общее количество лейкоцитов,
количество сегментоядерных нейтрофилов, количество лимфоцитов, количество моноцитов, скорость оседания эритроцитов. Основные данные результатов анализа морфологического состава
крови и лейкоцитарной формулы приводятся в таблице 3.1.
84
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Таблица 3.1.
Морфологический состав периферической крови
экспериментальных животных (M±m)
Показатели
Эритроциты
10/л
Hb г/л
Цветной
показатель
Сегм-я
нейфилы
10/л
Лимфоциты
109/л
Моноциты 109/л
Лейкоциты 109/л
СОЭ
(мм/ч)
Контроль
Чистый с NaCl
5,8±0,1
6,3±0,1
I
5,9±0,1
Группы животных
II
III
6,1±0,1
6,1±0,1
IV
6,2±0,1
116,0±2,0 118±2,5
105,0±3,0 117,0±3,0 114,0±3,0 115,0±3,0
0,9±0,01 0,9±0,01
0,8±0,01
0,90±0,01 0,9±0,01
0,9±0,01
33,0±1,5 32,0±154
29,0±2,0
31,0±2,0
33,0±2,0
32,0±2,0
54±152
60,5±152
54±1,0
58±1,5
55±2,0
58,0±2,0
2±0,1
2,5±0,1
2,7±0,2
4,3±0,1
2,5±0,2
3,0±0,1
9,2±0,6
8,6±0,8
8,5±1,0
9,9±1,0
8,9±1,5
10,0±2,0
2,0±0,07
2,5±0,05
2,0±0,01
1,6±0,01 2,0±0,01 1,3±0,002
Из данных таблицы 3.1. видно, что введенный препарат
Renessans не вызвал статистически значимых изменений со стороны форменных элементов крови экспериментальных животных, по
сравнению с контрольными крысами, следовательно исследуемый
препарат не оказывал токсического воздействия на систему крови.
Результаты гистологического исследования органов
контрольных животных
До вскрытия общее состояние животных было удовлетворительное. Вес не увеличился (200 граммов), шерстный покров не
изменился, особых отклонений в поведении крыс не наблюдалось.
Легкое – структура органа сохранена (рисунок 3.1.). Воздухопроводящий отдел короткий, представлен внутрилегочными сегментарными бронхами 3-5 порядков, которые подразделяются на
мелкие бронхи и бронхиолы.
85
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.1. Легкое в норме. Ув. х45
Слизистая оболочка стенки бронхов выстлана реснитчатым
эпителием, который по мере уменьшения калибра превращается
из высокого призматического в низкий кубический. Наряду с ними
видны бокаловидные железистые клетки. Базальные камбиальные
клетки преимущественно овальной формы. Секреторные клетки
Кларка с куполообразной верхушкой без ресничек, цитоплазма заполнена гранулами, ядро округлое. В стенке бронхиол появляются
безреснитчатые клетки призматической формы. Встречаются единичные каемочные клетки овоидной формы с микроворсинками. В
собственной пластинке слизистой оболочки бронхов располагаются
эластические волокна с единичными гладкомышечными клетками.
Относительная толщина мышечной оболочки становится больше по мере уменьшения бронхов. В слизистой субсегментарных
бронхов обнаруживается единичные лимфоидные фолликулы. В
респираторном отделе межальвеолярные перегородки тонкие. Респираторные бронхиолы выстланы однослойным кубическим эпителием. Альвеолы представлены альвеоцитами I и II порядка с единичными каемочными клетками. В межальвеолярных перегородках
располагаются единичные лимфоциты, гистиоциты, макрофаги.
Межальвеолярные капилляры спавшиеся, стенка их тонкая. Стенки посткапиллярных венул тонкие, просвет сужен. В подслизистом
и слизистом слоях бронхов сосуды тонкие, с узким просветом
Печень – структура органа представлена сформированными
дольками и балками. Дольки отделены друг от друга прослойками
рыхлой соединительной ткани. Портальный тракт дольки представлен воротной веной, печеночной артерии, желчным ходом, лимфатическим сосудом (рисунок 3.2.).
86
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.2. Печень в норме. Ув. х45
Почки – корковое вещество представлено сосудистыми клубочками и извитыми канальцами, которые выстланы цилиндрическими эпителиальными клетками с розовой цитоплазмой и округлым
ядром. Ядра в канальцах располагаются на одном уровне. Клубочки представлены сосудистыми капиллярами.
Эндотелиальные клетки уплощены, их границы четкие, базальная мембрана тонкая. Мезангиальные клетки треугольного строения. Внутренний листок капсулы тонкий. Наружный листок капсулы
Шумлянского-Боумена выстлан призматическим, кубическим эпителием. Эпителий канальцев мозгового слоя однослойный кубический. Сосуды различного калибра большей частью находятся в
спавшемся состоянии (рисунок 3.3.).
Рис. 3.3. Почки в норме. Ув. х45
87
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Сердце – гистоструктура органа представлена поперечнополосатыми мышечными клетками, которые, сливаясь в местах стыков,
образуют мышечные волокна, располагающиеся послойно. Цитоплазма рабочих кардиомиоцитов розовая, ядро палочковидной
формы, четко определяется. В интерстициальной тонковолокнистой соединительной ткани располагаются сосуды – кровеносные
и лимфатические капилляры (рисунок 3.4.).
Рис. 3.4. Сердце в норме. Ув. х45
Желудок – слизистая оболочка имеет неровные контуры. Выстилающий слизистую оболочку эпителий однослойный цилиндрический, железистый. В базальной части поверхностных эпителиоцитов располагается ядро, в апикальной части находятся капли
мукоидного секрета. Собственная пластинка представлена рыхлой
волокнистой неоформленной соединительной тканью с единичными лимфоидными фолликулами и трубчатыми железами. Собственные железы построены из главных, париетальных, шеечных
мукоцитов, и эндокринных (аргирофильных) клеток. Мышечная
пластинка слизистой оболочки представлена пучками гладкомышечных клеток. Подслизистая представлена неоформленной соединительной тканью с большим количеством эластических волокон,
сосудами различного калибра и размеров, нервными сплетениями.
Мышечная оболочка представлена тремя слоями переплетающихся гладкомышечных волокон, которые располагаются продольно,
циркулярно и в косом направлении) (рисунок 3.5.).
88
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.5. Желудок в норме. Ув. х45
Результаты гистологического исследования органов
контрольных животных, которым вводили физиологический раствор (NaCl 0,9%)
Общее состояние животных было такое же, как в контроле. Гистологическое строение органов животных было аналогично вышеописанному. Данная подгруппа контроля введена для оценки наличия реакции на введение препарата у подопытных животных.
Согласно поставленной задаче весь гистологический материал
был разделен на четыре группы с учетом дозы введения препарата
и сроков забоя животных.
Результаты гистологического исследования органов
экспериментальных животных первой группы (ежедневно
вводили Renessans в дозе 0,06 мл + 3,0 мл физиологического
раствора в течение 5, 10, 15 дней)
В первой группе у исследуемых животных особых отклонений
в их поведении не наблюдалось. Общее состояние животных было
удовлетворительным, шерстный покров ровный, мест облысения
выявлено не было. Крысы, получавшие в течение 15 дней препарат, были более энергичны, подвижны. Забой животных проводился на 15 день. Кусочки ткани были взяты из легких, печени, почек,
желудка, сердца, пищевода.
Первая группа крыс – 5 день
При гистологическом исследовании печени было выявлено,
что структура строения органа была сохранена. При этом четко
различалось деление органа на дольки, балки. Печеночные клетки
были с розовой гомогенной цитоплазмой и округлым ядром, четко
определяемым ядрышком. Звездчатые ретикулоциты имели треу89
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
гольне строение, с четким ядром. В отдельных дольках, начиная от
центральной вены, наблюдалось расширение синусоидов. Купферовские клетки имели четкое ядро. Эндотелий центральной вены
сохранен на всем протяжении. В портальных трактах располагались вены, артерия и желчный капилляр (рисунок 3.6.).
Рис. 3.6. Расширение синусоидных капилляров печени на 5 день.
Ув. х100
В ткани легких были хорошо видны ацинусы, расположенные
в стенке респираторной альвеолы, альвеолярных ходов и мешочков. На стыках между ацинусами располагалась интерстициальная
ткань, богатая кровеносными сосудами. Бронхиальное дерево сохранило эпителиальную выстилку на всем своем протяжении.
Бронхиальное дерево легких имело четко выраженное двухслойное строение и состояло из слизистой оболочки, включающей
эпителиальную выстилку и основную пластинку слизистого или мышечно-волокнистого слоев (рисунок 3.7.).
Рис. 3.7. Эпителиальная выстилка бронха на 5 день. Ув. х200.
90
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
При изучении ткани почек их структура была сохранена. В корковом слое клубочки и извитые канальцы имели обычное строение.
Однако в отдельных участках наблюдалось большое количество
стромы, из-за чего нарушалась компактность расположения проксимальных и дистальных извитых канальцев (рисунок 3.8.).
Рис. 3.8. Корковый слой почки на 5 день. Ув. х100
В ткани сердца было обнаружено, что структура и расположение мышечных волокон в целом было сохранено. Четко выявлялась поперечная исчерченность волокон, прослойки рыхлой
соединительной ткани, содержащей большое количество сосудов различного калибра. Волокна миокарда были ориентированы
в продольном, циркулярном и косом направлениях. Эпикард был
представлен рыхлой соединительной тканью, богатой волокнами,
кровеносными сосудами и адипоцитами (рисунок 3.9.).
Структура строения желудка также была сохранена. В ней четко определялись желудочные валики, ямки с обычным строением
желез. Слизистая оболочка была выстлана однослойным цилиндрическим эпителием. В ней располагалось множество ямочек –
выходных отверстий простых трубчатых желез желудка, занимающих практически всю толщу собственного соединительнотканного
слоя слизистой. Клеточных состав эпителия был неоднороден, так
ядра располагались ближе к базальному полюсу, цитоплазма их
была окрашена базофильно, париетальные клетки локализовались
в основном в области тела и шейки желез.
91
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.9. Мышечные волокна сердца на 5 день. Ув. х100
Первая группа крыс – 10 день
В печени наблюдались расширенные синусоиды с набухшими
Купферовскими клетками, не только в области центральной вены,
но спускались ниже, доходя до портальных трактов. Все это приводило к дискомплексации балочного строения. Гепатоциты в цитоплазме содержли мелкие вакуоли, ядра и ядрышки были сохранены. Соединительная ткань органа была слабо развита и имеелась
лишь по ходу кровеносных сосудов, поэтому в печени крыс не было
выявлено дольчатого строения (рисунок 3.10.).
Паренхима почек в целом была сохранена. В отдельных участках, в зоне выраженного коркового слоя наблюдалась дискомплексация строения. Аналогичные изменения были выявлены и в мозговом слое, где между собирательными трубочками отчетливо были
видны сосудистые петли клубочков (рисунок 3.11.).
В желудке обращало на себя внимание множество ямочек –
выходных отверстий простых трубчатых желез, занимающих практически всю толщу собственного соединительнотканного слоя
слизистой, подслизистой и мышечной оболочек. Покровный и железистый эпителий были сохранены. В отдельных клетках покровного
эпителия выявлялись мелкие вакуоли, заполненные цитоплазматической жидкостью.
92
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.10. Расширенные синусоиды печени. 10 день. Ув. х100
Рис. 3.11. Сосудистые петли клубочков почки. 10 день.
Ув. х100
При гистологическом исследовании легких сосуды межальвеолярных перегородок были полнокровны. В крупных сосудах наблюдалось разделение плазмы от форменных элементов с выраженным плазматическим пропитыванием стенки. На срезе были видны
бронхи крупного, среднего и мелкого калибров, бронхиолы, альвеолярные ходы и альвеолярные мешочки.
Альвеолярный отдел состоял из системы простых ацинусов
с мелкими альвеолярными мешками и альвеолами. Перегородки
отдельных альвеол и альвеолярных мешков были истончены, содержали эластические и отчасти мышечные волокна, а также, были
богаты кровеносными капиллярами (рисунок 3.12.).
Миокард был образован рабочими кардиомиоцитами, соединенными друг с другом посредством вставочных дисков. Некоторые
клетки формировали анастомозы между собой. Кардиомиоциты содержали ядра, расположенные в центре. Цитоплазма клеток окрашивалась оксифильно (рисунок 3.13.).
93
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.12. Структура легочной паренхимы. 10 дней. Ув.х100
Рис. 3.13. Рабочие кардиомиоциты сердца. 10 день. Ув. х100
Первая группа крыс – 15 день
При гистологическом исследовании ткани почки были видны
проксимальные и дистальные канальцы, срезанные в поперечном
и косом направлениях. Границы клеток были плохо различимы. В
целом изменения паренхимы почки были незначительны. Было выявлено их расширение канальцев мозгового слоя. Эпителий был
уплощен, ядра клеток вытянуты (рисунок 3.14.).
Капсула печени была истончена и образована плотной волокнистой соединительной тканью. Веретеновидные вытянутые клетки располагались в два ряда. В некоторых гепатоцитах выявлялись
более крупные вакуоли, заполненные цитоплазматической жидкостью (рисунок 3.15.).
94
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.14. Гистоструктура почки. 15 днь. Ув. х200
Рис. 3.15. Крупные вакуоли гепатоцитов. 15 день. Ув. х100
При изучении тканей легкого не было обнаружено видимых
морфологических изменений со стороны альвеолярного эпителия
бронхиол. Просвет альвеол был нормальным. Эпителиальная выстилка бронхов сохранялось интактной, сосуды были слегка полнокровны (рисунок 3.16.).
В сердце было выявлено частичное полнокровие сосудов. На
препаратах четко выявлялась поперечная исчерченность волокон,
и прослойки рыхлой соединительной ткани, содержащей большое
количество сосудов различного калибра. Волокна миокарда были
ориентированы в различных направлениях: продольном, циркулярном и косом (рисунок 3.17.).
Исследования щитовидной железы показало, что ее строма
содержала многочисленные кровеносные сосуды артериального и
венозного типов, равномерно заполненных эритроцитами. Паренхима железы была образована разными по величине фолликулами.
Округлые мелкие и средней величины фолликулы были заполнены
розовым коллоидом. Ткань щитовидной железы сохраняла свою
структуру.
95
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.16. Гистоструктура легкого. 15день. Ув. х100
Рис. 3.17. Гистоструктура сердца. 15 день. Ув. х100
На препарате желудка было обнаружено множество ямочек –
выходных отверстий простых трубчатых желез желудка, занимающих практически всю толщу собственного соединительно-тканного
слоя слизистой поверхности и железистого эпителия цитоплазмы.
Результаты гистологического исследования органов экспериментальных животных второй группы (ежедневно вводили
Renessans в дозе 0,66 мл + 3,0 мл физиологического раствора в
течение 5 дней)
При исследовании тканей почки было выявлено, что корковое вещество было образовано в основном почечными тельцами
и извитыми канальцами и выглядело на препарате более темным.
Мозговое вещество, расположенно ближе к центру, и окрашено
светлее, состояло из прямых канальцев: петель нефрона и собирательных трубочек, направленных радиально. На границе коркового
и мозгового веществ хорошо видно артерии и вены, расположенные дугообразно. Выявлено уплощение эпителия мозгового слоя с
явлениями гидронефроза (рисунок 3.18.).
96
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.18. Мозговой слой почки – гидронефроз канальцев.
Ув. х100
При гистологическом исследовании тканей сердца – было
выявлено, что стенка сердца образована тремя оболочками: эпикардом, миокардом и эндокардом. Эндокард выстлан однослойными, плоскими эндотелиоцитами, лежащими на тонкой прослойке
рыхлой соединительной ткани. В области мышечно-эластического
слоя выявлено частичное кровоизлияние (рисунок 3.19.).
Рис. 3.19. Очаги частичных кровоизлияний в сердце. Ув. х45
В ткани легких обнаружено небольшое утолщение межальвеолярных перегородок и скопление лимфоцитов, гистиоцитов и единичных макрофагов. Единичные клетки сплющенного альвеолярного эпителия располагались в просвете альвеол. Также выявлялись
участки с узкими щелевидными просветами альвеол и, наоборот,
резко расширенными (рисунок 3.20.).
97
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.20. Утолщение межальвеолярных перегородок легких.
Ув. х100
Исследование ткани печени показало, что ее структура была
сохранена. При этом были выявлены микрокомплексы безъядерных гепатоцитов, образующих небольшие очаги. Рядом с ними выявлялись еденичные двухядерные гепатоциты (рисунок 3.21.).
Рис. 3.21. Очаги безъядерных гепатоцитов. Ув. х100
Результаты гистологического исследования органов
экспериментальных животных третьей группы (однократно вводили Renessans в дозе 2,0 мл + 3,0 мл физиологического раствора, результат учитывали через 10 дней)
При гистологическом исследовании печени было выявлено
незначительное нарушение кровообращения с полнокровием сосудов, синусоидов (рисунок 3.22.).
В гепатоцитах обнаруживались небольшие микрофокусы безъядерных гепатоцитов, наблюдаемые в предыдущем сроке. В паренхиме выделялись центральные вены, заполненные кровяными
элементами. На некотором расстоянии от центральных вен были
видны междольковые вены, центральные артерии и желчные про98
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
токи. Данные структурные компоненты печени, образовывали триады, без видимых отклонений.
Рис. 3.22. Полнокровие сосудов, микрофокусы
безъядерных гепатоцитов. Ув. х100
При исследовании тканей почки было обнаружено, что основу
коркового вещества на срезе представляли, расположенные в различных направлениях, проксимальные извитые канальцы. Они характеризовались небольшим диаметром, оксифильно окрашенной
цитоплазмой и наличием щеточной каемки на апикальном полюсе
клеток. Дистальные канальцы, были выстланы кубическим эпителием с прозрачной цитоплазмой, щеточная каемка у них отсутствовала. В проксимальных и дистальных канальцах почки выявлялась
картина отечности эпителия. Клетки были представлены аморфными розовыми массами, лишенными ядер (рисунок 3.23.).
Рис. 3.23. Отечность эпителия канальцев коркового слоя. Ув. х200
В тканях сердца было выявлено небольшое расширение мышечных волокон, незначительное в отдельных местах изменение
структуры кардиомиоцитов. В структуре некоторых кардиомиоцитов терялась поперечная исчерченность. Ядра их были нечеткие,
99
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
вытянутые, целостность ядерной оболочки была сохранена. На
препаратах четко выявлялись прослойки рыхлой соединительной
ткани, содержащей большое количество сосудов различного калибра. Волокна миокарда были ориентированы в различных направлениях (продольном, циркулярном и косом).
Результаты гистологического исследования органов
экспериментальных животных четвертой группы (однократно вводили Renessans в дозе 5,0 мл + 3,0 мл физиологического раствора, результат учитывали на 15 день)
В тканях легких было выявлено диффузное утолщение межальвеолярных перегородок за счет небольшого увеличения респираторного эпителия на фоне резкого полнокровия сосудов.
Исследование тканей печени, выявило наличие микрофокусов
колликвационного некроза, с резким полнокровием синусоидов (рисунок 3.24.).
Рис. 3.24. Некроз гепатоцитов, полнокровие синусоидов. Ув. х100
При исследовании тканей почек, была обнаружена отечность, в
корковом и мозговом слое. Наблюдалась дистрофия и очаги некроза эпителия канальцев, полнокровие сосудов (рисунок 3.25.).
В сердце были выявлены очаги паренхиматозной дистрофии,
единичные кардиомиоциты лишенные ядер, розовая цитоплазма
которых содержала скопления небольших глыбок.
100
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Рис. 3.24. Отек и некроз эпителия канальцев почки. Ув. х100
Гистологическое исследование стенок желудка выявило, что
на фоне полнокровия сосудов выявлялась десквамация покровного
эпителия, некробиотические изменения в париетальных, шеечных
и главных клетках фундальных желез (рисунок 3.25.).
Рис.3.25. Некробиоз клеток фундальных желез. Ув. х100
В результате проведенного комплексного макро- и микроскопического исследования внутренних органов крыс при введении различных доз препарата, были выявлены различные гистологические
изменения во внутренних органах, в зависимости от дозы и срока
воздействия препарата. Так после внутрибрющного введения препарата крысам ежедневно в течение 5, 10 и 15 дней в дозировке
0,06 мл + 3,0 мл физиологического раствора, превышающей рекомендуемую лечебную дозу в 1,7 раза, физиологические и морфологические показатели крыс данной группы не отличались от нормы.
В печени, легких, почках, желудке, щитовидной железе особых изменений выявлено не было, за исключением незначительной гиперемии сосудов. Слабости, недомогания, изменения в поведении у
101
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
крыс данной группы не лось, а их общее состояние характеризовалось как нормальное. Вес крыс и шерстный покров были в пределах физиологической нормы. Таким образом, у животных первой
группы все физиологические и морфологические показатели были
сохранены, изменений выявлено не было.
Проведенное гистологическое исследование внутренних органов животных второй экспериментальной группы, которым в течение 5 дней однократно вводили препарат в дозе 0,66мл + 3,0 мл физиологического раствора, что в 11 раз превышало рекомендуемую
лечебную дозу, показало, что в легких было выявлено небольшое
утолщение межальвеолярных перегородок. В печени выявлялись
небольшие очажки безъядерных гепатоцитов. В целом у крыс второй группы, несмотря на повышенную дозу следуемого препарата,
морфологических (наличие деструктивных изменений в органах и
тканях) и физиологических отклонений обнаружено не было, их общее состояние характеризовалось как нормальное, внешне крысы
выглядели здоровыми.
Крысы третьей группы, однократно получавшие препарат в количестве 2 мл + 3,0 мл физиологического раствора и забитые на
10 день после введения препарата, несмотря на превышение рекомендуемой дозы препарата в 33 раза, не имели тяжелых патологических и физиологических изменений. Морфологическое исследование показало лишь незначительное отклонение в тканях сердца
в виде незначительного расширения мышечных волокон. В тканях
печени было выявлено незначительное нарушение кровообращения с полнокровием сосудов.
В результате проведенных гистологических исследований в
четвертой группе исследуемых крыс, которым препарат вводили в
чистом виде, превышая рекомендуемую лечебную дозу в 83 раза,
был выявлен очаговый некроз эпителиальных клеток в печени и почках. Также в легких выявлено диффузное утолщение межальвеолярных перегородок, сопровождающееся десквамацией эпителия и
полнокровием сосудов. В сердце отмечены очаги паренхиматозной
дистрофии. Несмотря, на повышенную дозу препарата, введенного
в чистом виде, падежа крыс не было. Однако отмечалась тусклость
шерстного покрова и понижение двигательной активности.
Согласно ГОСТ 12.1.007-76, токсичность химических веществ
при их внутрибрюшинном введении определяется по следующей
шкале, представленной в таблице 3.2.
102
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Таблица 3.2.
Характеристика токсичности химических веществ
при их внутрибрюшинном введении
Степень токсичности
Чрезвычайно токсичные
Высокотоксичные
Умеренно токсичные
Малотоксичные
DL50
до 4 мг/кг
от 4 до 40 мг/кг
от 40 до 1250 мг/кг
1250 мг/кг и более
В нашем исследовании, даже при внутрибрюшинном введении
5 мл чистого препарата, крысам массой 200 гамм, превышало малотоксичную дозу в 20 раз, согласно таблицы 3.2. При этом ни одна
из подопытных крыс не пала.
Таким образом, проведенное исследование, по определения
токсичности препарата Renessans убедительно показало его низкую токсичность.
Исследование токсичности на здоровых добровольцах
Для
изучения
токсического
воздействия
препарата
«RENESSANS» на организм человека, с соблюдением этических
и правовых норм, было проведено клиническое испытания на 10
здоровых добровольцах в возрасте от 18 до 40 лет, среди которых
было 5 мужчин и 5 женщин. В начале испытания всем добровольцам было проведено общеклиническое обследование и исследование крови: общий анализ крови; коагулограмма; определение
уровня аминотрансфераз (аспартатаминотрансфераза – АСаТ,
аланинаминотрансфераза – АЛаТ); определение уровня гормонов
щитовидной железы. После трехкратного внутривенного капельного введения препарата в дозировке 0,3 мг на килограмм массы тела
повторно было проведено исследование крови.
Результаты проведенного исследования показали, что данный
препарат хорошо переносился здоровыми добровольцами, что указывало на его безопасность.
Так полученные в ходе проведенного исследования данные,
представленные в таблицах 3.3. и 3.4. показали, что трехкратное
внутривенное введение препарата Renessans здоровым добровольцам не оказывало токсического влияния на печень и на функционирование щитовидной железы.
На общее самочувствие препарат оказывал минимальное воздействие. В большинстве случаев добровольцами было отмечено
появление небольшой общей слабости, умеренной головной боли,
103
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
в некоторых случаях имело место незначительное повышение температуры тела до 37 оС (таблица 3.5.).
Таким образом, проведенное исследование, по определения
токсичности препарата Renessans на здоровых добровольцах убедительно показало его низкую токсичность.
Таблица 3.3.
Динамика показателей печеночных трансаминаз
у здоровых добровольцев (n=10)
Номер испытуемого
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
АлАТ (U\L)
АсАТ (U\L)
до терапии после терапии до терапии после терапии
12,0
26,0
17,5
18,8
39,9
24,1
26,4
17,6
24,3
10,6
17,5
17,3
35,0
59,6
20,3
28,2
19,3
15,1
19,1
11,3
45,9
36,2
29,7
28,3
12,3
11,5
13,2
13,9
17,8
8,8
15,5
13,1
8,8
9,2
13,1
12,5
10,6
9,3
14,2
14,6
Таблица 3.4.
Динамика показателей гормонов щитовидной железы
у здоровых добровольцев (n=10)
Номер испытуемого
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
FT3 (pmol\L)
FT4 (pmol\L)
TSH (mU\I)
до
после
до
после
до
после
терапии терапии терапии терапии терапии терапии
31,32
14,38
89,60
44,16
0,005
0,005
4,23
4,16
16,56
17,17
3,0
3,2
5,90
4,62
18,34
19,61
3,75
3,9
5,22
4,16
17,27
15,33
2,5
2,7
2,6
2,3
1,5
1,2
1,5
2,0
3,2
2,8
1,9
1,9
0,8
1,0
2,1
2,7
1,8
1,7
2,0
3,5
2,2
3,0
1,7
1,7
2,0
0,7
3,0
2,4
1,7
1,7
0,7
1,2
2,0
2,7
1,9
1,9
2,4
3,2
104
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Таблица 3.5.
Характер выявленных побочных реакций при
внутривенном введении препарата Renessans
здоровым добровольцам (n=10)
Клинические симптомы
Субфебрилитет
Головная боль
Озноб
Тахикардия
Бессонница
Боли в правом подреберье
Сыпь
Частота побочных реакций у добровольцев, получавших препарат Ренессанс
абс.
%
2
20
8
80
2
20
0
0
0
0
0
0
0
0
3.2. Исследование влияния препарата Renessans
на иммунную систему здоровых добровольцев
Оценка иммунокорригирующего действия препарата Renessans
была проведена на 13 здоровых добровольцах получавших препарат в среднем в течение 27 дней. Оценку иммунного статуса проводили два раза - перед назначением и спустя 27 дней. Исследования
были проведены на базе лаборатории иммунологии Медицинского
центра «Сункар», имеющего лицензию Алматинского городского
управления здравоохранения на выполнение клинико-иммунологических исследований.
Всем волонтерам заявленный препарат вводили внутривенно
капельно, по схеме – 3 вливания на протяжении 3 дней, затем перерыв 3-4 дня и повторный курс из 3 вливаний на протяжении еще
3 дней. Всего было проведено 4 курса (12 вливаний). Препарат вводили в дозировке 3,5 мл на 10 кг массы тела в 400 мл физиологического раствора.
Оценка иммунного статуса включала: определение в периферической (венозной) крови общего количества лейкоцитов, лимфоцитов, определение лейкоцитарной формулы, относительное и
абсолютное содержание основных субпопуляций лимфоцитов (общих Т-лимфоцитов, их хелперных и супрессорных субпопуляций,
В-лимфоцитов, натуральных киллеров), неспецифической функциональной активности Т-лимфоцитов, уровни основных классов
сывороточных иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных
105
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
комплексов, фагоцитарную и функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов. Основные субпопуляции
лимфоцитов идентифицировали с помощью коммерческих наборов
моноклональных антител к кластерам СВЗ+, СВ4+, СВ8+, СВ16+,
СВ72+ (Российского производства) методом непрямой иммунофлюоресценции на микроскопе «Люмам И-3». Неспецифическую
функциональную активность Т-лимфоцитов изучали с помощью
прямой реакции торможения миграции лейкоцитов при стимуляции
клеток ФГА-Р. Концентрацию основных классов сывороточных иммуноглобулинов (М,G,А) определяли традиционным методом иммунодиффузии в агаре с использованием коммерческих наборов
моноспецифических антииммуноглобулиновых сывороток; концентрацию общего ІgЕ -иммуноферментным методом; циркулирующих
иммунных комплексов - с помощью реакции преципитации в полиэтиленгликоле с молекулярной массой - 6000, с последующей спектрофотометрией осадков; фагоцитарную активность нейтрофильных лейкоцитов изучали в реакции фагоцитоза с частицами латекса
и теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), при
этом осуществлялась параллельная постановка как спонтанного,
так и стимулированного пирогеналом, вариантов обоих тестов.
Результаты исследования
В результате изучения влияния приема препарата на стимуляцию иммунитета не было установлено достоверного эффекта (таблица 3.6.).
Исключение составляли значения сывороточного иммуноглобулина класса М, показавшие статистически достоверное нарастание его концентрации (с 0,63±0,08 г/л до 0,98±0,07 г/л).
Аналогичная ситуация имела место при оценке направленности изменений отдельных параметров, без учета исходного состояния. В связи с существенной вариабельностью отдельных показателей и относительно небольшой выборки, для более корректного и
объективного анализа была проведена, оценена динамика индивидуальных показателей с учетом их исходного состояния.
За достоверные изменения принимали отклонения более чем
на 3%, что лежит в пределах технических ошибок учета результатов клеточных иммунологических исследований. Поскольку клинические испытания препарата проводились на условно здоровых
лицах, то большинство изученных иммунологических параметров
находилось в пределах нормы и достоверный эффект можно было
выявить только в случаях явных отклонений того или иного параметра от контрольных величин.
106
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
До начала исследования из 13 обследованных только у 5 относительное содержание в периферической крови Т-лимфоцитов
находилось в пределах нормы (59-69%), у остальных 8 - было ниже
контрольного уровня. У добровольцев с исходно низкими значениями у 6 отмечалось повышение индивидуальных показателей
(75,0±15,3%), в 2 случаях уровень общих Т-лимфоцитов существенно не изменился. При этом средний показатель у них повысился с
47,7±1,7% до 51,7±1,8%. Следовательно, прием препарата существенно не влиял на нормальное содержание общих Т-лимфоцитов
периферической крови, в случае же их дефицита - в 75% случаев
повышал CD4+ - лимфоциты (Т-хелперы/индукторы).
Практически у всех наблюдаемых исходно количество Т-хелперов/индукторов в периферической крови находилось в пределах
нормальных величин (34-44%). Достоверное влияние приема препарата имело место только в 6 случаях (46,1±13,8%), причем у всех
регистрировалось повышение индивидуальных показателей, но в
пределах контрольного уровня. Средние значения при этом составляли 33,2±0,9% и 37,0±1,13%.
Таблица 3.6.
Средние значения иммунологических показателей
исследуемых добровольцев, до и после применения
препарата Renessans, (n=13)
Период исследования
Статистическая знаИммунологические
до приема после приема
чимость различий (р)
параметры
препарата
препарата
CD3+ (%)
49,2±1,70
51,6±1,10
>0,05
CD4+ (%)
33,5±0,70
35,60±0,70
>0,05
CD8+ (%)
21,6±1,30
22,70±0,80
>0,05
CD16+ (%)
14,1±1,50
15,90±1,20
>0,05
CD72+ (%)
16,5±1,50
17,10±1,30
>0,05
CD4+ CD8+
1,62±0,11
1,58±0,11
>0,05
ИТМЛ
0,63±0,03
0,61±0,13
>0,05
Ig M (г/л)
0,63±0,08
0,98±0,07
<0,05
Ig G (г/л)
9,19±0,83
9,66±0,66
>0,05
Ig A (г/л)
1,48±0,20
1,57±0,29
>0,05
Ig E (г/л)
73,07±2,26
60,15±5,49
>0,05
ЦЖ (усл. ед)
11,07±1,22
10,08±0,83
>0,05
НСТ спонт. (%)
18,13±0,92
20,08±2,06
>0,05
НСТ стим. (%)
40,10±1,25
35,0±3,70
>0,05
ИС нст
2,24±0,06
2,26±0,07
>0,05
ФА спонт. (%)
18,40±0,36
19,0±0,76
>0,05
ФА стим. (%)
38,50±1,51
40,6±1,0
>0,05
ИСфа
2,24±0,10
2,16±0,07
>0,05
Примечание: ЦЖ (условные единицы)– циркулирующие иммунные комплексы
IgG; НСТ спонтанный (%) – тест с нитросиним тетразолием (C40H30Cl2N10O6) и с
107
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
латексными частицами по определению в периферической крови процента нейтрофильных лейкоцитов от общего их количества, с поглотительной фазой лекоцитоза
(характеризует неспецифическую антимикробную защиту); НСТ стимулированный
(%) – тест с нитросиним тетразолием (C40H30Cl2N10O6) и с латексными частицами
стимулированный пирогеналом, по определению в периферической крови процента
нейтрофильных лейкоцитов от общего их количества, с поглотительной фазой лекоцитоза (характеризует неспецифическую антимикробную защиту); ФА спонтанная
(%) – фагоцитарная активность нейтрофилов; ФА стимулированная (%) - фагоцитарная активность нейтрофилов; ИС нет – индекс стимуляции НСТ теста, рассчитывается как соотношение показателей стимулированного и спонтанного НСТ теста; ИС
фа – индекс стимуляции фагоцитарной активности нейтрофилов, рассчитывается
как соотношение показателей стимулированной фагоцитарной активности нейтрофилов и спонтанной.
Основываясь на исключительной важности субпопуляции
Т-лимфоцитов в реализации многих иммунологических феноменов, полученный факт повышения их количества в периферической
крови необходимо расценивать как положительный иммунокорригирующий эффект испытуемого препарата.
Достоверное изменение индивидуальных показателей содержания в периферической крови Т-супрессоров/киллеров регистрировалось только у 7 наблюдаемых (58,3±13,7%). У остальных
добровольцев этот параметр в процессе клинических испытаний
сохранялся в пределах контрольного уровня. Среди них в 5 наблюдениях имело место повышение первоначально сниженных в большинстве случаев показателей до нормального уровня (19-25%)
и в 2% - снижение. Причем, последнее отмечалось при исходно
высоком количестве данной субпопуляции Т-лимфоцитов (30% и
27%). Полученные данные свидетельствовали о модифицирующем
действии препарата, т.е. в случаях количественного дефицита Т-супрессоров происходило нарастание их содержания, а при избытке,
наоборот, снижение.
Соотношение Т-хелперов к Т-супрессорам более объективно
отражает направленность иммунорегуляторных процессов, нежели
изолированные показатели обоих субпопуляций Т-клеток. Иммунорегуляторный индекс используется в качестве одного из наиболее
информативных при оценке направленности эффекта иммунокорректоров. В 12 из 13 случаев имело место достоверное изменение
индивидуальных показателей иммунорегуляторного индекса: в 6
повышение и в 6 - снижение. Причем, снижение, в основном, происходило в пределах нормативного предела, тогда как из 6 случаев
108
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
нарастания индивидуальных значений в процессе исследования у
4 добровольцев (66,7±19,3%) выявлялись изначально низкие величины данного параметра (1,22-1,19-1,0-1,40, при контроле – не
менее 1,5), а в двух – на нижнем уровне нормы (1,65 и 1,55).
Перед началом апробации препарата у 3 из 13 человек уровень
IgG был ниже нормы (менее 7,0 г/л). На фоне приема препарата у
всех троих концентрация IgG повысилась и достигла нижних нормативных границ. У остальных 10 с первоначально нормальными
показателями все изменения индивидуальных показателей в динамике исследования происходили в контрольных пределах. Вместе
с тем следует отметить, что в 10 из 13 случаев (76,9±11,7%) имело
место увеличение концентрации IgG в сыворотке крови, а снижение
отмечалось только у одного добровольца, и то при первоначально
относительно высоком показателе (15,1 г/л). Полученные данные
подтверждали положительный корригирующий эффект приема
препарата на уровень сывороточного иммуноглобулина класса IgG.
Содержание сывороточного иммуноглобулина класса А у всех
включенных в исследование добровольцев, также было в пределах
нормы. Достоверные изменения индивидуальных показателей регистрировались только в 5 случаях, из них в 4 отмечалось нарастание показателей и в 1 случае его снижение. Причем, как и в случае с IgG, нарастание концентрации происходило в контрольных
пределах, а уменьшение - при относительно высоких изначальных
значениях (2,1 г/л, границы нормы - 0,5-5,0 г/л). Таким образом, нам
не удалось выявить достаточно четкого влияния на показатели сывороточного иммуноглобулина класса А в ходе клинической апробации препарата.
При первоначальном обследовании у 7 (53,8±13,8%) добровольцев отмечались низкие значения иммуноглобулина класса
М (менее 0,7 г/л). После приема препарата у 11 из 13 наблюдаемых (84,6±10,0%), было выявлено повышение индивидуальных
показателей, причем в это число входили 7 человек с изначальным дефицитом этого класса иммуноглобулинов. Незначительное
уменьшение наблюдали только в 2 случаях при достаточно высоких
исходных показателях (1,5 г/л, что в 3 раза выше нижней границы
нормы). Полученные данные также демонстрируют положительный
корригирующий результат в отношении концентрации сывороточного иммуноглобулина класса М.
В процессе исследования показатели концентрации общего
иммуноглобулина класса Е в сыворотках крови у 4 добровольцев
незначительно повышались, а у 8 – снижались, у одного – остава109
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
лись без изменений. Динамика показателей также происходила в
пределах нормативного уровня. Исключение составлял один случай с исходно высоким уровнем (150 МЕ/мл), где в процессе апробации произошла его нормализация (100 МЕ/мл). По приведенным
данным пока трудно сделать какие либо выводы в отношении характера изменений показателей общего сывороточного иммуноглобулина класса Е.
На нормальный уровень циркулирующих иммунных комплексов применение препарата достоверного влияния не оказывало.
Показатели НСТ-теста. При анализе характера изменений
индивидуальных значений спонтанного и стимулированного вариантов НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов в динамике наблюдения нами не было установлено каких-либо достоверных изменений.
При оценке индивидуальных параметров индексов стимуляции
перед началом исследования установлено его небольшое снижение, в сравнении с нормой (1,5-2,5), у 12 из 13 добровольцев
(92,3±0,21%). В половине случаев (6 добровольцев) было отмечено достоверное нарастание индивидуальных параметров индексов
стимуляции и в 3 случаях - незначительное снижение. Последнее
имело место в случаях исходно относительно высоких показателей
(2,71, 2,31, 1,92).
Повышение показателей индивидуальных параметров индексов стимуляции является положительным моментом в иммунокоррекции, т.к. отражает нарастание внутриклеточного бактерицидного
резерва фагоцитарной системы.
На основании полученных данных можно сделать заключение
о том, что даже в условиях нормы в половине случаев прием препарата сопровождался положительным влиянием на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови.
CD 16+ - естественные киллеры. Данная субпопуляция лимфоцитов является ведущей в обеспечении противоракового и противовирусного иммунитета. Низкие значения содержания CD 16+
-лимфоцитов в периферической крови, как правило, свидетельствуют о снижении устойчивости организма к онкологической патологии и вирусным инфекциям и неблагоприятном их течении.
У исследуемых добровольцев в подавляющем большинстве
случаев количественные показатели CD 16+ -лимфоцитов находились в пределах нормы и достоверно не изменялись в процессе ис110
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
следования. Только у 4 добровольцев этот показатель изменялся,
так у 3 человек наблюдалось его повышение (в пределах нормы) у
1 – снижение, тогда как у остальных выявлялось повышенное количество настоящей субпопуляции CD 16+ -лимфоцитов до 24%, при
норме в 6-18%. Из-за небольшого числа наблюдений нам трудно
сделать какое-либо заключение по характеру влияния препарата
на уровень естественных киллеров в периферической крови. Однако ясно одно – отсутствует отрицательное действие препарата и
имеет место тенденция к модификации.
CD72+ (В-лимфоциты). При анализе частоты направленности динамики содержания в периферической крови В-лимфоцитов
было установлено, что из общего числа наблюдений (13) в 6 случаев происходило снижение, в 4 – повышение, у 3 достоверные изменения отсутствовали. Вместе с тем, уменьшение индивидуальных
показателей, в основном, отмечалось при исходно повышенном содержании В-клеток (в среднем 19,5%), тогда как повышение – при
сниженном (14,5%). Нормативные значения - от 6 до 15%.
Следовательно, и в этом случае можно говорить о полученном
модифицирующем действии кратковременного приема препарата
на уровень циркулирующих в периферической крови В-лимфоцитов.
В клинической иммунологии считается общепринятым положение о том, что абсолютные показатели содержания в периферической крови более точно отражают реальную картину количественных изменений в организме. В этой связи нами был проведен
анализ средних значений и направленности динамики абсолютных
параметров изученных субпопуляции лимфоцитов (таблица 3.7.).
Таблица 3.7.
Динамика содержания в периферической крови отдельных
субпопуляций лимфоцитов (средние значения)
Субпопуляции
лимфоцитов
Общий пул лимфоцитов
CD3+
CD4
CD 8
CD 16+
CD72
Период обследования
До начала исслеЧерез 27 дней
дования
1,82±0,10
1,92±0,11
0,90±0,07
0,97±0,07
0,304±0,03
0,355±0,027
0,196±0,02
0,226±0,017
0,25±0,04
0,31±0,04
0,334±0,03
0,307±0,03
111
р
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Как и в случае с относительными параметрами, при сопоставлении среднегрупповых показателей до начала и спустя 27 дней не
было установлено статистически значимых различий подтверждающих иммунокорригирующий эффект, который проявлялся в пределах допустимых колебаний нормативных значений.
Так, общий пул циркулирующих в периферической крови Т-лимфоцитов увеличивался у 69,2±12,8% наблюдаемых. Аналогичный
положительный эффект регистрировался и в отношении общего
абсолютного количества Т-лимфоцитов, Т-хелперов/индукторов
(76,9±11,7%), Т-супрессоров/киллеров (61,5±13,5%) и натуральных
киллеров (69,2±12,8%). Причем в отношении общих лимфоцитов,
CD3+, CD4+, CD8+, CD 16+ - лимфоцитов частота повышения была
достоверной (р<0,05). В отношении абсолютного количества В-лимфоцитов выявлялось их снижение у 61,5±13,5% обследованных.
Таким образом, анализ направленности динамики абсолютных
показателей циркулирующих в периферической крови основных
субпопуляций лимфоцитов позволил установить четкий корригирующий эффект применения препарата у здоровых добровольцев.
Результаты реакции торможения миграции лейкоцитов на
ФГА. Настоящий тест отражает неспецифическую функциональную
активность Т-лимфоцитов (в основном Т-хелперов), в частности, их
способность в условиях in vitro секретировать лимфокин (фактор,
ингибирующий миграцию лейкоцитов) в ответ на поликлональную
стимуляцию. Результаты реакции оценивают по показателю индекс
торможения миграции лейкоцитов, при этом, чем меньше его значения, тем выше уровень продукции лимфокина и соответственно
функциональная активность Т-лимфоцитов.
Показатели реакции торможения миграции лейкоцитов на ФГА
тесно коррелируют с уровнем противоопухолевого и противовирусного иммунитета.
В результате проведенного исследования, первоначально было
выявлено снижение функциональной активности Т-лимфоцитов у
11 из 13 (84,6±10,0%) добровольцев. После введения препарата у
них регистрировалось достоверное нарастание интенсивности лимфокинообразования, о чем свидетельствовало снижение средних
значений индекса торможения миграции лейкоцитов (с 0,67±0,07
до 0,55±0,06, при нормативном уровне от 0,3 до 0,5). Отсутствие
изменений индивидуальных значений индекса торможения миграции лейкоцитов имело место при нормальной функциональной активности Т-лимфоцитов (0,50 и 0,49).
112
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Следовательно, при наличии исходного функционального дефицита со стороны Т-лимфоцитов происходило достоверное ее
нарастание, а при нормальной способности Т-хелперов секретировать лимфокины, последняя существенно не изменялась. Полученные данные свидетельствовали о выраженной коррекции исходно
сниженной функциональной активности Т-лимфоцитов после приема испытуемого препарата.
Повышение показателей ИС является положительным моментом иммунокоррекции, т.к. отражает нарастание внутриклеточного
бактерицидного резерва фагоцитарной системы.
На основании полученных данных можно сделать заключение,
что даже в условиях нормы в 50% случаев прием препарата сопровождался положительным влиянием на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической
крови.
Таким образом, проведенное исследование показало, что ведение добровольцам препарата в течение 27 дней приводило к
достоверному иммунокорригирующиму эффекту, как в отношении
клеточного и гуморального звеньев иммунной системы, так и в отношении клеточных факторов неспецифической резистетности организма.
Иммунокорригирующий эффект препарата проявлялся в достоверном повышении у большинства наблюдаемых абсолютного
количества циркулирующих в периферической крови лимфоцитов,
общих Т-лимфоцитов, их хелперно/индукторной и супрессорно/киллерной субпопуляциий и натуральных киллеров, при этом содержание В-лимфоцитов чаще снижалось.
В случае количественного относительного дефицита циркулирующих в периферической крови Т-лимфоцитов в у 75% добровольцев происходило нарастание их содержания. Нормальные показатели при этом существенно не изменялись.
В 50% наблюдений на фоне приема препарата наблюдалось
нарастание относительных количественных параметров Т-хелперно/индукторной субпопуляции лимфоцитов, но в пределах нормальных границ.
Иммунокорригирующий эффект в отношении относительных
количественных показателей Т-лимфоцитов с супрессорно-цитотоксическим фенотипом проявлялся в виде повышения их исходно
сниженных значений и уменьшении – при относительно высоком их
уровне. Подобный положительный модифицирующий эффект имел
113
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
место и в отношении параметров иммунорегуляторного индекса
(Т-хелперы/Т-супрессоры).
Под влиянием приема препарата параллельно происходила
коррекция в относительном содержании циркулирующих В-лимфоцитов (снижение при исходно высоких значениях, и повышение –
при низких).
Во всех случаях низкой функциональной активности Т-лимфоцитов, по данным реакции торможения миграции лейкоцитов на
ФГА, регистрировалось ее усиление. При этом нормальная функция Т-клеток существенно не изменялась.
На уровень сывороточных иммуноглобулинов классов М и G
прием препарата оказывал корригирующий эффект, который проявлялся в восполнении их дефицита и снижении – в случаях относительно высокого уровня.
При исходно низком уровне бактерицидного резерва фагоцитов
(по данным их кислородозависимого метаболизма) в 50% случаев
прием препарата сопровождался его существенным повышением.
Таким образом, нами был установлен иммунокоррегирующий
эффект препарата Renessans, в условиях нормы, при относительно малом числе наблюдений. Возможно, что патологии данный эффект проявится более четко.
3.3. Изучение эффективности препарата Renessans при
лечении хронических вирусных гепатитов
Клинические испытания лекарственного средства «Ренессанс»
проводились на базе гепатологического центра Республиканской
клинической инфекционной больнице (Кыргызстан, г. Бишкек) в период с 2003 по 2004 г.
В исследование было включено 74 пациента (46 мужчин, 28
женщин) с диагнозами: хронический вирусный гепатит «В», хронический вирусный гепатит «С», хронический вирусный гепатит «D»,
от минимальной до выраженной активности. Возраст исследуемых
составлял от 20 до 57 лет. Продолжительность болезни варьировала от 6 месяцев до 17 лет.
Препарат вводили в дозе 0,3 мл/кг массы тела 1 раз в день
внутривенно капельно на физиологическом растворе в течение 3-х
дней, затем повторное введение через 4 дня в течение 3-х дней в
той же дозировке.
Для оценки клинических показателей определяли маркеры ВГ
методом ИФА (серологический профиль). Определение ДНК виру114
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
сов гепатита В, С и D проводили методом ПЦР. Одновременно проводилось исследование биохимического профиля путем исследования активности трансаминаз: АЛТ и АСТ.
Все лабораторные исследования проводились до начала исследований, через 10 и 30 дней от начала исследований, и через 6
месяцев.
Клинические эффекты при введении препарата Renessans
характерные для всех пациентов вошедших в исследование. При
введении препарата наблюдалось повышение температуры тела от
37 до 39,90 С через 2 часа от момента введения препарата. Температурная реакция сохранялась в течение 3-4 часов и сопровождалась сильным ознобом, головной болью, тахикардией до 92 ударов
в минуту, акроцианозом носогубного треугольника, болями в правом подреберье. Аналогичный эффект наблюдался при каждом
введении препарата, то есть не зависел от кратности введения.
Выраженность указанных проявлений имела зависимость от дозы
препарата: чем меньше доза, тем слабее была реакция.
Явлений флебитов в настоящем исследовании ни у одного
больного зафиксировано не было т.к. инфузии проводились через
специальные системы для введения препаратов крови с установленными фильтрами.
Хронический вирусный гепатит «В»
В исследование было включены 28 пациентов с диагнозом хронический вирусный гепатит «В» (ХВГВ) различной степени активности от минимальной до выраженной. Из них у 8 пациентов ХВГВ
был в фазе репликации, у 20 пациентов ХВГВ был в интегративной
фазе.
Минимальная длительность болезни наблюдалась у 8 пациентов с ХВГВ, репликативная фаза от 6 месяцев до 1 года.
В результате проведенного исследования, было выявлено, что
у 7 из 8 пациентов(87,5%) с диагнозом ХВГВ в репликативной фазе
было отмечено полное клинико-вирусологическое выздоровление
после 6-ти кратного введения препарата Renessans (таблица 3.8.).
Несмотря на небольшое число исследованных (8 человек) полученные результаты были сопоставимы с результатами применения при данной нозологии препаратов интерферона (Роферон-А) в
сочетании с ламивудином.
Так при комбинированной терапии «Рофероном-А» с ламивудином при репликативной фазе ХВГВ с учетом длительности бо115
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
лезни до 1 года, также достигается практически 100% результат
выздоровления.
В то же время среди больных контрольной группы (17 мужчин
и 3 женщины, в возраст от 18 до 43 лет) не получавших противовирусной терапии, ни у одного больного не отмечалось не только
вирусологического, но и клинического выздоровления.
Таблица 3.8.
Динамика биохимического и серологического профилей у
больных с «ХВГВ, репликативная фаза» (n=8)
Период Кол-во
исследо- больАЛТ
вания
ных
> от 3 до
До начала
8
10 крат.
лечения
нрма в
Через 6
8
100%
месяцев
HBsAg
a-HBc
IgM
HBeAg
DNA PCR
(+)
100%
(-)
87,5%
(+)
в 100%
(-)
в 100%
(+)
в100%
(-)
в 100%
(+)
в100%
(-)
в 100%
Иная картина была выявлена среди 20 пациентов с интегративной фазой ХВГВ (таблица 3.9.).
Так у пациентов с хроническим вирусным гепатитом «В» в фазе
интеграции введение препарата «enessans не вызвало ни положительного ни отрицательного клинического эффекта. При этом следует отметить, что на сегодняшний день не известно лекарственного средства, позволяющего добиться элиминации вируса после его
интеграции в геном больного.
Таблица 3.9.
Динамика серологического и биохимического профилей у
больных с ХВГВ, интегративная фаза» (n=20)
Период Кол-во
исследо- больвания
ных
До начала
20
лечения
Через 6
20
месяцев
АЛТ
норма
норма
HBsAg
a-HBc
IgM
HBeAg
DNA PCR
(+)
100%
(+)
100%
(+)
в 100%
(+)
в 100%
(+)
в100%
(+)
в100%
(-)
в100%
(-)
в100%
Хронический вирусный гепатит «С»
Препарат «Ренессанс» был назначен пациентам с ХВГС, различной степенью активности:
• с выраженной активностью – 8 пациентов;
• с умеренной активностью – 8 пациентов;
• с минимальной активностью - 5 пациентов.
116
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Поскольку биопсия печени больным ХВГ С не проводилась, то
степень активности ХВГС учитывали по кратности увеличения АЛТ:
• Минимальная активность – АЛТ в норме.
• Умеренная активность - АЛТ до 5 норм.
• Выраженная активность – АЛТ более 5 норм.
У всех пациентов, после курса «Ренессанса» в крови не была
обнаружена РНК ВГС, но в тоже время лишь у 50% была зафиксирована нормализация АЛТ. То есть вирус был элиминирован из крови, однако в 50% случаев цитолиз печеночных клеток продолжался
(таблица 3.10.).
Таблица 3.10.
Динамика серологического и биохимического профилей у
больных ХВГС с выраженной активностью, получивших
Renessans
Период исКол-во
АЛТ
a-HCV RNA HCV
УЗИ
следования больных
До начала
8
>100%
(+)100% (+) 100%
картина ХГ
лечения
>50%,
Через 6
(+)100% (-) 100% без изменений
8
normal 50%
месяцев
Полученная картина не укладывается в общеизвестную схему
патогенеза ВГС. Для подтверждения результатов ПЦР необходимо
перепроверить результаты проб ПЦР от данных пациентов методом рекомбинатного иммуноблотинга (RIBA).
Следует отметить, что результаты лечения ХВГС препаратами
интерферона прямо зависят от генотипа ВГС. В данном исследовании генотипирование пациентам не проводили, в связи с отсутствием необходимых реактивов в лаборатории. Таким образом сделать
окончательное заключение об эффективности Ренессанса в отношении пациентов с ХВГС с выраженной активностью не представляется возможным.
Обследование пациентов с умеренной активностью ХВГС через 6 месяцев после курса лечения препаратом Renessans позволило установить, что у 6 пациентов из 8 (75%) был достигнут устойчивый биохимический и вирусологический ответ на проведенную
терапию (таблица 3.11.).
При этом у 2 пациентов с умеренно повышенными трансаминазами, умеренной гепатомегалией на фоне нормального уровня
билирубина крови применение препарата Renessans не дало положительного эффекта. Из-за ухудшения субъективного состояния
117
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
(плохая переносимость препарата) данные пациенты отказались
участвовать в исследовании.
У пациентов с с минимальной активностью ХВГС 6 кратное введение препарата Renessans, при отсутствии клинического обострения не позволило добиться элиминации вируса из крови. При этом
ухудшения объективного состояния у пациентов данной группы выявлено не было (таблица 3.12.).
Таблица 3.11.
Динамика серологического и биохимического профилей
у больных ХВГС с умеренной активностью, получивших
Renessans
Период Кол-во
исследо- больАЛТ
вания
ных
До начала
8
>100%
лечения
>25%(2чел.)
Через 6
8
75%-норма
месяцев
a-HCV
RNA HCV
УЗИ
(+) 100%
(+) 100%
картина ХГ
(+) 100%
(+)25% (-)75%
картина ХГ
Таблица 3.12.
Динамика серологического и биохимического профилей у
больных ХВГС с минимальной активностью, получивших
Renessans
Период Кол-во
исследо- больвания
ных
До начала
5
лечения
Через 6
5
месяцев
АЛТ
a-HCV
RNA HCV
УЗИ
норма
(+)100%
(+)100%
картина ХГ
норма
(+)100%
(+)100%
картина ХГ
Таким образом, лечение препаратом Renessans 21 пациента с
ХВГС, позволило выявить достоверный устойчивый ответ (клинико-биохимическая нормализация и отсутствие вируса в крови) на
терапию 28,6% (6/21) пациентов. В 47,6% (10/21) зафиксирована
клинико-биохимическая нормализация состояния пациентов. Двое
пациентов (9,5%) отказались от участия в исследовании в связи с
плохой переносимостью препарата и отсутствием эффекта от лечения. У 5 (23,8%) пациентов без активности инфекционного процесса ответа на терапию получено не было.
118
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Хроническая Дельта инфекция.
В исследование было включено 25 человек в возрасте от 18 до
35 лет (5 женщин, 20 мужчин) с диагнозом хронический вирусный
гепатит «В» + Дельта без фиброзирования. Длительность болезни
у всех пациентов превышала 5 лет. Все пациенты имели умеренно
повышенные значения АЛТ и АСТ, гепатоспленомегалию, без портальной гипертензии.
Проведенное исследование показало, в большинстве случаев
(92%), после проведенного курса лечения препаратом Renessans у
больных ХВГ В+Дельта была выявлена биохимическая нормализация. При этом у всех 25 пациентов после курса препарата в крови
не были выявлены иммунноглобулины типа «М» к вирусу гепатита
«D», но поверхностный антиген ВГВ и иммунноглобулины типа «G»
к ВГD сохранялись, что свидетельствовало о персистенции вируса
гепатита D, а активность процесса в 92% случаев была полностью
купирована (таблица 3.13.).
Таблица 3.13.
Динамика серологического и биохимического профилей у
больных ХВГВ+D, получивших Renessans (n=25)
Период Кол-во
исследо- больвания
ных
До начала
25
лечения
Через 6
25
месяцев
АЛТ
HBsAg
a-HDV IgM
a-HDV IgG
>100%
(+) 100%
(+) 100%
(+) 100%
>8%(2 чел)
норма 92%
(+) 100%
(-) 100%
(+) 100%
Резюмируя результаты проведенного клинического испытания
препарата Renessans можно заключить, что препарат обладает антивирусными свойствами, при этом не оказывает токсических эффектов.
При этом было установлено, что при репликативной фазе ХВГВ
умеренной активности, после курса лечения препаратом Renessans
наблюдался биохимический ответ в виде нормализации биохимических показателей, нормализации клинических проявлений патологического процесса, а в ряде случаев наблюдалась полная элиминация HbsAg.
Однако, установить механизмы вирусоцидного эффекта препарата Renessans не представлялось возможным, кроме того подобной цели при проведении клинических исследований поставлено не
было.
119
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Также для того, чтобы установить - на какое из звеньев иммунитета и как воздействует препарат необходимо проведение дальнейших более углубленных исследований в специализированных
центрах клинической вирусологии. Параллельно необходимо,
определять динамику вирусной нагрузки в процессе лечения, количественным методом в ПЦР. Поскольку подобные исследования в
Кыргызской Республике не проводятся, из-за подобных отсутствия
лабораторных исследований, нами было принято решение дальнейшие исследования по изучению эффективности лечения ХВГС,
провести в Республике Казахстан.
3.4. Изучение эффективности применения препарата
Renessans при хроническом вирусном гепатите С
С открытием в 1989 г. вируса гепатита С (HCV) началось интенсивное изучение этой инфекции, являющейся основной причиной
развития хронических диффузных заболеваний печени: хронического гепатита и цирроза печени, а также гепатоцеллюлярной карциномы. Отличительной особенностью вируса гепатита «С» является способность к длительному персистированию в организме, что
обуславливает высокий уровень хронизации инфекции, до 50-80%.
Основным путем передачи НСV является гемоконтактный путь,
и в частности через зараженное инъекционное оборудование. Более все подвержены риску заражением НСV потребители инъекционных наркотиков, так заражение через шприцы среди наркоманов
составляет 40-50% от общей структуры факторов риска. Инфицирование HCV наркоманов достигает 75-83% и нередко наблюдается в сочетании с инфицированием вирусом гепатита «В» (68-80%),
D (64%), ВИЧ (0,75-13%). Трансфузии крови и ее компонентов являются причиной развития 80-90% случаев посттрансфузионного
гепатита «С» в лечебных учреждениях. При этом передача НСV
при половых контактах (гетеросексуальных) очень незначительна.
Вероятность передачи НСV половым путем у мужчин-гомосексуалистов составляет 5%. Устойчивость HCV обусловлена его способностью реплицироваться высоким уровнем мутаций, в результате чего возникает несколько иммунологически различающихся
вариантов или квази-видов, благодаря которым вирус избегает
иммунного надзора. Квазиразновидности НСV имеют важное биологическое значение: их гетерогенность может определять тяжесть
течения гепатита С. Следует отметить, что формирование интерферонорезистентных квазиразновидностей обуславливает относительно частую неэффективность интерферонотерапии.
120
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Образующиеся вирус нейтрализующие антитела являются высокоспецифичными и не способны нейтрализовать вновь появляющиеся вирусные варианты, что также создает условия для "иммунологического ускользания" и не исключает возможности повторного
инфицирования. Низкий уровень виремии, свойственный НСV инфекции, способствует недостаточной стимуляции иммунного ответа. Генетические факторы хозяина (HLA 1 класса) могут влиять на
презентацию НСV - белков на поверхности инфицированных гепатоцитов и способствовать низкому иммунному ответу на вирус.
НСV оказывает прямое цитопатическое действие. Такое действие не определяет персистенцию вируса, но НСV обладает слабой иммуногенностью, что определяет замедленный неинтенсивный Т-клеточный ответ, появление антител в поздние сроки и в
низких титрах. В сочетании со слабой иммуногенностью НСV его
прямое цитопатическое действие может в определенной мере способствовать преимущественному развитию хронической патологии
печени.
Примерно у 50 % больных хроническим гепатитом С развивается цирроз печени. НСV-цирроз по своей характеристике неактивный, в течение многих лет остается компенсированным и преимущественно первично выявляется морфологически.
Лечение гепатита С является одной из наиболее сложных проблем современной клинической медицины и, кроме того, затрагивает немаловажные социальные аспекты, поскольку является длительным и дорогостоящим. Ежегодно в рамках государственных
программ всех развитых государств расходуются огромные средства, направленные на поиски путей повышения эффективности и
разработку новых схем терапии.
Основным и практически единственным эффективным препаратом для терапии гепатита «С» в настоящее время является
рекомбинантный альфа 2b - интерферон. Однако применение его
связано с большим количеством проблем:
• длительный курс лечения, что создает серьезный дискомфорт для пациентов;
• высокая стоимость препарата;
• большой процент рецидивов заболевания после отмены
терапии;
• резистентность к препарату;
• выраженные побочные эффекты, в ряде случаев вызывающие необходимость его отмены.
121
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Таким образом, проблема поиска альтернативных интерферонотерапии методов лечения ХВГС в связи с недостаточной его
эффективностью и высокой стоимостью лечения крайне актуальна.
В связи с вышеизложенным нами было проведено исследование эффективности лечения ХВГС препаратом Renessans при его
внутривенном капельном введении в расчете: при весе больного до
70 кг препарат назначался в суточной дозе 20 мл (3,5 мл на 10 кг
массы тела в 400 мл физиологического раствора). При весе больного более 70 кг препарат назначался в суточной дозе 3,5 мл на 10
кг массы тела.
Схема лечения ХВГС – 3 вливания на протяжении 3-х дней, затем перерыв 3-4 дня и повторный курс из 3 вливаний на протяжении
еще 3-х дней.
Противопоказаниями к применению препарата являлись: аутоиммунный гепатит, тяжелые заболевания сердечно-сосудистой
системы, почек и другие тяжелые хронические заболевания, гемоглобинопатии, психические заболевания в анамнезе, печеночная
недостаточность, заболевания щитовидной железы, беременность.
Кроме того, ранее проведенные исследования показали, что
противопоказанием к назначению препарата являются: желчнокаменная болезнь, мочекаменная болезнь, обструктивные заболевания дыхательной системы, сахарный диабет, гематологические
заболевания, гиперлипопротеидемии.
Для лечения были отобраны больные ХВГС с подтверждением
диагноза ИФА (положительная реакция на anti-HCV, положительная
ПЦР на HCV). Исследование было проведено на 50 больных хроническим вирусным гепатитом С - добровольцах. Из них 19 мужчин в
возрасте от 23 до 57 лет и 31 женщина в возрасте от 22 до 63 лет.
После проведения качественной ПЦР, подтверждавшей наличие вируса гепатита С проводилась количественная ПЦР. У всех
50 пациентов обнаружены антитела к неструктурным белкам (анти-NS), что для острой фазы не являлось характерным и позволяло
нам констатировать хроническую стадию болезни. У всех пациентов были обнаружены анти-HCV класса IgМ, которые в латентную
фазу не выявляются, следовательно у всех больных имела место
фаза реактивации. Генотипирование вируса гепатита С проводилось части больным – 26 человек. Установлено, что среди больных,
отобранных для лечения выявлялось только 2 генотипа вируса гепатита С – причем, примерно с одинаковой частотой – 1b у 13 пациентов и 3а – у 10 пациентов. Только у 3-х пациентов обнаружен
генотип 2а.
122
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Всем больным проводились исследования уровня трансаминаз
(АсАТ и АлАТ), билирубина (с определением свободного и связанного билирубина) и тимоловой пробы в сыворотке крови до лечения, на 4-й день (после первого курса) и после курса лечения – на
10-11-й дни. После завершения второго курса терапии препаратом
Renessans, вновь проводилась качественная ПЦР – при отрицательном результате исследование (качественная ПЦР) повторялось на 10-й и 30-й дни, а также через 3 и 6 месяцев (выдержанный
вирусологический ответ). В случаях сохранения виремии сразу после завершения курса лечения повторная ПЦР проводилась через
1 месяц. При исчезновении вируса гепатита С из сыворотки крови в
дальнейшем качественная ПЦР повторялась через 3 и 6 месяцев.
Если через 1 месяц вновь обнаруживался вирус гепатита С в крови,
этим больным после количественной ПЦР-диагностики РНК ВГС
назначался повторный цикл лечения.
Также у 7 пациентов (5 мужчин и 2 женщины) имела место
микст-инфекция – ВГВ и ВГС. У всех этих больных после второго цикла терапии в крови сохранялись оба вируса. В связи, с чем
данным пациентам через 6 месяцев вновь назначался 3-й курс лечения.
Таким образом, критерием эффективности лечения являлось
исчезновение РНК HCV по результатам качественной ПЦР на РНК
HCV и нормализация уровня аминотрансфераз в сыворотке крови
больных ВГС – т.е. цель лечения определялась в полной элиминации вируса из крови (соответственно, в гепатоцитах и внепеченочных клетках).
Ни у одного из взятых в исследование больных путем опроса
не удалось достоверно установить путь инфицирования. Ни один
из них не являлся наркоманом, ни одному из них ранее не проводились гемотрансфузии. Ни один из пациентов не отмечал в анамнезе острую форму ВГС, включая пациентов с микст-инфекцией. Как
указывалось выше, у 7 пациентов при ПЦР диагностике обнаружены ДНК ВГВ и РНК ВГС. У данных пациентов при ИФА обнаружен
HbsAg, еще у 5 пациентов обнаружены антитела к HbsAg, при отсутствии самого антигена, т.е. имела место сероконверсия по ВГВ.
Вместе с тем, 27 пациентов подвергались одному или нескольким хирургическим вмешательствам (травмы - 11, аппендэктомия 5, холецистэктомия - 10, искусственное прерывание беременности
- 6, кесарево сечение – 3). Частое посещение стоматолога (хирургические манипуляции, протезирование – у 23 пациентов). Наличия
инфицированных ВГС в семье половых партнеров было установлено у 11-ти пациентов.
123
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
У 17-ти больных наблюдались преимущественно печеночные
проявления (небольшое увеличение печени) у всех 50 пациентов
отмечалось повышение уровня аминотрансфераз (АлАТ и АсАТ,
более выраженное в отношении АлАТ) сыворотки - критерием отбора больных являлся данный показатель. У 4-х пациентов уровень
АлАТ превышал 20 норм, у 11-ти больных уровень АлАТ превышал
12 норм, у 6-ти пациентов уровень АлАТ превышал 10 норм, у 7-ми
пациентов уровень АлАТ превышал 5 норм, у остальных 22 больных уровень АлАТ превышал нормальные показатели в 1,5-3 раза.
Тимоловая проба в 9-ти случаях превышала 2 нормы, у 25-ти
пациентов – до 2-х норм и в 16-ти случаях оказалась нормальной.
Повышение уровня билирубина установлено в 12-ти случаях без
наличия видимой желтухи и зуда кожи (за счет прямой и непрямой
фракций), причем повышение уровня билирубина было у тех больных, у которых обнаружены антитела к HBsAg.
Количественно уровень виремии до лечения составлял: 102
geg/ml – 8 больных; 103 geg/ml - 11 больных; 104 geg/ml - 16 больных; 105 geg/ml - 7 больных; 106 geg/ml - 8 больных.
У 35-ти больных наблюдался в той или иной степени выраженности астенический синдром. Боли в правом подреберье отмечали
только 7 пациентов. Признаков декомпенсированного заболевания
печени не установлено ни у одного из пациентов.
Таким образом, хронический гепатит С в наших наблюдениях
характеризовался возникновением стадии реактивации после перенесенной в скрытой форме острой инфекции ВГС и протекал со
скудной клинической картиной, биохимически характеризовался
повышением уровня трансаминаз в 100% случаев, тимоловой пробы – в 68% случаев и гипербилирубинемией – в 24% случаев.
Известных для ХВГ С внепеченочных проявлений, таких как
смешанная криоглобулинемия, мембранополиферативный гломерулонефрит, поздняя кожная порфирия, аутоиммунный тиреоидит,
артрит и гломерулонефрит у исследуемых больных выявлено не
было.
Предыдущее без успешное лечение препаратами интерферона получали 26 пациентов. У 12 пациентов курс лечения интерфероном составлял 1 год, в других случаях лечение прекращалось
раньше в связи с возникновением серьезных побочных эффектов
или же материальных затруднений. Интересно отметить, что неэффективная интерферонотерапия отмечалась у 18 пациентов монголоидной расы и у 8 пациентов европеоидной расы. Что касается
возраста, то неэффективная интерферонотерапия отмечалась как
124
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
у молодых лиц – 12 пациентов в возрасте до 40 лет, так и у лиц
старше 40 лет – 14 больных. Симптомов интоксикации, также как
и ухудшения состояния больных в процессе лечения препаратом
«Ренессанс» не наблюдалось ни у одного из пациентов.
У всех пациентов примерно через 30-60 минут после внутривенного капельного введения препарата наблюдалось возникновение гриппоподобного синдрома (лихорадка, озноб, головные и мышечные боли). Эти явления продолжались на протяжении 2-4 часов
и самостоятельно исчезали. Подобные реакции сопровождали каждое введение препарата. У 14-ти пациентов после внутривенного
введения препарата Renessans отмечались преходящие зуд и болезненность по ходу локтевой вены в местах инъекций. У 11 больных в начале каждого введения препарата наблюдался кратковременный бронхоспазм. У 8-ми пациентов при введении препарата
имела место кратковременная желчная колика.
По завершении 10-ти дневного цикла лечения все пациенты
отмечали улучшение самочувствия, характеризовавшееся повышением работоспособности, аппетита и уменьшением или исчезновением утомляемости.
Биохимический контроль. Через 3 дня лечения у 22 пациентов
c исходным уровнем трансаминаз от 1,5 до 3 норм наблюдалось
дальнейшее повышение их уровня, особенно АлАТ – в 4-х случая
до 4-х норм, в 13 случаях до 5-ти норм, в 5-ти случаях более 5-ти
норм. У всех этих больных через 10 дней лечения показатели АлАТ
пришли к норме. Через 3 дня лечения у 4-х пациентов c исходным
уровнем трансаминаз более 20 норм, у 11 пациентов с исходным
уровнем трансаминаз более 12 норм, у 6-ти пациентов с уровнем
трансаминаз более 10 норм и у 7-ми пациентов с уровнем трансаминаз более 5 норм напротив, наблюдалось снижение их уровня,
особенно АлАТ – в 15-ти случаях до 4-х норм, в 13-ти случаях –
до 2-х норм. Через 10 дней лечения среди указанных пациентов
только у 5-ти пациентов наблюдалась нормализация уровня АлАТ,
у остальных 23-х пациентов уровень АлАТ продолжал оставаться
повышенным в пределах 4-х норм. Исследование тимоловой пробы
в этот же период установило ее повышение также у всех больных
(от 2-х до 3-х норм). По завершении второго курса наблюдалось
снижение уровня аминотрансфераз – в 4-х случаях до нормы, в
6-ти случаях – до 2-х норм. Исследованием тимоловой пробы после лечения установлено ее снижение у всех больных от нормы до
2-х норм. Уровень билирубина крови после 10 дневного лечения
установлен нормальным у всех больных, имевших исходную гипербилирубинемию.
125
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Получение полного противовирусного эффекта после 1-го цикла (отрицательный результат ПЦР) в зависимости от исходного
уровня виремии: 102 geg/ml – 6 больных (75%); 103 geg/ml - 6 больных (54,5%); 104 geg/ml - 7 больных (43,7%); 105 geg/ml – нет; 106
geg/ml – нет.
Получение полного противовирусного эффекта после 2-го
цикла (отрицательный результат ПЦР) в зависимости от исходного уровня виремии: 102 geg/ml – 2 больных (100%); 103 geg/ml - 5
больных (100%); 104 geg/ml - 3 больных (62,5%); 105 geg/ml – 5
больных (71,4%); 106 geg/ml – 2 больных (25%).
Получение полного противовирусного эффекта после 3-го цикла (отрицательный результат ПЦР) в зависимости от исходного
уровня виремии: 104 geg/ml - 3 больных (81,3%); 105 geg/ml – нет;
106 geg/ml – 2 больных (50%).
Результаты исследования показывают, что успешность лечения по продолжительности и элиминации вируса гепатита С прямо коррелировала с уровнем виремии. После проведения лечения
только в 9-ти случаях методом ПЦР не установлено исчезновение
ВГС-РНК из сыворотки крови после 3 циклов лечения, т.е. нами получен противовирусный эффект препарата Renessans в 82% случаев. При этом у всех 50-ти больных после лечения по данным ИФА
обнаруживались антитела к ВГС. Оценивая результаты лечения
ХВГ С препаратом Renessans можно заключить, что данный метод
лечения эффективен, вполне безопасен и переносится больными
хорошо.
3.5. Изучение эффективности применения препарата
Renessans при лечении туберкулеза
К концу 20 века, после нескольких десятилетий относительного
благополучия, туберкулез вновь заставил обратить на себя внимание, а Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) объявила
о критической ситуации в отношении данной инфекции. В начале
21 века эпидемиологическая ситуация по туберкулезу, приобрела
характер пандемии, в связи с высоким уровнем заболеваемости туберкулезом во многих странах Африки, Азии, Латинской Америки
и ряде стран Центральной и Восточной Европы. По данным ВОЗ,
около трети населения планеты - два миллиарда человек - инфицированы Mycobacterium tuberculosis (МБТ) и подвержены риску
заболевания. Ежегодно более чем у восьми миллионов человек
развивается активный ТБ и примерно полтора миллиона умирают
от этой болезни.
126
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
В Кыргызской Республике максимальный уровень заболеваемости туберкулезом был зарегистрирован в 2001 году (127,3 на 100
тыс. населения), с последующим ее снижением (108,8 на 100 тыс.
населения в 2007 году), что характеризует эффективность последовательно внедренных в республике национальных противотуберкулезных программ «Туберкулез», «Туберкулез II» и «Туберкулез III»
[4]. Благодаря данным программам республика за короткий период
добилась стабилизации заболеваемости и смертности от туберкулеза. Так в 2011 году заболеваемость туберкулезом составляла
101,1 на 100 тыс. населения. Показатель смертности от туберкулеза составлял 9,2 на 100 тыс. населения.
При этом значительное количество пациентов прерывает противотуберкулезное лечение, что в конечном итоге сказывается на
качестве проводимой химиотерапии, и впоследствии приводит к
формированию резистентных к противотуберкулезной терапии
форм туберкулеза. Так, несмотря на то, что в последние годы общее число случаев туберкулеза в КР снижается, проблема осложняется распространением лекарственно-устойчивого туберкулеза
и туберкулеза, сочетанного с ВИЧ-инфекцией. Исследование лекарственной устойчивости в г. Бишкек, проведенное в 2007 году,
показало, что бремя лекарственной устойчивости возбудителей
туберкулеза чрезвычайно высоко. Так ТБ с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ) был обнаружен среди 25,8% новых положительных случаев и среди 49,1% ранее леченых случаев.
Столь глобальное распространение туберкулеза, как хронического, социально значимого инфекционного заболевания, зачастую
трудно поддающегося лечению, заставляет исследователей всего
мира искать новые пути решения данной проблемы.
Данное обстоятельство побудило нас к проведению исследования направленного на изучение бактерицидной активности
препарата Renessans в отношении Mycobacterium tuberculosis, и в
дальнейшем, исследования по изучению эффективности лечения
туберкулеза.
Исследование бактерицидной активности препарата
Renessans в отношении Mycobacterium tuberculosis
Анализ литературных данных, не позволил нам обнаружить какие либо сведения об эффективности препаратов йода при туберкулезе. Напротив, в литературе было много данных, полученных
в результате исследований по изучению влияния йодсодержащих
препаратов на различные микроорганизмы.
127
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
Мы попытались установить возможность применения препарата Renessans для лечения туберкулеза. В результате нами было
проведено исследование по определению бактерицидной активности препарата, которое было проведено на пяти культурах микобактерий туберкулеза «in vitro».
В каждую опытную пробирку с питательной средой Левенштейна-Йенсена и с суспензией микобактерий туберкулеза вносили исследуемое количество препарата Renessans и 0,2 мл физиологического раствора. В контрольные пробирки препарат не помещался.
Результаты исследования представлены в таблице 3.14.
Как видно из данных таблицы3.14., в контрольных пробирках
наблюдался рост микобактерий туберкулеза от 1 до 4 «крестов».
Через 1 и 24 часа экспозиции в опытных пробирках наблюдался
рост микобактерий с различными показателями у разных культур
при различной дозе.
В целом, полученные нами данные показывают, что исследуемый препарат подавляет рост микобактерий туберкулеза и обладает некоторым бактерицидным действием. Таким образом, полученные результаты лабораторных исследований позволили нам
сделать дальнейший шаг в исследовании клинической эффективности препарата Renessans при лечении туберкулеза.
Таблица 3.14.
Влияние препарата Renessans на микобактерии туберкулеза
128
+
+
+
1:32 (3125 КОЕ)
+
+
-
1:8 (12500 КОЕ)
++
+
++
+
+
1:2 (50000 КОЕ)
++
+++
+
+
+
+
+
+++
+
+
Дозы суспензии
2266
RRRS
9
35
60
9
35
60
9
35
60
Контроль
+
1:32 (3125 КОЕ)
2265
SSSS
1:8 (12500 КОЕ)
+
1:2 (50000 КОЕ)
2264
RRRS
24 часа экспозиции
Дозы суспензии
№
штамма
Контроль
1 час экспозиции
9
35
60
9
35
60
9
35
60
++
+
+
+
+++
+
+
+
+
++
+
-
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
+
+
1:32 (3125 КОЕ)
-
1:8 (12500 КОЕ)
++
+
-
1:2 (50000 КОЕ)
+++
+
+
-
Дозы суспензии
9
35
60
9
35
60
Контроль
++
1:32 (3125 КОЕ)
2268
RRRR
1:8 (12500 КОЕ)
+++
1:2 (50000 КОЕ)
2267
RRRS
24 часа экспозиции
Дозы суспензии
№
штамма
Контроль
1 час экспозиции
9
35
60
9
35
60
+++
+
+
+
+
-
++
+
+
-
-
Примечание: КОЕ – колонеобразующая единица.
Данное обстоятельство побудило нас к проведению исследования направленного на изучение бактерицидной активности
препарата Renessans в отношении Mycobacterium tuberculosis, и в
дальнейшем, исследования по изучению эффективности лечения
туберкулеза.
Исследование клинической эффективности препарата
Renessans при лечении больных с хроническим инфильтративным туберкулезом легких
За период с 2009 по 2012 годы препаратом Renessans было
пролечено 8 больных с инфильтративным туберкулезом легких, из
них 5 (62,5%) мужчин и 3 (37,5%) женщины в возрасте от 25 до 58
лет. Средний возраст пациентов составлял 37,8±3,9 лет. Все больные находились на лечении в городской противотуберкулезной
больнице г. Бишкек. У всех вошедших в исследование пациентов,
ранее проводилась противотуберкулезная терапия по стратегии
DOTS с неблагоприятным исходом. В связи не эффективностью
и плохой переносимостью ранее проведенного стандартного противотуберкулезного лечения, больные отказались от дальнейшего
лечения. После чего, лечащим врачом было предложено пройти
курс лечения препаратом Renessans.
Все пациенты были всесторонне ознакомлены с основными показаниями и противопоказаниями приема препарата Renessans и
его побочными действиями. Также они были ознакомлены с целью
проводимого исследования. После чего каждым пациентом было
подписано информированное согласие на проведение исследования.
129
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
На всех пациентов, включенных в исследование, заполнялась
«Индивидуальная регистрационная карта» (ИРК) в которой фиксировались данные о пациенте и о возможных исходах лечения.
Также данные о госпитализации и локализации туберкулезного
процесса, указывались данные бактериоскопии, бактериологического исследования мокроты с выявленной резистентностью к
противотуберкулезным препаратам, результаты рентгенографии и/
или флюрографии грудной клетки, а также данные о ранее проведенном лечении пациента по стратегии DOTS, и данные о лечении
препаратом Renessans.
Клиническое, рентгенологическое и лабораторное обследование пациентов проводили стандартными методами.
Дозировка лекарственного средства Renessans подбиралась
исходя из массы тела пациента и составила – 0,3 мл на килограмм
массы тела. Препарат вводили 1 раз в день внутривенно капельно
в течение трех дней, предварительно разведя «Ренессанс» в 400
мл физиологического раствора. Затем делали перерыв в 3-4 дня,
после чего продолжали терапию. Количество введений препарата
подбирали индивидуально, в зависимости от переносимости и возникших побочных явлений. Таким образом, количество введений
препарата Renessans варьировало от 5 до 17 и в среднем составляло 7 вливаний на пациента.
Для оценки эффективности проводимого лечения всем пациентам до начала лечения, а также через 30 и 60 дней после начатого
лечения было проведено бактериоскопическое исследование мокроты и рентгенологическое исследование грудной клетки.
Результаты проведенного исследования показали, что у всех
(100%) пациентов был диагностирован инфильтративный туберкулез легких, при этом у 2 (25%) больных инфильтративный туберкулез легких был в стадии распада, а 7 (87,5%) больных являлись
бактериовыделителями.
У 6 (75%) из 8 включенных в исследование пациентов, выделенные возбудители туберкулеза имели множественную устойчивость к противотуберкулезным препаратам. Так у 1 пациента была
выявлена резистентность микобактерий к двум противотуберкулезным препаратам - Изониазиду (H) и Рифампицину (R), а у 5 пациентов к 3 противотуберкулезным препаратам - Изониазиду (H), Рифампицину (R) и Стрептомицину (S) (рисунок 3.26.).
130
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
HR
16,7
HRS
83,3
0
20
40
%
60
80
100
Рис. 3.26. Структура профилей резистентности Mycobacterium
tuberculosis выделенных у пациентов с бактериовыделением
Всем пациентам, вошедшим в исследование Renessans был
назначен после неблагоприятного исхода лечения по стратегии
DOTS, как для первой, так и для второй категорий. При этом 3
(37,5%) пациентам лечение препаратом Renessans проводили как
дополнительную терапию после завершенного лечения впервые
выявленного туберкулеза легких (1 категория) с неблагоприятным
исходом, а 5 пациентам Renessans назначали в качестве отдельной противотуберкулезной терапии после неудачного лечения по
стратегии DOTS. При этом 3 (37,5%) пациента получали терапию
препаратом Renessans по поводу лечения рецидива возникшего
после лечения повторного случая туберкулеза легких (2 категория),
а 2 пациента, по поводу лечения рецидива возникшего после проведенного лечения впервые выявленного туберкулеза легких (1 категория).
Результаты бактериоскопического исследования показали, что
у 7 пациентов являвшихся бактериовыделителями, через 30 дней
после начатого лечения полностью прекратилось бактериовыделение.
Оценка данных рентгенографии грудной клетки показала, что
до лечения деструктивные изменения в легочной ткани были выявлены у 7 пациентов. На 30 стуки с момента начала лечения препаратом у 4 (57,1%) из 7 пациентов с очагами деструкции легочной
ткани отмечалось значительное их уменьшение, а на 60 сутки у 6
(85,7%) пациентов (рисунок 3.27.).
131
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
90
80
70
60
50
%
40
30
20
10
0
85,7
57,1
на 30 сутки
на 60 сутки
Рис. 3.27. Динамика уменьшения очага деструкции легочной ткани у пациентов прошедших лечение препаратом Renessans
В результате проведенного лечения препаратом Renessans
было выявлено, что у 7 (87,5%) пациентов исход лечения был классифицирован как – ВЫЛЕЧЕН, у 1 пациента исход проведенного
лечения установить не удалось, так он прервал лечение и далее
не наблюдался (рисунок 3.28.). При этом 4 (50%) пациента были
полностью сняты с учета, а 3 пациента были взяты под наблюдение
в течение 12-24 месяцев.
100
90
80
70
60
% 50
40
30
20
10
0
87,5
12,5
Вы лечен
Исход неизвестен
Рис. 3.28. Исход лечения пациентов препаратом Renessans
Таким образом, проведенное нами пилотное исследование
позволило продемонстрировать эффективность лечения хронического туберкулеза легких, а также его мультирезистентной формы
препаратом Renessans. Однако, для получения более достоверных
данных по клинической эффективности препарата Renessans при
лечении различных форм туберкулеза, включая мультирезистент132
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ЙОДПОЛИМЕРОВ
ного необходимо проведение тщательно спланированных клинических исследований, опираясь на принципы доказательной медицины.
Резюмируя данные полученные в ходе проведенных доклинических и клинических исследований препарата Renessans, можно
сделать некоторые выводы.
Разработанный йоддекстринный препарат Renessans обладает низкой токсичностью при введении в организм, как лабораторных животных, так и здоровых людей.
На иммунную систему здоровых людей препарат Renessans
оказывает иммунокоррегирующий эффект.
Препарат Renessans обладает хорошими антивирусными свойствами, при лечении препаратом хронических вирусных гепатитов
«В» и «D» не оказывая при этом токсических эффектов. Однако
механизмы его вирусоцидного эффекта требуют дальнейшего углубленного изучения.
Препарат Renessans обладает хорошими антивирусными свойствами, при лечении препаратом хронического вирусного гепатита
«С». При этом успешность лечения и его продолжительность прямо
коррелирует с уровнем виремии. Противовирусный эффект препарата Renessans в отношении вируса гепатита «С» проявляется в
82% случаев.
Препарат Renessans обладает хорошей эффективностью при
лечении хронического туберкулеза легких, а также его мультирезистентных форм. Однако, для получения более достоверных данных по его клинической эффективности, необходимо проведение
дополнительных тщательно спланированных клинических исследований, опираясь на принципы доказательной медицины.
133
Для заметок:
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа