close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

;docx

код для вставкиСкачать
УДК: 615.454.1:547.913:615.242:582.472:615.014.22
1
Аюпова Р.Б., 2Швайдленко Э., 1Дильбарханов Р.Д.
( Казахский национальный медицинский университет имени С.Д. Асфендиярова,
Алматы, Республика Казахстан
2
Ветеринарно-фармацевтический университет г. Брно, Чешская Республика)
1
РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОГО ГЕЛЯ С ЭФИРНЫМ
МАСЛОМ ИЗ ABIES SIBIRICA
Аннотация. Разработка и стандартизация нового антифунгального и противовоспалительного,
антимикробного, регенерирующего лекарственного средства на основе отечественного растительного сырья,
предназначенного для применения в стоматологической практике.
Материалы и методы исследования. Объектами исследования явились эфирное масло из Abies sibirica
полученное методом микроволнового нагревания на экстракторе ««STARTE Microwave Exstraction System» и
вспомогательные вещества разрешенные к медицинскому применению: карбомер 974 Р, глицерин, полисорбат80, ксилитол, триэтаноламин и вода очищенная.
Результаты исследования и их обсуждение. На основании физико-химических, технологических,
структурно-механических, микробиологических исследований был отобран оптимальный состав геля с
пихтовым маслом
Выводы. В результате проведенных физико-химических, технологических, структурно-механических,
микробиологических исследований разработан состав, способ получения, показатели качества и методы их
оценки. Разработана методика количественного определения терпеновых соединений в эфирном масле из Abies
sibirica в лекарственных формах.
Введение
Разработка лекарственных препаратов для стоматологической практики является весьма
актуальным направлением, так как инфекционно-воспалительные и грибковые заболевания полости
рта являются распространенным явлением среди широких слоев населения [1]. По данным ВОЗ,
воспалительными заболеваниями пародонта (гингивит, стоматит, глоссит и др.) страдает до 95 %
взрослого населения земного шара и до 80 % детей [2].
Следует отметить, что среди современных лекарственных средств указанной направленности
преобладают лекарственные препараты синтетического происхождения, обладающие наряду с
антимикробным действием и рядом недостатков, такими как высокая сенсибилизирующая
активность, высокий риск развития резистентности патогенной и сапрофитной микрофлоры и другими
побочными эффектами. С этой точки зрения, лекарственные препараты на основе лекарственного
растительного сырья при рациональном применении обладают преимуществами: эффективностью,
безопасностью, мягкостью и широтой терапевтического действия, минимальным риском развития
аллергизирующего эффекта и возникновения резистентности у микроорганизмов [3].
Таким образом, учитывая вышеперечисленные факторы, становится очевидным
целесообразность разработки нового лекарственного средства – геля на основе лекарственного
растительного сырья из Abies sibirica обладающего противовоспалительным и антифунгальным
действием.
Целью настоящей работы явилось разработка и стандартизация нового антифунгального и
противовоспалительного, антимикробного, регенерирующего лекарственного средства на основе
отечественного растительного сырья, предназначенного для применения в стоматологической
практике.
В соответствии с вышеназванной целью необходимо было решить ряд задач по обоснованию
состава лекарственного средства, разработке технологического способа его получения, составлению
рациональной технологической схемы получения, изучению параметров качества, обоснованию
подходов к стандартизации и разработке методик качественного и количественного анализа.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования явились эфирное масло из Abies sibirica полученное методом
микроволнового нагревания на экстракторе ««STARTE Microwave Exstraction System» и
вспомогательные вещества разрешенные к медицинскому применению: карбомер 974 Р, глицерин,
полисорбат-80, ксилитол, триэтаноламин и вода очищенная.
В качестве основных методов исследования применялись традиционно используемые для целей
качественного и количественного анализа: газожидкостная хроматография, пробирочные химические
реакции.
Для
проведения
блока
медико-биологических
исследований
применялись
фармакологические методы изучения острой токсичности и специфической фармакологической
активности
(регенерирующей
и
противовоспалительной),
микробиологические
методы
(антифунгальной активности).
Для получения гелей использовали следующее технологическое оборудование: лабораторную
мешалку для приготовления мягких лекарственных форм «Cito Ungvator – 2000» (Германия).
Изучение реологических параметров (определение структурной вязкости) гелевых композиций,
проводили на приборе «BROOKFIEID viscometer DV-II Pro» (США) при комнатной температуре 20–25 0С.
Значение рН гелей с пихтовым маслом определяли потенциометрически с применением рН метра «HI 2210 pH Meter» (Германия). Стандартный электрод марки HI 76404. Калибровку прибора
осуществляли по буферным растворам с рН = 4,01; 7,01 по 20мл.
Микроскопическое исследование получаемых гелей определяли с применением лабораторного
микроскопа («Nikon Еclipse E200», Германия).
Определение коллоидной стабильности гелей проводили с применением центрифуги
лабораторной медицинской с максимальной частотой вращения 8000 об/мин.
Анализ эфирного масла полученного из Abies sibirica в гелях проводили методом ГХ/МС на
приборе Agilent Technologies 7890A GC System, 7683B Series Injector » с масс селективным детектором
«Agilent Technologies G1888 Network ».
Разделение проводили на капиллярной колонке длиной 60м, внутренним диаметром 0,25мм, и
толщиной пленки неподвижной фазы 0,25мкм. Хроматограммы регистрировали на персональном
компьютере, использую программный пакет «Chem Station» («Agilent Technologies», США).
Для идентификации соединений по масс-спектрам электронного удара
использовали
библиотеку масс – спектров «NIST 05» и «WILEY 138». Объем вводимой пробы составлял 1 мкл,
температура инжектора - 2000С, скорость потока газа носителя – 1 мл/мин., газ-носитель - гелий.
Температура детектора 2300 С.
Результаты исследования и их обсуждение
В пропись стоматологического геля для лечения воспалительных и грибковых заболеваний
полости рта нами были включены следующие компоненты, разрешенные к медицинскому
применению: эфирное масло из Abies sibirica -0,3г, карбомер-1,0г, полисорбат – 80 - 0,3г, глицерин10,0г, ксилитол-20,0г, триэтаноламин - 0,34г и воды очищенной до 100г.
Данный вид лекарственного растения Abies sibirica является признанным источником для
получения мягких и эффективных лекарственных препаратов, обладающих противовоспалительным,
антимикробным, ранозаживляющим, регенерирующим и антифунгальным действиями [4,9].
На
основании
физико-химических,
технологических,
структурно-механических,
микробиологических исследований был отобран оптимальный состав геля с пихтовым маслом.
Для изготовления 1000,0 г геля с пихтовым маслом на основе карбомера 974 NP в рабочий
сосуд установки «Cito Ungvator 2000» вносили рассчитанное количество воды очищенной и
глицерина, полисорбата – 80 и включали электропривод механического перемешивания компонентов
геля. Перемешивали при комнатной температуре (+20 0 С) в течение 10 минут до получения
однородного раствора. В полученный раствор постепенно небольшими порциями загружали
карбомера 974 NP и перемешивали в течение 20 минут до получения однородной суспензии. В
полученную суспензию при перемешивании медленно с помощью бюретки вносили триэтаноламина
и продолжали перемешивание в течение 45 минут до получения однородного прозрачного геля.
Проверяли величину рН готовой основы, которая должна быть в пределах от 5,0 до 5,3. В готовую
основу [8] при перемешивании вносили необходимое количество эфирного масла из Abies sibirica,
перенесли в рабочий сосуд установки «Cito Ungvator 2000» и перемешивали в течение 15 минут до
получения однородного геля густой консистенции массой 1000,0г. Отбирали пробу для анализа. При
получении положительного результата готовый продукт передавали на фасовку в тубы.
Стандартизация лекарственных средств является сложной задачей, особенно, когда речь идет
об анализе лекарственного препарата растительного происхождения [5].
Количественное определение терпеновых соединений в эфирном масле из Abies sibirica в новом
геле проводили с использованием метода ГХ /МС.
Для количественного ГХ /МС определения компонентов сложной смеси, как правило,
используют метод внутренней нормировки. При этом суммарная площадь хроматографических пиков
принимается за 100%, а содержание отдельных компонентов определяется в массовых процентах
пропорционально их площади [6,7].
В данной работе предложен подход, предполагающий количественное определение четырех
групп терпеновых соединений в эфирном масле находящейся в стоматологическом геле. Членами
одной группы являются изомерные терпены, схожие по механизму фрагментации при массспектрометрическом детектировании. Было сделано предположение, что отклик масс-спектрометра
на эти соединения являются одинаковыми с некоторой погрешностью, не превышающей случайную
погрешность метода.
Нами было приготовлено 14 образцов для ГХ-МС анализа (таб.1).
Таблица 1. Приготовленные образцы для ГХ-МС анализа
File
G01.D
HS_VF624MS
G02.D
HS_VF624MS
G03.D
HS_VF624MS
G04.D
HS_VF624MS
G05.D
HS_VF624MS
G06.D
HS_VF624MS
G07.D
HS_VF624MS
G08.D
HS_VF624MS
G09.D
HS_VF624MS
G10.D
HS_VF624MS
G11.D
HS_VF624MS
G12.D
HS_VF624MS
G13.D
HS_VF624MS
G14.D
HS_VF624MS
Vial
6
Sample
Blank 5ml Water
Method
7
Blank 5ml Water
8
"Osnova" Gel 252.69mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil
9
"Osnova" Gel 253.35mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil
10
4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil
11
4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil
12
Gel N2 Sample A 253.85mg+4mL Water+1mL IPA
13
Gel N2 Sample B 250.39mg+4mL Water+1mL IPA
14
Gel N2 Sample A 250.97mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil.
15
Gel N2 Sample B 251.85mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil.
16
Gel N2 Sample C 252.97mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil.
17
Gel N2 Sample D 254.18mg+4mL Water+1mL IPAwith 0.517mg/mL Ess.oil.
18
Gel N2 Sample C 251.28mg+4mL Water+1mL IPA
19
Gel N2 Sample D 252.24mg+4mL Water+1mL IPA
В таблицах от 2 - 13 приведены значения хроматограмм всех 14 образцов с указанием времени
удерживаний пиков и их площадей (таб.2-13).
Таблица 2. Значение хроматограммы образца G03
TIC: G03.D\data.ms
A-G+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time
1
22.014
M
2
22.884
M
3
27.850
M
4
30.409
M
Type
0.099
0.037
0.156
0.247
Width
Area
489113321
20.769
36192720
22.798
44027284
25.062
350735923
28.318
Start Time
22.451
22.952
28.310
31.407
Таблица 3. Значение хроматограммы образца G04
TIC: G04.D\data.ms
End Time
B-G+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time
1
22.013
M
2
22.883
M
3
27.850
M
4
30.410
M
Type
0.100
0.038
0.156
0.242
Width
Area
492751737
20.778
35471831
22.759
41677708
24.907
375620359
28.271
Start Time
End Time
Start Time
End Time
22.477
22.961
28.271
31.343
Таблица 4. Значение хроматограммы образца G05
TIC: G05.D\data.ms
A-W+IPA+ESSO
Peak Ret Time
1
22.013
M
2
22.883
M
3
27.850
M
4
30.411
M
Type
0.100
0.038
0.164
0.258
Width
Area
516125085
20.772
38959955
22.762
49308262
24.881
399115400
28.304
22.479
22.968
28.293
31.750
Таблица 5. Значение хроматограммы образца G06
TIC: G06.D\data.ms
B-W+IPA+ESSO
Peak
Ret Time
1 22.013
M
0.098
2 22.884
M
0.038
3 27.849
M
0.166
4 30.411
M
0.253
Type Width
516854482
38724509
48331472
419112361
Area
20.749 22.420
22.769 22.944
24.902 28.286
28.297 31.342
Start Time End Time
Таблица 6. Значение хроматограммы образца G07
TIC: G07.D\data.ms
A-N2+W+IPA
Peak
1
2
3
4
5
Ret Time
22.014
22.884
25.407
27.849
30.412
M
M
M
M
M
Type
0.101
0.038
0.057
0.145
0.249
Width
Area
660231951
20.783
53732089
22.778
4200292
24.873
65560891
26.004
655980196
28.256
Start Time
End Time
Start Time
End Time
22.602
22.946
25.876
28.245
31.372
Таблица 7. Значение хроматограммы образца G08
TIC: G08.D\data.ms
B-N2+W+IPA
Peak
1
2
3
4
5
Ret Time
22.014
22.883
25.407
27.849
30.411
M
M
M
M
M
Type
0.095
0.038
0.061
0.153
0.240
Width
Area
468340811
20.788
41305160
22.749
4186627
24.846
48168599
25.963
533529089
28.268
22.436
22.958
25.869
28.258
31.596
Таблица 8. Значение хроматограммы образца G09
TIC: G09.D\data.ms
A-N2+W+IPA+ESSO
Peak
1
2
3
4
5
Ret Time
22.019
22.885
25.407
27.850
30.416
M
M
M
M
M
Type
0.108
0.038
0.051
0.146
0.259
Width
Area
987218931
20.700
81370222
22.767
6066279
24.866
102449711
25.982
1027286522 28.268
Start Time
End Time
Start Time
End Time
Start Time
End Time
22.580
22.953
25.861
28.268
31.691
Таблица 9. Значение хроматограммы образца G10
TIC: G10.D\data.ms
B-N2+W+IPA+ESSO
Peak
Ret Time
1 22.018
M
0.110
2 22.884
M
0.038
3 25.407
M
0.052
4 27.849
M
0.147
5 30.416
M
0.257
Type Width
1089112086
90502807
6843226
113761918
1135859852
Area
20.764 22.585
22.772 22.949
24.895 25.883
25.956 28.266
28.287 31.752
Таблица 10. Значение хроматограммы образца G11
TIC: G11.D\data.ms
C-N2+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time
1
22.018
M
2
22.884
M
3
25.407
M
4
27.849
M
5
30.416
M
Type
0.108
0.038
0.055
0.148
0.256
Width
Area
982745478
20.764
79483885
22.766
6272976
24.876
107763071
25.961
1069473498 28.278
22.578
22.963
25.842
28.268
31.394
Таблица 11. Значение хроматограммы образца G12
TIC: G12.D\data.ms
D-N2+W+IPA+ESSO
Peak Ret Time
1
22.019
M
2
22.885
M
3
25.408
M
4
27.850
M
5
30.416
M
Type
0.109
0.038
0.051
0.149
0.253
Width
Area
1069102646 20.753
87016381
22.768
6296318
24.872
109905959
25.906
1097097093 28.271
Start Time
End Time
22.584
22.976
25.874
28.260
31.648
Таблица 12. Значение хроматограммы образца G13
TIC: G13.D\data.ms
C-N2+W+IPA
Peak Ret Time
1
22.015
M
2
22.884
M
3
25.407
M
4
27.849
M
5
30.413
M
Type
0.102
0.038
0.051
0.150
0.240
Width
Area
665262565
20.786
53889917
22.766
3899781
24.861
66187698
25.956
688235095
28.282
Start Time
22.586
22.966
25.819
28.272
31.325
Таблица 13. Значение хроматограммы образца G14
TIC: G14.D\data.ms
D-N2+W+IPA
End Time
Peak
1
2
3
4
5
Ret Time
22.014
22.883
25.407
27.850
30.413
M
M
M
M
M
Type
0.100
0.038
0.051
0.148
0.243
Width
Area
670256085
20.792
55188173
22.772
3850357
24.788
62914242
25.999
649604182
28.250
Start Time
End Time
22.600
22.962
25.846
28.250
31.279
Таблица 14. Количественное определение эфирного масла из Abies sibirica в геле (прямое)
В таблице 14 приведены расчеты количества эфирного масла из Abies sibirica в
разработанном геле. Процентное содержание эфирного масла из Abies sibirica в геле составляет
0,323%. (таб.14).
Для достоверности данной методики нами был использован и метод добавки стандартного
образца. В исследуемые образцы добавлены определенное количество эфирного масла из Abies
sibirica. Проанализированы образцы с добавкой. Результаты представлены в таблице 15.
Выводы
Таким образом, в результате проведенных физико - химических, технологических,
структурно-механических, микробиологических исследований разработан состав, способ
получения, показатели качества и методы их оценки. Разработана методика количественного
определения эфирного масла из Abies sibirica в новой лекарственной форме - геле.
ЛИТЕРАТУРА
1. Шагалиева Н.Р., Куркин В.А., Авдеева Е.В., Байриков И.М., Щербовских А.Е. Актуальные
аспекты разработки и стандартизации стоматологического фитопрепарата
«Дентос». Журнал
Фундаментальные исследования. №10, 2013г.
2. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармац. вузов. – 2-е изд., перераб. и доп. –
Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. – 1239 с.
3. Kurkin V.A. Phenylpropanoids as biologically active compounds and standards of the medicinal plants
V.A. Kurkin, V.N. Ezhkov, E.V. Avdeeva, I.Yu. Klimova // XXII International Conference on Polyphenols
«Polyphenols communication 2004»: Abstracts. – Helsinki, 2004. – P. 619–620.
4. Дильбарханов Р.Д., Устенова Г.О., Бердибеков М.А., Кожанова К.К., Амантаева М.Е.
Лекарственные препараты на основе пихтового масла. Сообщение 2 // Фармация Казахстана. — 2005. — №
2. — С. 26-27.
5. Самылина И.А. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных
растительных средств // Традиционная медицина и питание: теоре-тические и практические аспекты:
материалы I Междунар. науч. конгр. – М., 1994. – С. 152.
6. Niessen W.M.A. Current practice of gas chromatography—mass spectrometry. NY: Marcel Dekker,
2001.
7. Alzaga R., Ortiz L., Sánchez-Baeza F., et al. Accurate determination of 2,4,6-trichloroanisole in wines at
low parts per trillion by solid-phase microextraction followed by GC-ECD // J. Agric. Food Chem. 2003.V. 51, N
12. P. 3509–3514.
8. Rizvangul Aupova, Zuyriadda Sakipova, Milan Zemlicka. Study of rheological properties of carbomer
gels // Life Science Journal 2014.11(2s).P.25-27.
9. Ayupova R.B., Sakipova Z.B., Shvaydlenka E., Neyezhlebova M., Ulrikh R., Dilbarkhanov R.D.,
Datkhaev U.M., Zhemlichka M. Chemical composition and antifungal activity of essential oils obtained from Abies
sibirica L., growing in the Republic of Kazakhstan. International journal of experimental education №2, 2014.
P.69-71.
Аюпова Р.Б., Швайдленко Э., Дильбарханов Р.Д.
Abies sibirica өсімдігінен эфир майы негізінде стоматологиялық гельді
жасау
және
стандарттау
Түйіндеме. Бұл ғылыми мақалада самырсын майы негізінде стоматологиялық гелдің құрамын
жасауда технологиялық өлшем бірліктерін таңдау. Зерттеу нысаны Abies sibirica өсімдігінен эфир майын
микротолқынды STARTE Microwave Exstraction System» қыздыру арқылы және медициналық тараптан
қолдануға болатын қосымша заттарды қолдану: карбомер 974 Р, глицерин, полисорбат-80, ксилитол,
триэтаноламин және тазартылған су. Гельге микроскопиялық зертеулер жасаланды және оның дисперстық
дәрежесі анықталды. Зертеулер нәтижесінде стоматологиялық гельдің оптимальді құрамы анықталды.
Негізгі сөздер: эфирлі майлар, карбомердер, дисперсті дәріжісі,тұрақтылығы, бөлшекткрдің өлшемы
.
Аюпова Р.Б., Швайдленко Э., Дильбарханов Р.Д.
Разработка и стандартизация стоматологического геля с эфирным маслом из abies sibirica
Резюме. В данной статье проведены исследования технологических параметров при разработке геля
с пихтовым маслом. Объектами исследования явились эфирное масло из Abies sibirica, полученное
методом микроволнового нагревания на экстракторе ««STARTE Microwave Exstraction System» и
вспомогательные вещества разрешенные к медицинскому применению: карбомер 974 Р, глицерин,
полисорбат-80, ксилитол, триэтаноламин и вода очищенная. Проведены микроскопические исследования
гелей и определены их степень дисперсности. В результате проведенных экспериментальных исследований
был отобран оптимальный состав и технология стоматологического геля с пихтовым маслом на основе гелей
карбомеров.
Ключевые слова: эфирные масла, карбомеры, размер частиц, степень дисперсности, стабильность.
Ayupova R.B., Shvaydlenko E., Dilbarchanov R.D.
Development of standartisation dental gel with essential oil of abies sibirica
Resume. This article conducted studies of technological options in developing gel with fir oil. The objects of
investigation were essential oil of Abies sibirica, obtained by the method of microwave heating on the extractor
«Starte Microwave Exstraction System» and auxiliary substances permitted for medical use: carbomer 974 R,
glycerin, Polysorbate-80, xylitol, triethanolamine and purified water. Held microscopic examination of gels and
determined their degree of dispersion. As a result of experimental studies was selected the optimum composition
and technology of dental gel with fir oil-based gels carbomer.
Key words: essential oils, carbomer, particle size, degree of dispersion stability.
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа