close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

Ковалева Дарья Дмитриевна. Санитарно-микробиологические исследования помещений главного корпуса ОГУ им. И.С. Тургенева

код для вставки
1.2 Виды СПМ
1.3 Характеристика СПМ
1.4 Патогенные микроорганизмы
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. Материалы и методика исследования
2.1 Питательные среды
2.2 Приготовление питательных сред
2.3 Приготовление препарата методом смыва
2.3.1 Методики посева смывов на БГКП
2.3.2 Посев смыва на определение общего микробного числа
2.4 Подсчет выросших колоний
2.5 Метод окраски клеток микроорганизмов по Граму
2.6 Идентификация микроорганизмов методом описания их
культуральных признаков
Микробиологический анализ окружающей среды
в закрытых помещениях университета
Глава 3. Культуральные признаки
3.1 Описание культуральных признаков микроорганизмов, выращенных
на среде из ГРМ-бульона
3.2. Описание культуральных признаков микроорганизмов, выращенных
на среде Эндо
Глава 4 Санитарно-бактериологический анализ смывов
4.1 Столовая главного корпуса ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С. Тургенева»
4.2 Учебная аудитория ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С. Тургенева»
4.3 Коридор ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С. Тургенева»
Заключение
Выводы
Список литературы
Приложение
5. Перечень графического материала: таблицы, рисунки.
АННОТАЦИЯ
Тема ВКР: Санитарно-микробиологические исследования помещений
главного корпуса ОГУ им. И.С. Тургенева
Объем работы: выпускная квалификационная работа изложена на 58
страницах компьютерного текста, состоит из введения, 4-х глав, заключения,
выводов, списка литературы и приложения. Приложение включает в себя 7
таблиц и 14 рисунков. Список литературы содержит 25 источников.
Ключевые слова: санитарно-микробиологические исследования.
Цель
исследования
–
анализ
результатов
исследований
микробиологических смывов из помещений университета ОГУ и изучение
поверхностей помещений в университете на наличие на них патогенных или
условно патогенных микроорганизмов.
Предмет исследования: поверхности в помещениях университета
(парты, столы, стены, пол, подоконники)
Объект исследования: микроорганизмы, обсеменяющие исследуемые
поверхности.
Научная
новизна:
Новизна
исследования
связана
с
микробного населения поверхностей окружающей среды
изучением
конкретных
помещений университета с целью выявления патогенных и условно патогенных
микроорганизмов,
поверхностей,
не
что
коррелирует
соответствующим
с
обнаружением
санитарным
окружающих
нормам.
Так
как
университетская столовая – место достаточно посещаемое, а преподаватели и
студенты большую часть рабочего времени проводят в аудиториях, крайне
важно, чтобы состояние окружающей среды соответствовало нормам не только
по освещенности, свободному пространству, но и по микробиологическому
состоянию воздуха и окружающих предметов. Это напрямую связано со
здоровьем и эмоциональным состоянием людей.
Ожидаемые
результаты:
Определение
микробного
населения
поверхностей окружающей среды позволяет определить качественный состав
бактерий, которые представлять и обычную микрофлору окружающей среды,
но среди них могут быть и опасные для здоровья человека. В процессе
исследования предстоит выявить наиболее обсемененные поверхности в
различных помещениях университета и определить места скопления условнопатогенных и патогенных микроорганизмов.
Апробация работы -
на ежегодной научной конференции
"Неделя
науки - 2018" в Орловском государственном университете имени И.С.
Тургенева, выступление с докладом.
Работа состоит из введения, 4-х глав, выводов, заключения, списка
литературы и приложения.
В введении раскрывается актуальность темы, предмет, объект, гипотеза
исследования, научная новизна, ожидаемые результаты и апробация работы.
В первой главе рассмотрены санитарно-показательные микроорганизмы,
даны сведения о санитарных правилах и патогенных микроорганизмах.
Во второй главе материалы и методика исследований: приготовление
питательных сред и приготовление препарата методом смыва.
В третьей главе описаны культуральные признаки микроорганизмов.
В четвертой главе приведен санитарно-бактериологический анализ
смывов.
В заключении приводятся выводы о том, где и какие микроорганизмы
обитают в большей степени и с чем это связано. Определено самое грязное
помещение в университете.
В выводах
микроорганизмы,
мы выделили значимые в инфекционных заболеваниях
сравнили
результаты
исследований,
проведенных
в
различных помещениях и определили какие микроорганизмы лучше растут на
конкретной среде. Результаты отражены в выступлении на студенческой
конференции «Неделя науки» в 2018 г
СОДЕРЖАНИЕ
Введение
9
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
Глава 1. Микробные загрязнения
12
1.1 Виды СПМ
12
1.2 Характеристика СПМ
12
1.3 Патогенные микроорганизмы
19
1.4 Санитарные правила и нормы
25
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. Материалы и методика исследования
26
2.1 Питательные среды
26
2.2 Приготовление питательных сред
28
2.3 Приготовление препарата методом смыва
31
2.3.1 Методики посева смывов на БГКП
32
2.3.2
Посев
смыва
на
определение
общего
33
микробного числа
2.4 Подсчет выросших колоний
34
2.5 Метод окраски клеток микроорганизмов по Граму
36
2.6 Идентификация микроорганизмов методом описания их
37
культуральных признаков
Микробиологический анализ окружающей среды
43
в закрытых помещениях университета
Глава 3. Культуральные признаки
3.1
Описание
культуральных
43
признаков
микроорганизмов,
43
признаков
микроорганизмов,
49
выращенных на среде из ГРМ-бульона
3.2.
Описание
культуральных
выращенных на среде Эндо
Глава 4 Санитарно-бактериологический анализ смывов
54
4.1 Столовая главного корпуса ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С.
54
Тургенева»
4.2 Учебная аудитория ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С. Тургенева»
56
4.3 Коридор ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С. Тургенева»
58
Заключение
61
Выводы
62
Список литературы
63
Введение
Микробиологические смывы – относительно новый метод исследования
помещения. Он позволяет выявить состояние поверхностей, с которыми
контактирует человек, обнаружить опасные для него микроорганизмы,
оказывающие негативное воздействие на здоровье.
Именно поэтому сегодня исследование смывов востребованных услуг лаборатории при СЭС.
одна из самых
Такой анализ является
обязательным для многих видов организаций и позволяет выявить санитарногигиеническое
состояние
предприятий
общепита,
детских,
лечебно-
профилактических учреждений, оценить качество выпускаемой продукции и
т.п.
Смыв представляет собой жидкость с микроорганизмами, взятыми из
среды их обитания – то есть с поверхностей столов, полов, стен, посуды,
спецодежды и т.п.
При санитарном надзоре за учебными учреждениями в основном
ограничиваются:
1) выявлением бактерий группы E. coli для определения фекального
загрязнения,
2) определением общей бактериальной обсемененности с пересчетом на 1
см2 исследуемой площади;
3) наличие Staphylococcus aureus и других патогенных микробов как
показатель орального обсеменения.
Периодичность и объем
контроля методом смывов для учебных
учреждений составляет 1 раз в год – 10.
Актуальность.
В
связи
с
тем,
что
несоблюдение
санитарно-
гигиенических требований является прямой угрозой здоровью людей, метод
исследования смывов сегодня очень актуален благодаря его точности и
эффективности. Поэтому, нам необходимо осуществлять контроль над
наличием с поверхностей помещения патогенных и условно патогенных
микроорганизмов. Это позволит сохранить здоровье людей на должном уровне.
1. Цель моей работы состояла в анализе результатов исследований
микробиологических смывов из помещений университета ОГУ (аудитория,
коридор,
столовая)
по
микробиологическим
показателям
согласно
отечественным нормативным документам.
2. Цель работы состояла в изучении поверхностей помещений в
университете на наличие на них патогенных или условно патогенных
микроорганизмов.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Провести микробиологический анализ смывов с поверхностей в
помещениях главного корпуса ОГУ.
2. Выделить значимые в инфекционных заболеваниях микроорганизмы,
обитающие на загрязненных подоконниках, партах, стенах и пола.
3. Сравнение результатов санитарно-микробиологических исследований,
полученных в различных помещениях университета.
Предмет исследования: поверхности в помещениях университета
(парты, столы, стены, пол, подоконники)
Объект исследования: микроорганизмы, обсеменяющие исследуемые
поверхности.
Научная
новизна:
Новизна
исследования
связана
с
микробного населения поверхностей окружающей среды
изучением
конкретных
помещений университета с целью выявления патогенных и условно патогенных
микроорганизмов,
поверхностей,
не
что
коррелирует
соответствующим
с
обнаружением
санитарным
окружающих
нормам.
Так
как
университетская столовая – место достаточно посещаемое, а преподаватели и
студенты большую часть рабочего времени проводят в аудиториях, крайне
важно, чтобы состояние окружающей среды соответствовало нормам не только
по освещенности, свободному пространству, но и по микробиологическому
состоянию воздуха и окружающих предметов. Это напрямую связано со
здоровьем и эмоциональным состоянием людей.
Ожидаемые
результаты:
Определение
микробного
населения
поверхностей окружающей среды позволяет определить качественный состав
бактерий, которые представлять и обычную микрофлору окружающей среды,
но среди них могут быть и опасные для здоровья человека. В процессе
исследования предстоит выявить наиболее обсемененные поверхности в
различных помещениях университета и определить места скопления условнопатогенных и патогенных микроорганизмов.
Апробация работы
1.
На ежегодной научной конференции "Неделя науки - 2018" в
Орловском государственном университете имени И.С. Тургенева, выступление
с докладом.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
Глава 1. Микробные загрязнения
С
изобретением
микроскопа
зародилась
наука,
изучающая
микроорганизмы – микробиология, которая также установила их связь с
возникновением заболеваний у людей. Появились первые санитарные правила,
рекомендации и законы, которые охраняют здоровье граждан.
1.1 Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ)
Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) – это представители
нормальной микрофлоры человека, которые выделяются в окружающую среду
и там сохраняются. В связи с этим СПМ являются показателями загрязненности
исследуемых объектов, представляя опасность для здоровья людей.
Выделяют три группы санитарно-показательных микроорганизмов
1. Обитатели кишечника человека. Их расценивают как индикаторы
фекального загрязнения. В нее входят бактерии группы кишечной палочки –
E.coli, энтерококки (Enterococcus) , сульфитвосстанавливающие клостридии
(включая Clostridium perfringens), колифаги, протеи
2. Обитатели верхних дыхательных путей и носоглотки, являющиеся
индикаторами воздушно-капельного загрязнения среды. В нее традиционно
включили стрептококков и стафилококков, однако в настоящее время принято
считать только стафилококков, в частности Staphylococcus aureus.
3. Сапрофитные микроорганизмы, обитающие во внешней среде. Это
индикаторы процессов самоочищения. В нее входят бактерии-аммонификаторы
и нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, целлюлозобактерии,
бделловибрионы, сине-зелёные водоросли, актиномицеты и грибы. [8]
1.2 Характеристика СПМ
1. Бактерии группы кишечной палочки (БГКП, колиформные бактерии)
Преимущество этих бактерий как СПМ связано с тем, что они являются
постоянными обитателями кишечника и постоянно выделяются с фекалиями в
окружающую среду в больших количествах, их число намного выше, чем
других представителей кишечных микроорганизмов. [9]
К
этой
группе
относят
грамотрицательные,
неспорообразующие
анаэробные палочки со слегка закругленными концами. В мазке располагаются
беспорядочно, при микроскопировании представляют собой короткие толстые
палочки. Эшерихии ферментируют лактозу и манит. Не обладают оксидазной
активностью.
Устойчивость
Escherichia coli не устойчива к высокой температуре. Бактерии группы
кишечных палочек обезвреживаются обычными методами пастеризации (65 75° С). При 60° С кишечная палочка погибает через 15 минут.
Культуральные свойства
Бактерии хорошо растут на простых питательных средах: мясопептонном
бульоне (МПБ), мясопептонном агаре (МПА). На МПБ дают обильный рост при
значительном помутнении среды.
Влияние на человека
Количество Escherichia coli среди других бактерий в кишечнике не
превышает
1%.
Кишечная
палочка
играет
важнейшую
роль
в
функционировании желудочно-кишечного тракта. Они - основные конкуренты
условно-патогенной микрофлоры в отношении заселения кишечника. Эти
бактерии забирают из просвета кишечника вредный для бифидобактерий и
лактобактерий
кислород.
Помимо
этого,
эти
микробы вырабатывают
необходимые для человека витамины: витамины группы В, жирные кислоты
(уксусную, муравьиную и др), участвует в обмене холестерина, билирубина,
холина, желчных кислот. Большое влияние оказывают на всасывание железа и
кальция.
В
фекалиях
здорового
человека
кишечные
палочки
(типичные)
выявляются в количестве 107-108 КОЕ/г. Отклонения от этой формы считаются
признаками дисбактериоза
Непатогенные бактерии E. coli, которые населяют кишечник, могут, тем
не менее, вызвать развитие патологии при попадании в другие органы или
полости человеческого тела. Например, при попадании в брюшную полость
через отверстие в ЖКТ возникает перитонит, а, размножаясь во влагалище
женщины, образуется кольпит.
Заражение вирулентными штаммами E. col, наступает при заражении
алиментарным путём. Передача патогенных E. coli часто происходит фекальнооральным путём. Пути передачи могут быть выражены следующими
критериями:
1. низкой гигиеной приготовления пищи,
2. загрязнением продуктов навозом,
3. поливом урожая загрязнённой водой или сточными водами,
4. употреблением для питья воды, загрязнённой сточными
водами
Кишечные заболевания, вызываемые патогенными E.coli объединяются
общим названием эшерихиозы. У детей он протекает в виде различной тяжести
энтеритов, энтероколитов в сочетании с синдромом общей интоксикации. При
средних и тяжелых формах сопровождается повышением температуры,
поносом,
сепсисом.
У
взрослых
заболевание,
вызванное
эшерихией,
напоминает по течению и клиническим симптомам острую дизентерию.
Среди представителей БГКП Escherihia отличаются по свойствам
размножения от Citrobacter и Enterobacter. Практически это используется для
определения давности микробного обсеменения. Если присутствуют эшерихии
- это свидетельствует о недавнем загрязнении, а наличие цитробактера или
энтеробактера означает, что с момента появления БГКП на исследуемом месте
прошло несколько недель.
2.Энтерококки (Enterococcus)
Энтерококки -
это слегка вытянутые или шарообразные бактерии,
которые положительно окрашиваются по Граму. На средах они представлены
диплококками или короткими цепочками, чем очень похожи на стрептококки.
Являются условно-патогенными микроорганизмами. [21]
Энтерококки как санитарно-показательные микроорганизмы имеют
значительные преимущества перед БГКП. Энтерококки не подвергаются
сильным изменениям и не размножаются (за исключением пищевых продуктов)
в объектах внешней среды.
Устойчивость
Энтерококки – грамположительные факультативные анаэробы, которые
очень термоустойчивы. Энтерококки выживают при нагревании до 60 °С в
течение 30 минут, при обработке многими дезинфицирующим средствами, или
же располагаясь вне организма на предметах личного обихода человека.
Культуральные свойства
Энтерококки растут на МПА, МПБ, но лучший рост отмечен на средах,
содержащих углеводы и факторы роста (дрожжевой экстракт, диализат). В
жидких средах наблюдают диффузное помутнение с образованием вначале
аморфного, затем ослизняющегося осадка. При обильном посеве образуют
сплошной рост в отличие от стрептококков, которые и при густом посеве дают
изолированные колонии.
Опасность для человека
При попадании энтерококков в брюшную полость возникает спонтанный
бактериальный перитонит, который может окончиться летальным исходом.
Энтерококки, кроме того, что синтезируют витамины и способствуют
пищеварению, выделяют токсины – эндогенные нейротрансимиттеры (аммиак,
меркаптан). Тем самым становятся основной причиной развития пищевой
токсикоинфекции.
3. Clostridium perfringens
Clostridium
микробы,
perfringens
представители
Неподвижные,
в
организме
–
это
грамположительные
палочковидные
сульфитвосстанавливающих
клостридий.
человека
образуют слизистую
структуру,
защищающую клетку бактерии от внешних воздействий - капсулу. Являются
анаэробными, спорообразующими бактериями.
Свое название клостридия получила от греческого слова «веретено», так
как по своей форме в результате спорообразования она по центру раздувается и
напоминает веретено.
Благодаря
этой
особенности
Clostridium
perfringens
способна
выдерживать даже кипячение и плохо поддаваться воздействию антибиотиков.
Культуральные свойства
На агаризованных средах Clostridium perfringens образует
круглые
небольшие колонии (1—2 мм в диаметре) с гладким или зубчатым краем.
Колонии, выросшие в толще агара, имеют вид чечевичных зерен. В жидкой
среде проявляется в виде помутнения с дальнейшим просветлением среды и
образованием на дне беловатого хлопьевидного осадка. Хоть Clostridium
perfringens и является анаэробом, но она не очень чувствительна к кислороду
воздуха. Бактерии хорошо и быстро растут на питательных средах, которые
приготовлены из гидролизатов мяса или казеина. Рост уже отмечается через 3-8
ч при температуре 37-42° С и рН среды 7,2-7,4. Далее рост сопровождается
бурным газообразованием и снижением рН в кислую сторону.
Опасность для человека
Clostridium perfringens является возбудителем пищевых токсических
инфекций человека, проявляет себя как один из возбудителей газовой гангрены.
Синтезирует многие ферменты агрессивности: протеиназы (расщепляют белки
по пептидным связям), лецитиназу, коллагеназу, гиалуронидазу. Продуцирует
также токсины
В то же время она обитает в микрофлоре кишечника у трети здоровых
людей, поэтому микробиология рассматривает ее как условно-патогенную
микрофлору человека и как санитарно-показательный организм.
4. род бактерий Proteus
Proteus — полиморфные палочки размером 0,5—3 мкм, подвижные
(перетрихи) грамотрицательные. Не образуют спор и капсул, являются
факультативными анаэробами.
Бактерии этого рода в небольшом количестве содержатся в кишечнике
человека и животных, а в случае их увеличения (заражения ими) вызывают
инфекции.
В связи с тем, что обнаружение большого количества Proteus vulgaris в
смывной жидкости свидетельствует о содержании в них органических веществ
животного происхождения, эти микробы имеют определенное санитарнопоказательное значение.
При загрязнении объектов внешней среды фекальными стоками, как
правило, выявляют Proteus mirabilis
Культуральные свойства.
Нетребовательны к питательным средам. На мясопептонном агаре Нформа протея дает характерный ползучий рост в виде колонии голубоватодымчатого цвета (феномен роения), затягивающий всю поверхность сплошным
налетом без образования отдельных колоний. В жидкой питательной среде дает
рост в виде диффузного помутнения. При культивировании характерен
гнилостный запах.
Устойчивость.
Бактерии рода Proteus погибают при 60°С в течение 1 ч, а при 80°С — в
течение 5 мин.
Proteus также устойчивы и к низким температурам. Они хорошо
переносят трехкратное попеременное замораживание и оттаивание. 1%-ный
раствор фенола вызывает гибель протея через 30 мин.
Опасность для человека.
Бактерии этого рода в небольшом количестве содержатся в кишечнике
человека и животных, а в случае их увеличения (заражения ими) вызывают
инфекции. Лидирующее место занимают гастриты, кишечные инфекции,
энтериты и т.п.
5. Род Bacillus
Данный род микробов достаточно обширен, включает в себя порядком
217 видов. По форме микробы представлены грамположительными палочками
с «обрубленными» концами. Бактерии образуют внутриклеточные споры. Один
из представителей, который может встречаться при микробиологических
исследованиях поверхностей в помещениях – Bacills subtilis (сенная палочка).
Палочки имеют прямую, либо же слегка изогнутую форму.
Культуральные свойства
Развиваются бациллы при температуре 5-450С, рН 5,3-6,4. Культура, в
которой развивается этот микроб образует плоские, сухие колонии, имеющие
плотную
консистенцию с белым зернистым налетом. Колонии легко
снимаются с агара. Колонии мелкие – 2,5 мм. Края почти ровные.
Устойчивость
Традиционно Bacills subtilis относят к почвенным микробам. Встречается
в воздухе, на поверхностях различных предметов в помещениях. Эта бактерия
не является патогенной для человека: она участвует в процессах переваривания
пищи, подавляет патогенную флору. Является условно-патогенной бактерией.
При большом ее содержании на поверхностях в помещениях она может вызвать
у человека аллергию, выражающуюся в виде сыпи.
6. Род Micrococcus
Бактерии этого рода представляют собой грамположительные аэробные
бактерии [25]. Диаметр микрококков составляет от 0,5 до 3 мкм в диаметре.
Микрококки неподвижны и не образуют спор. В роль запасного вещества
клеток вступает гликоген.
Культуральные свойства.
Особенность микрококков заключается в способности развиваться в
низких условиях. Так, например, Micrococcus antarcticus приспособлен к жизни
в суровых антарктических условиях, так как наиболее благоприятная
(оптимальная) температура роста бактерий этого вида составляет 8-24 градуса,
а могут расти и при нуле. Оптимальная температура роста для Micrococcus
luteus и Micrococcus lylae — 37°С.
Культура, в которой развивается микрококк, представляет собой
округлые колонии желтоватого цвета, которые могут располагаться поодиночке
или в виде сферических скоплений [4].
Оптимальная температура роста бактерий рода Micrococcus составляет
25-37 ° С
Микрококки в организме человека.
Наибольшее количество микрококков находится на коже человека, а
также в дыхательных путях и ротовой полости. Чаще всего бактерии рода
Micrococcus не вызывают каких-то заболеваний, но они могут стать причиной
возникновения
оппортунистических инфекций, особенно у людей с
ослабленным иммунитетом.
1.3 Патогенные микроорганизмы
Патогенные микроорганизмы – это микроорганизмы, способные при
определенных условиях вызывать то или иное инфекционное заболевание,
которое характерно для этого патогенного микроба. Но не все микроорганизмы
патогенны [10]
Патогенность бактерий заключается в выделении ими
токсичных веществ в человеческий организм, а также в их агрессивности.
Агрессивность – это способность микроба расти, размножаться и
противостоять защитным свойствам человеческого организма
Токсичность – способность бактерий выделять токсичные вещества,
болезнетворно воздействующие на человеческий организм.
При анализе микробиологических смывов с поверхностей объектов
окружающей среды в закрытых помещениях могут быть выявлены следующие
патогенные микроорганизмы: Salmonella, Mycobacterium tuberculosis (палочка
Коха), Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Neisseria meningitidis,
Corynebacterium diphtheriae (дифтерийная палочка).
1. Род Salmonella
Сальмонеллы
закругленными
–
это
концами,
род
мелких
относящийся
к
палочковидных
семейству
бактерий
с
Enterobacteriaceae.
Сальмонеллы располагаются поодиночке и не образуют спор и капсул. По всей
поверхности
бактерии
располагаются
длинные
жгутики,
что
является
отличительной чертой сальмонелл. По Граму окрашиваются отрицательно
Культуральные свойства
Сальмонеллы являются факультативными анаэробами. Они хорошо
растут на МПА и МПБ при 37оС и рН среды 7,2-7,4. Для накопления
производят посев на среды обогащения: среду Мюллера, Среду Кауфмана.
Используют также элективные среды: 10-20% желчный бульон и среду
Раппопорт, т.к. они содержат желчь, подавляющую рост посторонней
микрофлоры.
В качестве дифференциально диагностических сред используют среды
Эндо, ЭМС, Плоскирева, висмут-сульфит агар и др.
Устойчивость
Сальмонеллы
характеризуются
хорошей
устойчивостью
к
неблагоприятным внешним факторам. Они выживают при температурах от +7
до +45 ºC и рН от 4,1 – 9,0. В комнатной пыли бактерии сохраняются до трех
месяцев, а в открытых водоемах —от 11 до 120 дней. При 70° С сальмонеллы
погибают в течение 5–10 минут.
Опасность для человека
Сальмонеллы
различных
различных
инфекционных
enterica enterica серотип typhi
серотипов
заболеваний.
являются
Так,
причиной
например,
развития
Salmonella
— возбудитель брюшного тифа, Salmonella
enterica enterica серотипы paratyphi A, paratyphi B, paratyphi C — возбудители
паратифов A, B и С, а Salmonella enterica enterica серотипов agona, enteritidis и
др. — возбудители сальмонеллеза.
2. Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium tuberculosis, или палочка Коха – грамположительные
длинные палочкообразные микобактерии, образующие нитевидные структуры.
Они кислотостойки и неподвижны. Так как эти микобактерии содержат
много липидов и воска в своей стенке, они обладают устойчивостью к
дезинфицирующим веществам, солнечным лучам или к высушиванию. Эти
микроорганизмы проявляют высокую степень патогенности.
Культуральные признаки
Mycobacterium tuberculosis являются факультативными анаэробами или
аэробами. Для палочки Коха характерен медленный рост и для успешного
размножения им необходим белок и глицерин.
В качестве среды для культивирования рекомендована плотная среда
Левенштейна — Йенсена [17]
На жидких средах эти микроорганизмы образуют поверхностную пленку.
Устойчивость
Палочка Коха обладает очень высокой устойчивостью. Например, при
температуре 23 °C во влажном и тёмном месте она сохраняется до 7 лет, а в
тёмном и сухом месте (например, при высыхании мокроты больного или в
пыли) микроб сохраняется до 10—12 месяцев. В уличной пыли (то есть в сухом
и светлом месте) - до 2 месяцев, а в почве - до 6.
Палочка Коха, находящаяся в мокроте, остается жизнеспособной при
кипячении
ее
в
течение
5
минут.
Микобактерии
чувствительны
к
хлорсодержащим средствам, третичным аминам и перекиси водорода.
Опасность для человека
Палочка Коха, при попадании в человеческий организм приводит к
возникновению такого заболевания как туберкулез. Выделяют следующие
способы
передачи инфекции:
воздушно-капельный (наиболее часто
встречающийся), через зараженное молоко животных (алиментарный) и
воздушно-пылевой. Каждый человек в течение жизни часто контактирует с
возбудителями туберкулеза, но заболевание при этом не развивается, это во
многом зависит от резистентности организма.
3. Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pneumoniae - вид микроорганизмов из рода Streptococcus.
Представлен неподвижным диплококком длиной 0,5—1,25 мкм и диаметром
около 1 мкм. Каждая пара диплококков окружена толстой капсулой.
Культуральные свойства
Streptococcus
pneumoniae —
факультативный
грамположительный
анаэроб.
Растут пневмококки при температуре 36-37° С и рН среды 7,2-7,4. Так
как микробы не могут сами синтезировать многие аминокислоты, их
выращивают на средах с добавлением крови или сыворотки. Рост в жидкой
среде характеризуется ее помутнением и образованием осадка на дне.
При культивировании делают пересевы каждые 2-3 дня в связи с тем, что
на питательных средах пневмококки сохраняются не более 5-6 дней.
Устойчивость
Пневмококки не обладают повышенной стойкостью: при температуре
60° С они погибают через 3-5 мин. Но к низким температурам и высушиванию
они довольно устойчивы: в высушенной мокроте - до 2 месяцев. К
дезинфицирующим
веществам относят: 3% фенол, сулема в разведении
1:1000 губят их через несколько минут. Также пневмококки чувствительны к
оптохину, убивающий их в разведении 1:100000.
Опасность для человека
Пневмококки вызывают гнойновоспалительные заболевания, среди
которых: крупозная пневмония, ползучая язва роговицы, отит.
Наиболее часто встречается заболевание - пневмония, захватывающая
от одной до трех долей легкого.
4.
Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus – это неподвижные бактерии рода Staphylococcus
шарообразной формы. Грамположительны. [25]. Встречаются повсеместно: в
воздухе, пыли, сточных водах, продуктах питания, на различных поверхностях
в окружающей среде, на кожных покровах людей и животных и тд.
Стафилококки присутствуют в полостях носа, и горле, а также на волосах и
кожном покрове по крайней мере у 50% здоровых людей.
Культуральные свойства
Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых
средах, могут расти и на агаре с высоким содержанием хлорида натрия (до
15%) – на желточно-солевом или молочно-солевом агаре
. Микробы
выращивают на средах при 37 °С и рН 4,2 - 9,3
Устойчивость
Отличительная
особенность
стафилококков
от
микрококков
–
способность первых ферментировать глюкозу в анаэробных условиях. Хорошо
выдерживают повышенное осмотическое давление и хорошо переносят
высушивание. Погибают при воздействии солнечного света в течение 10-12
часов и при нагревании при 70-80°С за 20-30 мин. Если использовать метод
сухого жара, бактерии погибнут за 2 часа. Повторное замораживание и
оттаивание их не убивает. Менее устойчивы стафилококки к действию
перекиси водорода, но резистентны к воздействию чистого этанола
Опасность для человека
Различают генерализованные и локальные формы стафилококковой
инфекции. К первым
относят сепсис, а ко вторым - заболевания кожи,
слизистых оболочек, внутренних органов, костей, суставов, молочных желез и
пупочного канатика. Также стафилококк вызывает пищевые отравления своим
эндотоксином. [1]
5.
Neisseria
Neisseria meningitidis
meningitidis,
или
менингококк — грамотрицательные
диплококки рода Neisseria.
Культуральные свойства
Строгие аэробы, которые не растут на простых питательных средах. Для
культивирования к к основным средам добавляют сыворотку, кровь, яичный
желток и др. Наиболее подходящей бессывороточной средой считается среда
Мюллера-Хинтона, которая включает полный набор всех необходимых ами-
нокислот и факторов роста.
Культивируют при рН среды 7,2—7,4 и
температуре 37°С. В отличие от условно-патогенных нейссерий не образует
пигмента.
Устойчивость
Менингококк слабо устойчив к внешним воздействиям. На плотных и
жидких средах при оптимальных условиях культура гибнет через 48—72 ч. Но
сохраняют культура с помощью лиофильного высушивания. При температуре
55°С бактерии погибают через 5 мин, а при кипячении и при воздействии
ультрафиолетового облучения — моментально. Чувствителен к солям тяжёлых
металлов и большинству антибиотиков. Под действием 1%-го раствора фенола,
0,5—1%-й раствора
хлорамина,
70%-го этанола и
3—5%-й раствора
карболовой кислоты микробы погибают за 1 мин. [3]
Опасность для человека
Вызывают менингококковую инфекцию, которая
поражет слизистую
оболочку носоглотки (назофарингит), оболочку головного мозга (менингит).
6.
Corynebacterium diphtheriae
Corynebacterium diphtheriae — вид грамположительных бактерий рода
Сorynebacterium. Эти микробы представлены грамположительными прямыми,
слегка изогнутыми палочками с утолщениями на конце.
Культуральные свойства.
Факультативный анаэроб, растет при температуре 37оС на сложных
питательных
средах:
на
свернутой
кровяной
сыворотке,
кровяном
теллуритовом агаре.
Устойчивость
Corynebacterium diphtheriae очень устойчив к низким температурам, но
быстро погибает при высокой температуре: при 60 °С — в течение 15-20 мин, а
при кипячении — через 2-3 мин. С помощью дезинфицирующих веществ в
обычно применяемой концентрации уничтожают бактерии за 5-10 мин. Но
данные микробы очень устойчивы к
высушиванию
и поэтому надолго
сохраняет жизнеспособность в высохшей слизи, слюне и в частичках пыли.
Опасность для человека
Все штаммы C. diphtheriae являются возбудителями дифтерии. Дифтерия
может быть вызвана как токсигенными, так и нетоксигенными штаммами
бактерии. [22]
1.4. Санитарные правила и нормы
В связи с тем, что для поверхностей помещений в университетах нет
определенных санитарных правил и норм, мы руководствовались
СанПиН 2 1
3 2630 10, пунктами 11,1 и 11,10 – Санитарное содержание помещений,
оборудования, инвентаря.
Согласно пункту 11,1
все помещения, оборудование и инвентарь
должны содержаться в чистоте. Влажная уборка помещений, включающая в
себя обработку полов, мебели, оборудования, подоконников, дверей, должна
осуществляться не менее 2 раз в сутки с использованием моющих и
дезинфицирующих средств, разрешенных к использованию в установленном
порядке. [19]
Согласно
обеззараживают
пункту
в
11.10,
использованный
растворе
уборочный
дезинфицирующего
инвентарь
средства,
затем
прополаскивают в воде и сушат. Уборочный инвентарь для пола и стен должен
быть раздельным, иметь четкую маркировку, применяться раздельно для
кабинетов,
коридоров,
санузлов.
При
невозможности
использования
одноразовых тканевых салфеток, многоразовые салфетки подлежат стирке.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. Материалы и методика исследования
Объектом моего исследования явились микроорганизмы, обсеменяющие
большие поверхности (столы, стены, пол, подоконники - только в коридоре)
Исследования проводила в течение 2017-2018 годов, исследуемый
материал брала с поверхностей в учебной аудитории, столовой, коридоре
При выполнении работы были использованы следующие методики,
изложенные в «Практикуме по микробиологии»: [ 14] [21] [18] [5]
1. Приготовление питательных сред.
2. Приготовление препарата методом смыва
3. Посев на питательные среды
3. Подсчет выросших колоний
5. Метод окраски клеток микроорганизмов по Граму.
6. Идентификация микроорганизмов методом описания их культуральных
признаков.
Рассмотрим каждую методику подробнее.
2.1
Питательные среды
Питательная среда — это одно- или многокомпонентный субстрат,
который применяют для культивирования микроорганизмов [23]
Питательная среда должна соответствовать следующим требованиям:
1.
быть питательной, то есть содержать в себе все необходимые для
питания и обеспечения энергией вещества. При этом дополнительно в
питательную среду добавляют факторы роста, т.е. есть те вещества, которые
клетки сами синтезировать не могут (витамины и некоторые аминокислоты)
2.
иметь оптимальную pH
среды
(концентрацию
водородных
ионов),ведь только при этом условии микробы смогут усваивать все
необходимые вещества.
Для
большинства патогенных
слабощелочная среда (pH 7,2—7,4)
бактерий оптимальной
является
3.
быть изотоничными для микробной клетки, то есть осмотическое
давление в среде должно быть равно давлению внутри клетки.
4.
быть стерильной
5.
плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для
бактерий консистенцию.
6.
должны содержать постоянное количество ингредиентов.
Желательно, чтобы среды были прозрачными — ведь так удобнее следить
за ростом культур. [7]
Классификация питательных сред
1. По исходным компонентам:
а)
натуральные
среды —
готовят
из
продуктов
животного
и
растительного происхождения (мясо, асцит, костная мука, кормовые дрожжи,
сгустки крови и др.)
б) синтетические среды — готовят из определённых органических и
неорганических соединений, которые взяты в предельно точных указанных
концентрациях и предварительно растворённых в дистиллированной воде. [2]
2. По степени готовности:
а) готовые питательные среды (в чашках Петри, во флаконах)
б) сухие смеси
3. По степени плотности:
а) жидкие (бульоны)
б) полужидкие
в) плотные
Плотные и полужидкие среды отличаются от жидких наличием
желирующего агента (агар-агар, реже желатин).
4.По составу:
а) простые: МПБ, МПА, питательный желатин,
б) сложные — многокомпонентные среды, которые могут содержать
аминокислоты, витамины, микроэлементы и другие вещества.
5. По назначению:
а) основные — с их помощью культивируют большинство микробов,
например, МПБ,МПА, бульон или , пептонная вода.
б)
специальные —
служат
для
выделения
и
выращивания
микроорганизмов, не растущих на простых средах.
в) элективные (избирательные) — с их помощью выделяют определённые
виды микробов путем задерживания или подавления роста сопутствующих
микроорганизмов. ((добавление антибиотиков, солей и т.д)
г) дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид
микробов от другого по ферментативной активности. (среда Эндо)
В состав таких сред входят: основная питательная среда, обеспечивающая
размножение
бактерий;определенный
химический
субстрати
цветной
индикатор. Его изменение окраски говорит о биохимической реакции и
наличии данной ферментной системы у исследуемого микроорганизма.
д)
транспортные —
предназначены
для
первичного
посева
и
транспортировки исследуемого материала.
2.2 Приготовление питательных сред
1.ГРМ-бульон
Эта питательная среда широко применяется в лабораториях для
выращивания микроорганизмов. Для её приготовления используют сухой агарагар – полисахарид с низким содержанием азотистых веществ и не
представляющий питательной ценности для микроорганизмов.
Для приготовления ГРМ-бульона мы использовали:
1.
Питательный бульон для культивирования микроорганизмов (ГРМ-
БУЛЬОН)
2.
Дистиллированная вода
3.
Агар сухой
Питательный бульон для культивирования микроорганизмов имеет
следующий состав, г/л:
1.
панкреатический гидролизат рыбной муки
8.0
2.
3.
пептон ферментативный
8.0
натрия хлорид
4.0
pH
7.0 -7.4
К 1 л дистиллированной воды добавили 20 г питательный бульон для
культивирования
микроорганизмов.
Среду
нагрели
до
растворения
питательного бульона, после чего профильтровали через бумажный фильтр.
Далее, поместив среду в колбу и непрерывно помешивая стеклянной палочкой,
всыпали 15 - 20 г агара. Среду снова нагрели до растворения агара (температура
его плавления — 100°С, затвердевания — 40°С), затем установили
слабощелочную реакцию среды с помощью 20%-го раствора карбоната кальция
(II) и через воронку разлили по чашкам Петри слоем 0,5 – 0,7 мм и
промаркировали (номер чашки и номер повторности).
Чашки со средой простерилизовали в автоклаве при 121°С в течение 20
мин.[15]
Среда Эндо
Принцип действия питательной среды обосновывается обесцвечиванием
фуксина сульфитом натрия. Энтеробактерии, которые сбраживают лактозу, в
процессе брожения выделяют муравьиную кислоту и
образуется свободный
фуксин. [22] В результате колонии энтеробактерий окрашиваются в малиновокрасный цвет с металлическим блеском или без него. Колонии бактерий,
которые не сбраживают лактозу, имеют белый или светло-розовый цвет (цвет
питательной среды) [7].
Среда
Эндо -
среда
синтетическая,
твердая,
следующий состав, г:
1.
пептон – 10,
2.
лактоза – 10,
3.
K2HPO4 – 3,5, NaHSO3 – 2,5,
4.
агар-агар – 15,0,
5.
вода дистиллированная – 1000 мл.
элективная.
Имеет
5 г среды Эндо растворяют, подогревая колбу с 100 мл дистиллированной
воды. Далее при постоянном помешивании кипятят 2-3 минуты, после чего
разливают в чашки (см. Приложение 2, рисунок1).
Среда Кесслера-ГРМ
Среда Кесслера - питательная среда предназначена для обнаружения
бактерий группы кишечной палочки при санитарном обследовании объектов
внешней среды. [12]
Совокупность компонентов, которые входят в состав среды, обеспечивает
питательные потребности для роста и обнаружения бактерий группы кишечной
палочки по признаку ферментации лактозы и ингибиции отдельных видов
микроорганизмов.
Среда Кесслера имеет следующий состав:
1.
Пептон
2.
Панкреатический
3.
Лактоза
10,0
4.
Желчь очищенная сухая
3,0
5.
Кристаллический фиолетовый
0,04
6.
Натрий карбонат
0,02±0,05
7,0
гидролизат
рыбной
3,0
муки
рН готовой среды
7,5±0,2
23,0 г препарата с помощтю стеклянной палочки размешивали в 1 л
дистиллированной
воды.
После
кипячения
среды
в
течение
4
мин
профильтровали через бумажный фильтр. Далее разлили по 5 мл в стерильные
пробирки с поплавками и стерилизовали автоклавированием при температуре
112 °С в течение 20 мин.
Готовая среда приобрела фиолетовый цвет.
Физиологический раствор
Физиологический раствор представляет собой водный раствор соли –
хлорида натрия. Для его приготовления используют дистиллированную воду и
поваренную соль – NaCl.
В колбе смешивают 9 г соли в 1 литре дистиллированной воды, хорошо
перемешивая стеклянной палочкой. Таким образом, получается 0,9 %
физиологический раствор. [13]
2.3
Приготовление препарата методом смыва
Смывы с крупных плоских поверхностей (столы, подоконники, полы и
т.д.) производят перед началом рабочего дня, либо после влажной уборки в
санитарные дни. Общая площадь поверхности крупных объектов, с которой
берется смыв - 100 см2.
Для ограничения поверхности используют металлический
трафарет
площадью 25 см2. Для того, чтобы взять смывы с площади в 100 см2, его
накладывают 4 раза в разных местах поверхности контролируемого объекта.
Трафареты перед отбором смывов должны быть простерилизованы.
Стерильные ватные тампоны на стеклянных, металлических или
деревянных палочках, вмонтированных в пробирки с ватными пробками,
заготавливают заранее в лаборатории. В день взятия смывов в каждую
пробирку с тампоном наливают по 5 мл стерильного 0,1% водного раствора
пептона, либо же используют физиологический раствор. Делать это нужно
таким образом, чтобы ватный тампон не касался жидкости. Пробирки с
физраствором, также как и ватные тампоны на палочках заранее должны быть
простерилизованы.
Непосредственно перед взятием смыва тампон многократно увлажняют
средой путем его опускания в физраствор или наклонением пробирки. Трафарет
плотно прижимают к исследуемой поверхности и протирают в нем участок в
этим тампоном. Далее тампон погружают в заранее пронумерованную
пробирку
с
физраствором.
проделывают то же самое.
С
оставшимися
участками
поверхности
После взятия смывов со всех четырех площадок осуществляется поставка
исследуемых
материалов
в
лабораторию
с
соответствующим
сопроводительным документом [16]. Время их доставки не должно превышать
2-х часов, так как затягивание этого срока отражается на достоверности
результатов анализа.
В
лаборатории
пробирки
с
исследуемым
материалом
хорошо
встряхивают для большего выделения микроорганизмов в среду.
Далее осуществляют посевы материала на соответствующие среды:
1.
на общую обсемененность смыва,
2.
на присутствие санитарно-показательных (БГКП, энтерококков)
микробов,
3.
на присутствие патогенных (сальмонелл, синегнойной палочки,
протея) микроорганизмов.
Для достоверных результатов исследования необходимо осуществить
стерилизацию всей посуды сухим жаром (в сушильном шкафу) при
температуре 165 градусов по Цельсию в течение 1 часа. Перед стерилизацией
посуда должна быть вымытой и сухой. Ее заворачивают в бумагу, при этом
пробирки и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками.
2.3.1 Методика посева смывов на
бактерии группы кишечных палочек (БГКП)
Приборы и посуда: термостат, сушильный шкаф, чашки Петри, ватные
тампоны, стеклянная палочка, мерные пальчики, петли.
Материалы и реактивы: среда Кесслера (или среда Кода), среда Эндо
При плановых санитарно-гигиенических обследованиях для выявления
БГКП производят посевы смывов на среды Кесслера с лактозой или Кода.
При посеве смывной жидкости на среду в пять пробирок вносят по 1 см3
смывной жидкости. Посевы на средах Кесслера или Кода инкубируют при
37°С, через 18—24 часа со среды Кесслера производят высев на плотную
дифференциальную среду Эндо, со среды Кода высев производят в случае
изменения окраски среды или ее помутнения.
Пересев на среду Эндо осуществляется следующим образом.
В заранее подготовленные и пронумерованные чашки Петри заливается
среда Эндо, чашки немного подсушивают. (см. Приложение 2, рисунок 2).
Далее на поверхности чашек с помощью петли делается посев штрихом из
пробирок со смывной жидкостью со средой Кесслера (метод поверхностного
посева).
Посевы помещают в термостат при температуре 37 °С на 24 часа, после
чего просматривают. Из колоний, подозрительных или типичных для БГКП,
готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Обнаружение
грамотри-цательных палочек указывает на наличие БГКП.
2.3.2 Посев смыва на определение общего числа микробов.
Приборы и посуда: термостат, сушильный шкаф, чашки Петри, ватные
тампоны, мерные пальчики.
Материалы и реактивы: мясо-пептонный агар (МПА), изотонический
раствор хлорида натрия.
Порядок выполнения работы
Материалом для посева при исследовании смывов является смывная
жидкость, используемая для увлажнения тампона.
По 1 мл смывной жидкости поместить в заранее простерилизованные и
пронумерованные чашки Петри по 1 мл, залить расплавленным и остуженным
до 45 °С мясо-пептонным агаром (метод глубинного посева).
Чашки Петри поместить в термостат, где поддерживается температура 37
°С на 48 ч. По истечении этого времени подсчитать количество выросших
колоний.
2. Выявление коагулазоположительных стафилококков.
Для этого производят посев непосредственно тампоном на чашки с
молочно-солевым агаром. Если смывы делают марлевыми салфетками, то посев
на плотные питательные среды удобнее осуществлять нанесением на
поверхность среды в количестве 0,1 мл смывной жидкости, которую затем
тщательно растирают шпателем по всей поверхности агара[11].
В качестве среды накопления для стафилококков применяют питательный
бульон с 6,5 ,%. хлорида натрия, разлитый по 5 мл в пробирки, куда помещают
оставшуюся смывную жидкость.
Бактерии
группы
кишечной
палочки
и
коагулазоположительных
стафилококков должны отсутствовать в смывах с контролируемых объектов.
2.4
Подсчет выросших колоний
После инкубации засеянные среды извлекают из термостата и в них
подсчитывают число колоний
Микробное число — санитарно-микробиологический показатель общего
уровня микробного обсеменения объектов окружающей среды— почвы, воды,
воздуха, пищевых продуктов, окружающих предметов.
Для определения микробного числа чашку Петри кладут вверх дном на
темный лист бумаги. При небольшом росте колоний их подсчитывают
невооруженным глазом на всей площади чашки. Сначала в чашках учитывают
колонии в 100 полях зрения, далее определяют среднее арифметическое
значение для 1 поля. Для определения числа колоний на всей чашке среднее
арифметическое умножают на коэффициент (К), равный отношению площади
чашки Петри (Р) к площади поля зрения (p)
К=
Диаметр чашки Петри измеряют линейкой, а площадь поля зрения – с
помощью микроскопа, используя при этом миллиметровую бумагу (для малых
увеличений) или с помощью объективного микрометра ( для больших
увеличений).
Подсчитанные колонии отмечают на чашке восковым карандашом.
Если рост микробов обильный, чашку делят на секторы (2, 4, 8, 16) и
подсчитывают с помощью лупы в каждом секторе, затем полученные числа
складывают.
При равномерном распределении колоний можно их подсчитывать на
половине или четверти площади чашки. Если колоний выросло много (более
600), лучше пользоваться камерой Вольфгюгеля для подсчета колоний. Камера
Вольфгюгеля
состоит из стеклянной пластинки, которая разделена на 144
квадрата площадью 1 см2 каждый. Чашку, в которой необходимо сделать
подсчет,
кладут под стеклянную пластинку и считают колонии при ярком
боковом освещении. При сравнительно равномерном распределении колоний
их подсчитывают в 10 квадратах, расположенных в разных участках чашки.
Вычисление количества микробных тел в 1 мл или 1 г исследуемого
материала проводят по формуле:
C=
, где
С — искомое количество микробных тел в 1 мл;
N — количество подсчитанных колоний;
V — объем раствора, взятого для посева;
S — площадь чашки, на которой произвёден подсчет колоний (3,14*52
=78,5 см2)
Вычисление количества микробных тел в 1 мл или 1 г исследуемого
материала при использовании камерой для подсчета колоний проводят
следующим образом: количество колоний, подсчитанных в 10 квадратах,
складывают и определяют число микробных тел по формуле:
,где
πR2 — площадь чашки;
n — количество сосчитанных квадратов,
D — степень разведения исследуемого материала;
V — объем раствора, взятого для посева;
N — подсчитанное количество колоний
Далее по такому же принципу подсчитывают число пробных тел для
данной пробы и по остальным трем чашкам. Результат подсчета колоний
записывают в журнал и окончательно определяют микробное количество по
среднему значению.
2.5
Метод окраски клеток микроорганизмов по Граму
Окраска по Граму включает ряд последовательных действий.
1.
В начале на обезжиренное с помощью спирта наносится капля
дистилированной воды. С помощью прокаленной в пламени спиртовки
бактериологической
петли
производится
перенос
микроорганизмов
с
питательной среды в эту каплю. Далее полученную смесь необходимо
размазать по стеклу тонким слоем, чтобы мазки не образовывали скоплений.
2.
После высыхания мазков их фиксируют над пламенем горелки.
Держателем закрепляют предметное стекло мазком кверху и проводят
прогревание в пламени спиртовки (фиксируют). (см. Приложения 2, рисунок 3)
Фиксация позволяет достичь сразу несколько целей: убить организмы и таким
образом сделать дальнейшую работу с ними безопасной, обеспечь прилипание
клеток к стеклу и сделать мазок более восприимчивым к окраске. Во избежание
растрескивания стекла необходимо равномерное его прогревание со всех
сторон. После полного высыхания мазка необходимо дать пару минут для
остывания стекла. (см. Приложения, рис. 4)
3.
В течение одной минуты окрашивают феноловым раствором
генциана фиолетового, при этом стекло держат в наклонном положении. После
этого краситель сливают и, не промывая препарат водой, наносят раствор
Люголя на 1-2 минуты до полного почернения мазка.
4.
Затем препарат, не промывая водой, обрабатывается 96%-ным
спиртом, в течение 15-20 с. Промыв водой, препарат окрашивают в течение 1
мин фуксином Пфейфера. Грамположительные микроорганизмы приобретают
темно-фиолетовую окраску, а грамотрицательные – розово-красную.
2.6
Идентификация микроорганизмов
методом описания их культуральных признаков.
Характер роста культур на плотных питательных средах является важным
систематическим признаком для микроорганизмов.[6][24]
На плотных средах различают следующие культуральные признаки:
1.
форма колоний (может быть круглой, круглой с фестонатым краем,
круглой с валиком по краю, ризоидные колонии, круглой с ризоидным краем,
амебовидной, нитевидной формы, складчатой, неправильной, концентрической,
и сложной формы),
2.
профиль
колоний
(может
быть
изогнутым,
кратеровидным,
бугристым, врастающим в агар, плоским, выпуклым, каплевидным и
конусовидным),
3.
край
колоний
(гладкий,
волнистый,
зубчатый,
лопастной,
реснитчатый, ворсистый, ветвистый)
4.
размеры (выделяют колонии крупного размера – от 1 см в диаметре,
среднего – от 1 мм до 1 см и точечного – не превышает 1 мм)
5.
поверхность (может быть гладкой, морщинистой, шероховатой,
складчатой, бугристой),
6.
оптические свойства поверхности (прозрачная, просвечивающая,
непрозрачная, блестящая, матовая, флуоресцирующая),
7.
цвет колоний (может быть абсолютно разным: грязно-белым,
белым, желтым, оранжевым, сиреневым, красным, синим или черным),
8.
структура колоний
Структуру колоний устанавливают в проходящем свете при слабом
увеличении
микроскопа.
Она
может
быть
однородной,
мелко-,
крупнозернистой, радиально или концентрически исчерченной, мучнистой,
пленчатой, врастающей в агар или легко снимающейся иглой с агара)
9.
консистенция
Консистенция колоний
микробиологической
петлей.
исследуется
Встречаются
посредством
прикосновения
маслянистые,
тестообразные,
слизистые, сухие, плотные и сметанообразные)
На основе выявления вышеперечисленных признаков и дальнейшего
микробиологического анализа определяют положение микроорганизмов в
систематике.
E.coli
1. Форма колоний – образуют круглые колонии
2. Профиль колоний – на ГРМ-бульоне - выпуклый
3. Край - ровный
4. Размеры – средние (2-4 мм)
5. Поверхность – образует гладкие колонии
6. Оптические свойства поверхности – блестящая, мутная
7. Цвет колоний – на среде Эндо E.coli образует малиново-красных
колонии с металлическим блеском или без него, на среде из ГРМ-бульона –
полупрозрачные колонии
8. Структура колоний – легко снимающиеся с агара иглой
9. Консистенция колоний – слизистая
Clostridium perfindens
1. Форма колоний – круглая или неправильная,
2. Профиль колоний – бугристый
3. Край – гладкий ровный или неровный шероховатый
4. Размеры – средние колонии (1-2 мм)
5. Поверхность – гладкая
6. Оптические свойства поверхности – непрозрачная
7. Цвет колоний – прозрачные в начале роста, потом становятся
сероватыми. Под воздействием кислорода зеленеют, начиная с краев.
8. Структура колоний – растут в толще агара
9. Консистенция колоний - слизистая
Enterococcus
1. Форма колоний - круглая
2. Профиль колоний – каплевидный
3. Край - гладкий
4. Размеры – мелкие
5. Поверхность – гладкая
6. Оптические свойства поверхности – блестящая
7. Цвет колоний – прозрачные, голубоватые
8. Структура колоний – мелкозернистая
9. Консистенция колоний - слизистая
Bacillus
1. Форма колоний - неправильная
2. Профиль колоний – плоский
3. Край – неровный волнистый
4. Размеры – крупные
5. Поверхность – гладкая
6. Оптические свойства поверхности – мутная
7. Цвет колоний – серовато-белые колонии
8. Структура колоний – легко снимающаяся с агара
9. Консистенция колоний – сухие колонии
Proteus (P.vulgaris,P.mirabilis)
1. Форма колоний - неправильная
2. Профиль колоний – плоский, выпуклый
3. Край – ровный
4. Размеры – мелкие (1мм)
5. Поверхность – гладкая
6. Оптические свойства поверхности – мутная
7. Цвет колоний – голубовато-серые
колонии (на ГРМ-среде),
прозрачные (на среде Эндо)
8. Структура колоний – однородная, мелкозернистая (сплошной налет)
9. Консистенция колоний – сухие колонии
Micrococcus
1. Форма колоний - круглая
2. Профиль колоний – выпуклый
3. Край – ровный
4. Размеры – средние, мелкие
5. Поверхность – гладкая
6. Оптические свойства поверхности – блестящая
7. Цвет колоний – белый, желтый, красный
8. Структура колоний – легко снимающаяся с агара
9. Консистенция колоний – слизистая колонии
Salmonella
1. Форма колоний - круглая
2. Профиль колоний – выпуклый
3. Край – ровный (для сред Эндо, ЭМС, Плоскирева)
4. Размеры – мелкие, средние
5. Поверхность – гладкая
6. Оптические свойства поверхности – блестящая на МПА, мутная – на
МПБ
7. Цвет колоний – полупрозрачные (для МПБ) или бледно-розовые (для
среды Эндо), на висмут-сульфитном агаре - черные или коричневые колонии с
металлическим блеском
8. Структура колоний – легко снимающаяся с агара
9. Консистенция колоний – сухие колонии
Mycobacterium tuberculosis
1. Форма колоний – сложная
2. Профиль колоний – бугристый
3. Край – волнистый
4. Размеры – мелкие, средние и крупные
5. Поверхность – морщинистая
6. Оптические свойства поверхности – непрозрачная
7. Цвет колоний –белый, кремовый, желтый, оранжевый
8. Структура колоний – однородная
9. Консистенция колоний – сухие колонии
Streptococcus pneumoniae
1. Форма колоний – круглая
2. Профиль колоний – выпуклый, иногда плоский
3. Край – ровный
4. Размеры – мелкие
5. Поверхность – гладкая
6. Оптические свойства поверхности – непрозрачная
7. Цвет колоний – на агаре с кровью – зеленовато-серые колонии, на агаре
с сывороткой – прозрачные колонии.
8. Структура колоний – мелко-, крупнозернистая
9. Консистенция колоний – сухие колонии
Staphylococcus aureus
1. Форма колоний – округлая
2. Профиль колоний – выпуклый
3. Край – ровный
4. Размеры – средние и мелкие
5. Поверхность – гладкая
6. Оптические свойства поверхности – непрозрачная
7. Цвет колоний – белые, желтые, золотистые
8. Структура колоний – гомогенная или мелкозернистая
9. Консистенция колоний – маслянистая
Neisseria meningitidis
1. Форма колоний – круглая
2. Профиль колоний – выпуклый
3. Край – ровный
4. Размеры – мелкие
5. Поверхность – блестящая
6. Оптические свойства поверхности – полупрозрачная
7. Цвет колоний – сероватый (на кровяном агаре)
8. Структура колоний – легко снимающиеся с агара
9. Консистенция колоний – слизистая
Corynebacterium diphtheriae
1. Форма колоний – круглая
2. Профиль колоний – выпуклый (на элективных средах)
3. Край – ровный
4. Размеры – мелкие
5. Поверхность – гладкая (для элект.сред)
6. Оптические свойства поверхности – блестящая
7. Цвет колоний – желтовато-кремовые – на элективных средах, черные
или черно-серые – на теллуритовых средах
8. Структура колоний – мелкозернистая (на элективных средах)
9. Консистенция колоний – маслянистая
Микробиологический анализ окружающей среды
в закрытых помещениях университета
Глава 3. Культуральные признаки
Опираясь на знания культуральных признаков СПМ, проводят описание
выросших на средах колоний микробов. Далее производят сравнивание их с
характерными для СПМ культуральными признаками. На основе этого делают
предварительный вывод об отношении полученных методом культивирования
бактерий к каким-либо санитарно-показательным микроорганизмам.
Краткие
сравнительные
описания
культуральных
признаков
микроорганизмов приведены в виде таблиц в Приложениях (см. Приложение 1,
таблицы 1,2,3,4,5,6)
3.1
Описание культуральных признаков микроорганизмов,
выращенных на среде из ГРМ-бульона
Описание признаков проводилось спустя 72 часа после начала
культивирования (см. Приложения 2, рисунок 5)
1.
Столовая главного корпуса ОГУ им. И.С.Тургенева
Смывы с пола (описание признаков проводилось спустя 72 часа после
начала культивирования)
1 чашка – колонии имели неправильную форму и профиль, волнистый
край. Размеры – средние, поверхность гладкая. По оптическим свойствам
поверхности колонии непрозрачные, а по цвету – грязно-белые. Консистенция
слизистая, по структуре – легко снимаемая с агара
2 чашка – колонии неправильной формы и с изогнутым краем. Профиль
неправильный, а размеры от средних до крупных (0,5-1,1 см). Поверхность
колоний гладкая, по оптическим свойствам непрозрачная. Цвет – грязно-белый.
Колонии по консистенции слизистые, а по структуре – легко снимается с агара
чашка – неправильная форма и профиль колоний, край волнистый.
3
Размеры крупные (больше 1 см). Поверхность гладкая, а по ее оптическим
свойствам колонии неправильные. Цвет – грязно-белый, структура – легко
снимаемые с агара. Консистенция – слизистая.
чашка - колонии неправильной формы, профиль неправильный.
4
Край изогнутый, размеры – от средних до крупных (0,7-1,1 см). Поверхность
гладкая, по оптическим свойствам – непрозрачная. Цвет колоний – грязнобелый. Колонии легко снимаются с агара и имеют слизистую консистенцию.
чашка – колонии имеют волнистый край и неправильную форму.
5
Размеры средние, профиль неправильный. Поверхность гладкая, по оптическим
свойствам
непрозрачная.
Консистенция
слизистая,
структура
–
легко
снимаемые с агара.
Смывы со стен
Колонии во всех пяти чашках имели неправильный профиль и форму,
гладкую и непрозрачную поверхность. Цвет колоний – грязно белый, по
структуре – колонии легко снимаемы с агара.
Но отличились колонии в чашках по следующим признакам:
1 чашка – колонии имели волнистый край и крупные (1,2 см) размеры,
консистенция поверхности – слизистая
2
чашка – наблюдали волнистый край колоний, крупные размеры,
слизистая консистенция
3 чашка – изогнутый край колоний, средние размеры и слизистая
консистенция поверхности
4 чашка – волнистый край, крупные (более 1 см) размеры, слизистая, а
местами матовая консистенция поверхности
5
чашка – волнистый край, размеры колоний – от средних до
крупных, консистенция – слизистая
Смывы со столов
1 чашка – колонии с ровным краем, выпуклым профилем. Размеры
мелкие, цвет колоний – грязно-белый, желтоватый. Имели слизистую
консистенцию, легко снимаемые с агара.. Поверхность
– блестящая,
непрозрачная. Количество колоний 110.
2 чашка – Круглые колонии средних и мелких размеров. Края ровные,
профиль выпуклый, колонии полупрозрачные с блестящей поверхность.
Консистенция мелкозернистая, легко снимаемые с агара. Количество колоний 93
3 чашка – колонии с ровными и неровными краями, выпуклым и плоским
профилем и круглой, либо неправильной формы. По цвету - полупрозрачные и
грязно-белые. Поверхность мутная. Слизистая консистенция и легко снимаются
с агара, некоторые колонии – с сухой консистенцией. Количество колоний 28.
4 чашка – круглые колонии с бугристым, а некоторые с выпуклым
профилем, гладким ровным краем и средних и мелких размеров. Поверхность
гладкая, непрозрачная, местами – блестящая. Колонии имели сероватый
оттенок, часть росла в толще агара, другая часть была легко снимаемой с агара.
Консистенция колоний слизистая, их количество – 25.
5
чашка – колонии средних и мелких размеров,
круглой формы,
выпуклым профилем. Край ровный. Оттенок колоний от полупрозрачного до
грязно-белого, желтоватого. Количество колоний -
52. Все колонии легко
снимаемые с агара со слизистой консистенцией и блестящей поверхностью.
2.
Аудитория
Смывы со столов
1 чашка - наблюдали колонии неправильной формы, волнистым краем и
плоским профилем. Колонии имели крупные размеры (1,4 см) и сероватый
цвет.
По консистенции сухие, легко снимающиеся с агара. Поверхность
гладкая, непрозрачная. Количество колоний - 31
2 чашка – круглые и неправильные колонии с выпуклым профилем. Края
колоний волнистые и ровные. Размеры колоний – средние и крупные.
Поверхность гладкая мутная и гладкая и блестящая. Цвет – серовато-белый и
полупрозрачный. По консистенции колонии сухие и слизистые, по структуре –
легко снимающиеся с агара. Количество колоний - 51
3 чашка –
колонии неправильной
и круглой формы с выпуклым
профилем. Колонии средних и крупных размеров, их количество – 36. Края
ровные, волнистые. Поверхность – гладкая, по оптическим свойствам – мутная
и блестящая. Цвет колоний – серовато-белый и полупрозрачный. Сухие и
слизистые, легко снимающиеся с агара.
3
и 5 чашка – колонии имели круглую и неправильную форму.
Профиль – выпуклый, каплевидный. Края – волнистые, ровные. Размеры
колоний разнообразны: от 1 мм – мелкие до 1,4 см – крупных, их число – 55.
Поверхность гладкая, по оптическим свойствам – блестящая, мутная. Цвет –
полупрозрачный, беловатый. Структура колоний – мелкозернистая, легко
снимающиеся с агара. Консистенция – сухая и слизистая.
Смывы со стен
1 чашка – круглые колонии мелкого диаметра с ровным краем и
каплевидным профилем. Цвет – грязно-белый, желтоватый. Слизистая
консистенция, блестящая непрозрачная поверхность. Структура – легко
снимаемые с агара. Количество колоний - 193
2 чашка – колонии мелких и средних размеров круглой и неправильной
формы. Края волнистые, реже – ровные. Профиль плоский, встречались
колонии и с выпуклым профилем. Цвет колоний от полупрозрачного до
сероватого и желтоватого. Консистенция слизистая, поверхность непрозрачная.
По структуре в основном легко снимаемые с агара, некоторые образовывали
мелкозернистый налет. Число колоний - 218
3 чашка – Колонии с ровным краем, каплевидным профилем и округлой
формы. Колонии средних и мелких размеров, желтовато-белого цвета.
Конститенция слизистая, легко снимаемые с агара. Поверхность непрозрачная.
Число колоний - 184
4
и 5 чашка – Колонии различных размеров: мелких и средних и
крупных. Форма колоний в основном неправильная, редко – округлая. Края
волнистые, редко ровные. Профиль плоский, иногда выпуклый. Цвет от
полупрозрачного до сероватого и беловато-желтого. Консистенция сухая и
слизистая. Некоторые колонии образуют сплошной мелкозернистый налет,
некоторые растут в толще агара, немногие – легко снимаемые с агара.
Количество колоний – 96.
Смывы с пола
1 чашка – Колонии средних и мелких размеров с выпуклым и плоским
профилем, неровными краями. Цвет колоний полупрозрачный и сероватый.
Консистенция сухая, иногда слизистая. Поверхность – непрозрачная, чаще
матовая, в некоторых местах – блестящая. Колонии легко снимаются с агара.
Количество колоний - 67
2 чашка –
колонии неправильной формы, с плоским профилем и
неровным волнистым, реже – ровным краем. Колонии мелких и средних
размеров. Поверхность гладкая и мутная, колонии сероватые и голубоватые.
Колонии легкоснимаемые с агара. По консистенции – сухие колонии.
Количество – 37.
3, 4 и 5 чашки – колонии средних размеров, с выпуклым и плоским
профилем, волнистыми краями. Цвет колоний – сероватый. Поверхность –
непрозрачная, матовая, иногда блестящая. Колонии легко снимаются с агара.
Консистенция сухая, иногда слизистая. Число колоний – 46
3. Коридор
Смывы с подоконников
Во
всех
чашках
наблюдались
колонии
неправильной
формы
с
волнистыми краями и крупных размеров. Поверхность – гладкая и мутная, цвет
серовато-белый. Колонии сухой консистенции и легко снимались с агара.
Во второй, третьей и пятой чашках, помимо вышесказанных признаков,
наблюдались отдельные колонии слизистой консистенции с ровными краями и
круглой формой. Цвет – полупрозрачный, легко снимаются с агара. В первой
чашке 38 колоний, во второй - 49, в третьей -42, в четвертой – 28 и в пятой 44.
Смывы со стен
1 чашка – колонии от мелких до средних, с плоским профилем,
волнистыми, иногда ровными краями. Консистенция сухая и слизистая.
Колонии сероватого цвета, реже – прозрачные и полупрозрачные. Число
колоний - 43
2 чашка – колонии полупрозрачного цвета, среднего диаметра с
бугристым и выпуклым профилем. Края гладкие и ровные. Поверхность
гладкая, непрозрачная. Колонии растут в толще агара, некоторые легко с него
снимаются. Консистенция слизистая. Количество колоний - 56.
3 и 4 чашка – колонии средних и крупных
размеров с плоским
профилем, волнистым краем и неправильной формы. Цвет – серовато-белый.
Консистенция – сухая, легко снимаются с агара. Число колоний -41
5
чашка – мелкие колонии бело-желтого цвета, с выпуклым профилем
и ровными краями. Форма колоний – круглая, консистенция слизистая,
поверхность - блестящая, непрозрачная, гладкая. Легко снимаются с агара.
Количество колоний - 68
Смывы с пола
1 чашка – круглые колонии различных диаметров, края волнистые и
ровные. Профиль изогнутый, выпуклый. Цвет колоний – полупрозрачный,
сероватый, частично серовато-голубой. Количество колоний - 57. Поверхность
блестящая, не прозрачная. Консистенция слизистая, колонии легко снимаются
с агара.
2 и 3 чашка –
неправильные плоские колонии с ровными краями и
мелких размеров. Поверхность колоний гладкая и мутная. Консистенция –
сухие колонии. Цвет – сероватый. Количество колоний – 67. На поверхности
образуют сплошной налет.
4
чашка – неправильные колонии с плоским профилем средних и
мелких размеров. Поверхность гладкая и мутная, колонии сероватого цвета,
растут в толще агара. Имею слизистую и сухую консистенцию. Количество
колоний – 54.
5
чашка –
круглые и неправильные колонии с ровными краями.
Имеют слизистую и сухую консистенцию. Цвет колоний – полупрозрачный.
Некоторые легко снимаются с агара, в основном – образуют сплошной налет.
Количество колоний - 59.
Описание культуральных признаков микроорганизмов,
3.2
выращенных на среде Эндо
Описание всех признаков проводилось через 24 ч после начала
культивирования.
1.
Столовая главного корпуса ОГУ им. И.С.Тургенева
Смывы со столов (описание признаков проводилось через 24 ч после
начала культивирования)
1 чашка - колонии имели неправильную форму и изогнутый профиль,
волнистый край и неправильную форму. По размеру колонии – от мелких (0,3
см) до крупных (1,4 см), по цвету – золотистые. Количество колоний – 22.
Консистенция маслянистая, поверхность блестящая
2 чашка – колонии мелкие, средние и крупные золотисто-зеленоватого
цвета. Форма колоний – неправильная, профиль изогнутый, край волнистый.
Колонии имели маслянистую консистенцию и блестящую поверхность.
Количество колоний – 17.
3 чашка – колонии мелкие и средние, неправильной формы золотистого
цвета. Количество колоний – 15. Профиль – изогнутый, край волнистый.
Отмечалась маслянистая консистенция, мелкозернистая поверхность.
4 чашка – колонии неправильной формы от средних до крупных.
Количество колоний – 4. Профиль изогнутый, край волнистый, слизистая
консистенция (см. Приложения 2, рисунок 6).
5 чашка – мелкие колонии грязно-белого цвета. Поверхность прозрачная,
по консистенции – легко снимаемые с агара. Изогнутый профиль, волнистый
край, колонии неправильной формы. Их количество – 3.
Смывы с пола
1
и 2 чашки – колонии мелких размеров с выпуклым профилем,
ровным краем и круглой формы. Консистенция – слизистая, легко снимаются с
агара. Цвет колоний – бледно розовый. Поверхность гладкая, местами с
металлическим блеском. Количество колоний – 64.
5
чашка – колонии неправильной формы, неровным, волнистым
краем, сероватого цвета. Размеры средние и мелкие. Поверхность сухая.
Консистенция – врастающая в агар.
3 и 4 чашка – колонии сероватого цвета, неправильной формы неровные
края. Размер - мелкий. Консистенция – легко снимающаяся с агара.
Смывы со стен
1 чашка – колонии светло-розового и полупрозрачного цвета, средних
размеров, круглая или неправильная форма, плоский или изогнутый профиль и
ровные, местами волнистые края. Консистенция слизистая. Легко снимаются с
агара. Поверхность блестящая.
2, 3 и 4 чашка – колонии сероватого цвета, неправильной формы с
волнистым краем. Профиль изогнутый, размеры мелкие. Поверхность – сухая,
легко врастающая в агар. Структура – мелкозернистая.
5 чашка – мелкие колонии, прозрачные, с ровным краем, выпуклым
профилем.
Поверхность
–
блестящая.
Консистенция
слизистая,
легко
снимаются с агара.
2. Аудитория в главном корпусе ОГУ им.Тургенева
Смывы с пола
1 чашка – наблюдали рост 5 колоний круглой формы с гладким краем и
каплевидным профилем. Поверхность – гладкая и блестящая, колонии
прозрачные и мелкие. Слизистая консистенция и мелкозернистая структура.
2 чашка – Колонии средних размеров с выпуклым, а некоторые с плоским
профилем. Край колоний неровный и волнистый, реже – ровный, поверхность
мутная и блестящая, цвет колоний беловатый, по консистенции в основном
сукие, некоторые колонии слизистые. Легко снимаемые с агара. Количество
колоний 3
3 и 4 чашки – Колонии имели круглую форму, ровные края и выпуклый
профиль. Поверхность – гладкая, блестящая. Размеры мелкие. Цвет – грязнобелый, по консистенции слизистые, легко снимаемые с агара. Колоний в
третьей чашке – 3, в четвертой – 7.
5 чашка – колонии неправильной формы с волнистым краем. Профиль –
бугристый. Размеры средние и крупные. Поверхность – бугристая, по
оптическим свойствам блестящая. Цвет колоний белый, структура мучнистая,
консистенция слизистая и плотная. Количество колоний - 15
Смывы со столов
1 чашка - крупные колонии слегка беловатого цвета неправильной
формы, с волнистым краем и изогнутым профилем. Количество колоний – 3.
Отмечалась блестящая непрозрачная поверхность и слизистая консистенция
2 чашка – крупные колонии неправильной формы беловато-золотистого
цвета. Количество колоний – 3. Профиль изогнутый, край волнистый.
Блестящая непрозрачная поверхность, маслянистая консистенция.
3
чашка – мелкие колонии беловатого цвета. Количество колоний –
30. Имели неправильную форму, изогнутый профиль и волнистый край.
Блестящая мелкозернистая поверхность, слизистая консистенция
4
чашка – мелкие и средние колонии золотистого цвета. Их
количество – 6. Имели неправильную форму, изогнутый профиль, зубчатый и
волнистые
края.
Маслянистая
консистенция.
Поверхность
гладкая
непрозрачная
5
чашка – отмечали мелкие колонии прозрачного цвета с изогнутым
профилем и волнистым краем. Форма колоний неправильная, их количество –
5. Поверхность блестящая, структура мелкозернистая.
Смывы со стен
1 чашка –Колонии
имели круглую форму, ровные края и выпуклый
профиль. Поверхность – гладкая, блестящая. Размеры мелкие. Цвет – грязно-
белый, по консистенции слизистые, легко снимаемые с агара. Количество
колоний 7
2 чашка – Наблюдали рост одной крупной колонии. колонии среднего
диаметра, неправильной формы, с изогнутым профилем. Цвет – сероватый.
Поверхность
–
мутная,
непрозрачная.
Консистенция
сухая,
структура
мелкозернистая.
3, 4, 5 чашки – колонии круглой формы, с ровными краями и выпуклым
профилем. Размеры – мелкие и средние. Цвет – светло-розовый. Поверхность –
гладкая, блестящая. Структура – однородная, легко снимаются с агара.
6
колоний средних и крупных размеров – в третьей чашке, 10 колоний в пятой
чашке. ( см. Приложения 2, рисунок 7)
3.
Коридор главного корпуса ОГУ им.Тургенева
Смывы со стен
1 чашка – колонии мелких и средних размеров, с волнистыми и ровными
краями, круглой и неправильной формы. Профиль выпуклый. Цвет – бледнорозовый. Консистенция слизистая, поверхность – гладкая, блестящая. Легко
снимаются с агара. Количество колоний – 43.
2,3, 4 и 5 чашки - мелкие сероватые колонии неправильной и круглой
формы. Края волнистые,
профиль изогнутый, плоский. Поверхность –
непрозрачная. Консистенция сухая, местами – слизистая,
структура –
врастающие в агар, мелкозернистая. Количество колоний во 2 чашке – 35, в
третьей – 44, в четвертой – 22 и в пятой – 29.
Смывы с пола
1,3,4,5
неровными,
чашки – колонии среднего размера, неправильной формы,
волнистыми
краями.
Консистенция
сухая,
структура
крупнозернистая. Количество колоний в 1 чашке – 14, во второй – 23, в третьей,
четвертой и петой – 22, 43, 34. (см. Приложения 2, рисунок 8)
2
чашка – колонии мелких размеров, слизистой консистенции,
розового цвета. Форма круглая, края ровные, профиль выпуклый. Поверхность
гладкая, блестящая. Легко снимаются с агара. Количество колоний – 36.
Смывы с подоконников
1 чашка – колонии круглой формы, с ровными краями и выпуклым
профилем. Размеры – мелкие и средние. Цвет – светло-розовый, сероватый.
Поверхность – гладкая, блестящая. Структура – однородная, легко снимаются с
агара. Количество – 53.
2, 3 и 5 чашка – колонии среднего диаметра, неправильной формы, с
изогнутым профилем. Цвет – сероватый. Поверхность – мутная, непрозрачная.
Консистенция сухая, структура мелкозернистая. (см. Приложения 2, рисунок 9)
4 чашка – круглые колонии с выпуклым профилем и ровными краями.
Поверхность блестящая и гладкая. Цвет – беловатый. Слизистая консистенция,
легко снимаемые с агара.
Глава 4. Санитарно-бактериологический анализ смывов
Нами исследованы поверхности помещений столов, подоконников, полов
и стен в течение осень-зима 2017 года в помещениях главного корпуса ФГБОУ
ВО «Орловский государственный университет имени И.С. Тургенева» (ОГУ),
аудитория, столовая и коридор (см. Приложения 2, рисунок 10). Из аудитории
на анализ поверхностей на наличие патогенной и условно-патогенной
микрофлоры были взяты следующие поверхности – парты, стены и полы. Из
столовой мы взяли смывы с полов, с обеденных столов и со стен. Из коридора
предметом наших исследований стали подоконники, стены и пол.
По окончанию проведения санитарно-бактериологического анализа нами
были получены следующие результаты (см. Приложения 1, таблица 7). Исходя
из данных таблицы 7, видно, что самыми обсемененными поверхностями в вузе
оказались поверхности в столовой (бактерии группы кишечной палочки,
Bacillus subtilis, Clostridium perfingens). На основании этого можно выявить
возможные причины такого массового обсеменения. Большое количество
почвенных микроорганизмов - вследствие большого скопления людей и редкой
обработке стен от пыли, а БГКП – в результате недостаточной дезинфекции.
4.1 Столовая главного корпуса
ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С. Тургенева»
Результаты окрашивания по Граму
1) Столы
а) с ГРМ-бульона
1 поверхность – микрококки (Micrococcus)
2
поверхность – Гр+ кокки (Enterococcus), Гр- палочки (E.coli)
3
поверхность – Гр- палочки (E.coli),
микрококки (Micrococcus),
вытянутые нити Гр+ палочек (Bacillus subtilis)
4
поверхность
–
парные
и
короткие
(см.Приложение, рис), микрококки (Micrococcus)
цепочки
палочек
5
поверхность -
кокки (Micrococcus) , палочки с закругленными
концами (E.coli)
б) со среды Эндо
1, 2, 4 поверхность – микрококки (Micrococcus)
3
поверхность
–
микрококки
(Micrococcus),
Гр+
попарно
распределяющиеся палочки (Bacillus subtilis)
5 поверхность -
Гр- палочки с закругленными концами (E.coli), Гр+
палочки (Bacillus subtilis), Гр+ кокки (Micrococcus)
2. Стены
1
поверхность – Гр+ диплококки (Enterococcus), Гр- закругленные
палочки (E.coli ), ветвящиеся Гр+ палочки (Bacillus subtilis)
2 поверхность – Гр- палочки (E.coli ), Гр+ спорообразующие палочки
(Bacillus subtilis)
3 поверхность – Гр- тонкие палочки (Proteus), Гр- закругленные толстые
палочки (E.coli )
4 поверхность – Гр+ микрококки (Micrococcus), Гр+ тонкие палочки с
закругленным
концом
(Clostridium
perfingens),
Гр+
ветвящиеся
спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
5 поверхность - Гр+ спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
б) со среды Эндо
1 поверхность – Гр+ спорообразующие палочки (Bacillus subtilis), Гртонкие палочки (Proteus)
2 поверхность – Гр+ спорообразующие палочки (Bacillus subtilis),
микрококки (Micrococcus)
3 поверхность – микрококки (Micrococcus), Гр+ спорообразующие
палочки (Bacillus subtilis)
4 поверхность – Гр+ спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
5 поверхность - микрококки (Micrococcus).
2.
Полы
а) с ГРМ-бульона
1
поверхность – тонкие Гр- палочки
(Proteus), Гр+ палочки
(Clostridium perfingens)
2 поверхность – Гр+ ветвящиеся спорообразующие палочки (Bacillus
subtilis), Гр+ диплококки (Enterococcus)
3 поверхность – Гр+ палочки (Clostridium perfingens), Гр+ ветвящиеся
спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
4 поверхность – Гр+ тонкие палочки с закругленным концом (Clostridium
perfingens) (см. Приложения 2, рисунок 2)
5 поверхность -
микрококки (Micrococcus),
Гр+ тонкие палочки с
закругленным концом (Clostridium perfingens)
б) со среды Эндо
1 поверхность – микрококки (Micrococcus), Гр- закругленные толстые
палочки (E.coli )
2 поверхность – Гр+ кокки (Enterococcus)
3 поверхность – Гр+ тонкие палочки с закругленным концом (Clostridium
perfingens), Гр+ ветвящиеся спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
4 поверхность – Гр+ микрококки (Micrococcus), Гр+ тонкие палочки с
закругленным концом (Clostridium perfingens)
5 поверхность -
микрококки (Micrococcus), Гр+ тонкие палочки с
закругленным концом (Clostridium perfingens)
4.2 Учебная аудитория главного корпуса
ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С. Тургенева»
1.
Полы
1 поверхность – Гр+ ветвящиеся спорообразующие палочки (Bacillus
subtilis), Гр- закругленные толстые палочки (E.coli )
2 поверхность – Гр+ ветвящиеся спорообразующие палочки (Bacillus
subtilis), тонкие Гр- палочки (Proteus) (см. Приложения 2, рисунок 11)
3 поверхность – палочки Гр+ (Bacillus subtilis)
4 поверхность – Гр+ диплококки (Enterococcus), Гр+ ветвящиеся
спорообразующие палочки (Bacillus subtilis) (см. Приложения 2, рисунок 12)
5 поверхность -
Гр+ диплококки (Enterococcus), Гр+ ветвящиеся
спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
б) со среды Эндо
1
поверхность – Гр+ кокки, чаще представленные диплококками
(Enterococcus)
2 поверхность – Гр+ ветвящиеся спорообразующие палочки (Bacillus
subtilis), микрококки (Micrococcus)
3 поверхность – микрококки (Micrococcus), стрептококки (Enterococcus)
4 поверхность – кокки, стрептококки (Enterococcus)
5 поверхность - стрептококки (Enterococcus)
2.
Стены
а) ГРМ-бульон
1
поверхность – грамположительные мелкие кокки (Micrococcus)
2, 4, 5 поверхность – Гр+ ветвящиеся спорообразующие палочки (Bacillus
subtilis), микрококки (Micrococcus)
3 поверхность – микрококки (Micrococcus)
б) со среды Эндо
1 поверхность – микрококки (Micrococcus)
2 поверхность – Гр+ ветвящиеся спорообразующие палочки (Bacillus
subtilis)
3 и 5 поверхность – Гр+ кокки, стрептококки (Enterococcus)
4 поверхность – стрептококки (Enterococcus), Гр- закругленные толстые
палочки (E.coli )
3.
Столы (парты)
а) ГРМ-бульон
1 поверхность – Гр+ диплококки (Enterococcus), Гр+ палочки с
перетяжками посередине (Bacillus subtilis),
2 поверхность – Гр+ палочки в виде нитей, (Bacillus subtilis),
кокки
(Enterococcus), Гр- закругленные толстые палочки (E.coli )
3 и 4 поверхность – нити Гр+
палочек (Bacillus subtilis), Гр+ кокки
(Enterococcus)
5 поверхность -
Гр+ спорообразующие палочки (Bacillus subtilis), Гр-
палочки (E.coli ), Гр+ кокки (Enterococcus)
б) со среды Эндо
1 поверхность – Гр+ ветвящиеся спорообразующие палочки (Bacillus
subtilis), стрептококки (Enterococcus)
2 поверхность – Гр- палочки (E.coli ), Гр+ кокки (Enterococcus), Гртонкие палочки (Proteus)
3 поверхность – Гр+ микрококки, стрептококки (Enterococcus)
4 поверхность – Гр- палочки (E.coli ), Гр+ кокки и стрептококки
(Enterococcus)
5 поверхность -
стрептококки, микрококки (Enterococcus), Гр+ палочки
(Bacillus subtilis), Гр- палочки с закругленными концами (E.coli )
4.3 Коридор в главном корпусе
ФГБОУ ВО «ОГУ имени И.С. Тургенева»
1.
Стены
а) на ГРМ-среде
1 поверхность – мелкие Гр- палочки (E. coli), длинные в виде цепочек
Гр+ палочки (Bacillus subtilis), Гр+ кокки (Enterococcus)
2 поверхность – Гр- палочки (E. coli), Гр+ спорообразующие небольшие
палочки (Clostridium perfingens)
3 поверхность – Гр+ спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
4 поверхность – Гр+ и Гр- палочки (Bacillus subtilis, E. coli)
5 поверхность - Гр+ кокки (Enterococcus)
б) со среды Эндо
1
поверхность
–
кокки
(Enterococcus),
мелкие
изогнутые
Гр+
спорообразующие палочки (Bacillus subtilis), Гр- палочки (E. coli)
1
поверхность – длинные тонкие Гр+ палочки изогнутой формы
(Bacillus subtilis)
поверхность – кокки (Enterococcus), Гр+ длинные палочки (Bacillus
2
subtilis)
4 поверхность – кокки (Enterococcus), Гр- палочки (E. coli)
5 поверхность - длинные Гр+ палочки (Bacillus subtilis)
2.
Подоконники
а) на ГРМ-среде
На
всех
пяти
поверхностях
были
обнаружены
Гр+
длинные,
спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
На 2, 3, 5 поверхностях Гр+ длинные, спорообразующие палочки (Bacillus
subtilis) и Гр- палочки (E. coli)
б) со среды Эндо
1 поверхность – Гр+ кокки (Enterococcus),
2 поверхность – Гр+ палочки (Bacillus subtilis) (см. Приложения 2,
рисунок 13)
3 поверхность – микрококки (Micrococcus), спорообразующие
Гр+
палочки (Bacillus subtilis) (см. Приложения 2, рисунок 14)
4 поверхность – микрококки (Micrococcus)
5 поверхность - спорообразующие Гр+ палочки (Bacillus subtilis), Гр+
стрептококки и кокки (Enterococcus)
3.
Полы
а) на ГРМ-среде
1 поверхность – Гр- палочки (E. coli), Гр+ спорообразующие небольшие
палочки (Clostridium perfingens), тонкие Гр- палочки (Proteus)
2 и 3 поверхность – спорообразующие Гр+ палочки (Bacillus subtilis)
4 поверхность – Гр+ спорообразующие небольшие палочки (Clostridium
perfingens), тонкие Гр- палочки (Proteus)
5 поверхность - Гр+ спорообразующие небольшие палочки (Clostridium
perfingens), Гр- палочки (E. coli)
б) со среды Эндо
1 поверхность – ветвящиеся Гр+ палочки, образующие споры (Bacillus
subtilis)
2 поверхность – Гр+ кокки (Enterococcus), микрококки (Micrococcus)
3 поверхность – микрококки (Micrococcus) , Гр- палочки (E. coli), Гр+
спорообразующие палочки (Bacillus subtilis)
4 поверхность – Гр+ ветвящиеся нити палочек (Bacillus subtilis)
5 поверхность - Гр- палочки (E. coli), Гр+ спорообразующие палочки
(Bacillus subtilis)
Заключение
Выявленная нами условно-патогенная микрофлора на поверхностях в
помещениях свидетельствует о фекальном загрязнении. Отсюда следует, что не
соблюдаются
условия
уборки:
не
часто
используют
моющие
и
дезинфицирующие вещества, не обеззараживают использованный инвентарь,
либо редко (реже 2 раз в день) проводили уборку.
Так, например B.subcillis и С.perfingens – микроорганизмы почвенной
флоры. В больших количествах мы нашли их на подоконниках, то есть было
возможным попадание земли из цветочных горшков или использование
необеззараженного, либо не раздельного инвентаря при уборке.
На столах в столовой в огромном количестве
были
найдены
С.perfingens и БГКП, в частности, E.coli. Эти бактерии при попадании на
пищу могут вызвать эшерихиозы и токсикоинфекции у людей. Наличие такого
количества бактерий говорит об отсутствии влажной уборки столов и подносов,
либо об отсутствии применения соответствующих дезинфицирующих средств.
Обнаружение С.perfingens
на столах, полах и в самом большом
количестве на стенах говорит об оседании пыли на этих объектах.
На столах в аудитории также была найдена Proteus vulgaris , которая
при несоблюдении личной гигиены студентов может вызвать кишечные
инфекции.
Патогенная флора на всех поверхностях в закрытых помещениях ОГУ
отсутствовала,
но,
несмотря
на
это,
количество
условно-патогенных
микроорганизмов было велико. В связи с этим, поверхности в помещениях
нельзя назвать чистыми. В ходе наших исследований было выявлено, что
самым грязным помещением была столовая, хотя теоретически это помещение
должно было быть самым чистым, так как здесь самый большой риск
заражения кишечными инфекциями.
Выводы
1. Был проведен микробиологический анализ смывов с поверхностей в
помещениях главного корпуса ОГУ.
2.
Мы
выделили
значимые
в
инфекционных
заболеваниях
микроорганизмы, обитающие на загрязненных поверхностях: E.coli, Clostridium
perfingens, Enterococcus, Proteus vulgaris, Bacillus subtillis
3. Сравнили результаты санитарно-микробиологических исследований,
полученных в различных помещениях университета.
Мы выявили, что на
столах чаще встречается Bacillus subtillis, на подоконниках - Bacillus subtillis,
E.coli, на стенах - E.coli, Clostridium Perfingens, а на полах - Proteus vulgaris.
4. Мы определили, что E.coli и Enterococcus лучше растут на среде Эндо,
Bacillus subtillis– на ГРМ-бульоне, а Clostridium Perfingens и Proteus vulgaris
хорошо ведут себя на обеих средах.
Список литературы
1.
Борисов,
Л.Б.
Медицинская
микробиология,
вирусология,
иммунология / Л.Б. Борисов. — М.: ООО «Медицинское информационное
агентство», 2016 — 792 с.
2.
Бутенко, Р. Г. Культура изолированных тканей и физиология
морфогенеза растений / Р.Г. Бутенко, М.: Наука, 1964 — 272 с.
3.
Воробьев,
А.А.,
Атлас
по
медицинской
микробиологии,
вирусологии и иммунологии / А. А. Воробьев, А. С. Быков. — М.: Медицинское
информационное агентство, 2003. — 40 c.
4.
Воробьев, А.В. Микробиология / А.В. Воробьев, А.С. Быков, Е.П.
Пашков, А.М. Рыбакова . — М.: Медицина, 2003. — 336 с.
5.
Егоров,
Н.С.
Руководство
к
практическим
занятиям
по
микробиологии: Учеб. пособие / Н.С. Егоров.. — М.: Изд-во МГУ, 1995. — 224
с.
6.
Жарикова,
Г.Г.
Микробиология
продовольственных
товаров.
Санитария и гигиена: учебник для студ. высш. учеб. заведений / Г. Г. Жарикова.
– М.: Издательский центр «Академия», 2005. – 304 с.
7.
Калина, Г.П. Санитарная микробиология /
Г. П. Калина, Г. Н.
Чистович — М., 1969. — 384 с.
8.
Кондакова, Г.В., Санитарная микробиология: текст лекций / Г.В.
Кондакова. – Ярославль: ЯрГУ, 2005. – 84 с.
9.
Корнелаева, Р.П. Санитарная микробиология сырья и продуктов
животного происхождения / Р.П. Корнелаева, П.П. Степаненко, Е.В. Павлова.—
М.: ООО Полиграфсервис, 2006. — 407 с.
10.
Коротяев, А. И., Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология : учебник для мед. вузов / А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. — СПб. :
СпецЛит, 2010.— 760 с.
11.
Корш, Л. Е., Артемова Т. Е. Ускоренные методы санитарно-
бактериологического исследования воды, Л.Е. Корш, Т.Е. Артемова. — М.:
Медицина, 1978. — 271 с.
12.
Красникова, Л.В. Общая и пищевая микробиология / Л.В.
Красникова, П.И. Гунькова – СПб.: ИТМО, 2016. 134 с.
13.
Некрасов, Б. В., Основы общей химии / Б.В. Некрасов. —
М.: Химия, 1973. — 688 с.
14.
Нетрусов, А.И. Практикум по микробиологии: учеб. пособие для
студ. высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук. –
М.: Издательский центр «Академия», 2005. – 608 с.
15.
Нетрусов, А.И. Общая микробиология : учебник для студ. высш.
учеб. заведений / А.И. Нетрусов, И.Б. Котова. – М.: Академия, 2007. – 220 с.
16.
Поздеев, О.К. Медицинская микробиология: учеб. пособие / О.К.
Позднеев. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – 778 с.
17.
Приказ
Минздрава
РФ
«О
совершенствовании
противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации». [приказ от
21.03. 2003 г.] Минздрав РФ, 2003 - 244 с.
18.
Прозоркина, Н. В. Основы микробиологии, вирусологии и
иммунологии: учебное пособие для средних специальных медицинских
учебных заведений / Н.В.Прозоркина, Л.А.Рубашкина — Ростов нД: Феникс,
2002. — 416с.
19.
СанПиН
2.1.3.2630-10
"Санитарно-эпидемиологические
требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность",
2016 - 178 с.
20.
Смирнов А.М. Рост и метаболизм изолированных корней в
стерильной культуре / А.М. Смирнов. — М.: Наука, 1970. — 455 с..
21.
Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии: учебное пособие для
вузов / Е. 3. Теппер, В. К. Шильникова, Г. И. Переверзева. — М.: Дрофа, 2004.
— 256 с.
22.
Филатова, Т. Г., Дифтерия у детей : учеб. пособие для студентов 5–
6-го курсов / Т.Г. Филатова. – Петрозаводск: ПетрГУ, 2012. – 52 с.
23.
Фирсов, Н. Н. , Микробиология: словарь терминов —Н. Н Фирсов
М.: Дрофа, 2006
24.
Хоулт, Дж. Определитель
бактерий
Берджи: справочные
материалы в 2 т/ Дж. Хоулт, Н. Криг, П. Снит, Дж. Стейли, С. Уилльямс – М.:
Мир,1 т, 1997. – 432 с.
25.
567 с.
Шлегель , Г., Общая микробиология / Г. Шлегель – М.: Мир, 1987. –
2
Содержание
ПРИЛОЖЕНИЕ 1……………………………………………………………..
3
Таблица 1………………………………………………………………… 3
Таблица 2………………………………………………………………… 4
Таблица 3………………………………………………………………… 5
Таблица 4………………………………………………………………… 6
Таблица 5………………………………………………………………… 7
Таблица 6………………………………………………………………… 8
Таблица 7………………………………………………………………… 9
ПРИЛОЖЕНИЕ 2……………………………………………………………..
12
Рисунок 1………………………………………………………………… 12
Рисунок 2………………………………………………………………… 12
Рисунок 3………………………………………………………………… 13
Рисунок 4………………………………………………………………… 13
Рисунок 5………………………………………………………………… 14
Рисунок 6………………………………………………………………… 14
Рисунок 7………………………………………………………………… 15
Рисунок 8………………………………………………………………… 15
Рисунок 9………………………………………………………………… 16
Рисунок 10……………………………………………………………….. 16
Рисунок 11……………………………………………………………….. 17
Рисунок 12……………………………………………………………….. 18
Рисунок 13……………………………………………………………….. 19
Рисунок 14……………………………………………………………….. 20
3
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Таблица 1. Культуральные признаки выросших колоний
микробов на ГРМ-среде (смывы в аудитории)
Смывы в с пола
Смывы со столов
Смывы со стен
Форма
неправильная
неправильная, круглая
неправильная
Профиль
изогнутый
плоский, выпуклый
изогнутый
Край
волнистый, ровный
волнистый
волнистый
Размеры
средние
мелкие, средние,
средние
крупные
Поверхность
гладкая
гладкая
гладкая
Оптические
блестящая,
мутная, блестящая
блестящая,
свойства
непрозрачная
непрозрачная
поверхности
Цвет
Структура
грязно-белый,
полупрозначный, серо-
желтоватый
белый
легко снимаемая с
мелкозернистая
агара
Консистенция
слизистая
грязно-белый
Легко снимаемая
с агара
слизистая
слизистая
4
Таблица 2. Культуральные признаки выросших колоний
микробов на ГРМ-среде (смывы в столовой)
Смывы в с пола
Смывы со столов
Смывы со стен
Форма
неправильная
круглые
неправильная, круглая
Профиль
выпуклый
выпуклый
выпуклый
Край
волнистый,
волнистый,
волнистый, изогнутый
изогнутый
изогнутый
Размеры
крупные и средние
средние
крупные и средние
Поверхность
гладкая
гладкая
гладкая
Оптические
непрозрачная
блестящая
непрозрачная
Цвет
грязно-белый
грязно-белый
грязно-белый
Структура
легко снимаемые с
легко снимаемые
легко снимаемые с
агара
с агара
агара
слизистая
слизистая,
слизистая, матовая
свойства
поверхности
Консистенция
матовая
5
Таблица 3. Культуральные признаки выросших колоний
микробов на ГРМ-среде (смывы в коридоре)
Смывы с
Смывы с пола
Смывы со стен
подоконника
Форма
неправильная
круглые
неправильная, круглая
Профиль
выпуклый
выпуклый
выпуклый
Край
волнистый,
волнистый,
волнистый, изогнутый
изогнутый
изогнутый
Размеры
крупные и средние
средние
крупные и средние
Поверхность
гладкая
гладкая
гладкая
Оптические
непрозрачная
блестящая
непрозрачная
Цвет
грязно-белый
грязно-белый
грязно-белый
Структура
легко снимаемые с
легко снимаемые
легко снимаемые с
агара
с агара
агара
слизистая
слизистая,
слизистая, матовая
свойства
поверхности
Консистенция
матовая
6
Таблица 4. Культуральные признаки выросших колоний
микробов на среде Эндо (смывы в аудитории)
Форма
Смывы со столов
Смывы с пола
Смывы со стен
неправильная
круглая,
неправильная
неправильная
Профиль
плоский
выпуклый
выпуклый
Край
гладкий
волнистый
волнистый и ровный
Размеры
крупные и средние
мелкие и
мелкие
крупные
Поверхность
гладкая
гладкая
гладкая
Оптические
непрозрачная
блестящая,
непрозрачная
свойства
мутная
поверхности
Цвет
серовато-белый
прозрачные,
бесцветный
сероватые
Структура
легко снимаемые с
мелкозернистая
однородная
слизистая, сухая
сухая
агара
Консистенция
слизистая, сухая
7
Таблица 5. Культуральные признаки выросших колоний микробов на среде Эндо
(смывы в столовой)
Смывы со столов
Смывы с пола
Смывы со стен
неправильная,
круглые,
неправильная, круглая
круглая
неправильные
Профиль
выпуклый
выпуклый
выпуклый
Край
волнистый,
волнистый,
волнистый и ровный
ровный
ровный
средние, мелкие
средние, крупные
Форма
Размеры
средние, крупные,
мелкие
Поверхность
гладкая
гладкая
гладкая
Оптические
непрозрачная,
блестящая
непрозрачная,
свойства
блестящая
блестящая
поверхности
Цвет
грязно-белый,
грязно-белый,
грязно-белый,
полупрозрачный
полупрозрачный
полупрозрачный,
голубоватый
Структура
Консистенция
легко снимаемые
легко снимаемые
легко снимаемые с
с агара
с агара
агара
слизистая
слизистая,
слизистая, сухая
матовая
8
Таблица 6. Культуральные признаки выросших колоний микробов на среде Эндо
(смывы в коридоре)
Смывы с
Смывы с пола
Смывы со стен
круглые,
неправильная, круглая
подоконника
Форма
неправильная
неправильные
Профиль
выпуклый
выпуклый
выпуклый
Край
волнистый,
волнистый,
волнистый, ровный
изогнутый
ровный
крупные, средние,
средние,
крупные, средние,
мелкие
крупные, мелкие
мелкие
Поверхность
гладкая
гладкая
гладкая
Оптические
непрозрачная
блестящая,
непрозрачная
Размеры
свойства
непрозрачная
поверхности
Цвет
грязно-белый
грязно-белый,
грязно-белый
полупрозрачный
Структура
Консистенция
легко снимаемые с
легко снимаемые
легко снимаемые с
агара
с агара
агара
слизистая
слизистая
слизистая, матовая
9
Таблица 7. Сравнительная таблица микробиологического анализа смывов
Помещение Объект
взятия
смыва
Столовая
Столы
Стены
Полы
Номер
Результат
поверхности Смыв на
Смыв на
объекта
обсемененность
определение
БГКП
1
Micrococcus
Enterococcus,
Micrococcus
2
Enterococcus, E.
Enterococcus
coli
3
Enterococcus, E.
Enterococcus,
coli, Bacillus
Micrococcus,
subtilis
Bacillus subtilis,
E. coli
4
Clostridium
Enterococcus
perfingens,
Enterococcus
5
Enterococcus, E.
Clostridium
coli
perfingens,
Enterococcus, E.
coli, Bacillus
subtilis
1
Enterococcus, E.
Enterococcus,
coli, Bacillus
Bacillus subtilis,
subtilis
Proteus
2
E. coli, Bacillus
Bacillus subtilis,
subtilis
3
Proteus, E. coli
Micrococcus,
Bacillus subtilis
4
Bacillus subtilis,
Bacillus subtilis,
Proteus
5
Clostridium
Micrococcus
perfingens,
Bacillus subtilis
1
Bacillus subtilis,
Micrococcus, E.
Proteus
coli
2
Clostridium
Enterococcus,
perfingens,
Enterococcus
3
Clostridium
Clostridium
perfingens,
perfingens,
Bacillus subtilis
Bacillus subtilis
4
Clostridium
Micrococcus,
10
perfingens
5
Полы
1
Аудитория
2
3
4
Стены
5
1
2
3
4
5
Столы
1
2
3
4
5
Коридор
Стены
1
2
3
4
Micrococcus,
Clostridium
perfingens
E. coli, Bacillus
subtilis
Bacillus subtilis,
Proteus
Bacillus subtilis,
Bacillus subtilis,
Enterococcus
Enterococcus
Micrococcus
Micrococcus,
Bacillus subtilis
Micrococcus
Micrococcus,
Bacillus subtilis
Micrococcus,
Bacillus subtilis
Bacillus subtilis,
Enterococcus
Bacillus subtilis,
Enterococcus, E.
coli,
Bacillus subtilis,
Enterococcus
Bacillus subtilis,
Enterococcus
Bacillus subtilis,
Enterococcus, E.
coli,
E. coli, Bacillus
subtilis,
Enterococcus
E. coli,
Clostridium
perfingens
Bacillus subtilis
Clostridium
perfingens
Micrococcus,
Clostridium
perfingens
Enterococcus
E. coli, Bacillus
subtilis
Enterococcus,
Micrococcus
Enterococcus
Enterococcus
Micrococcus
Bacillus subtilis
Enterococcus
Enterococcus, E.
coli
Enterococcus
Bacillus subtilis,
Enterococcus
E. coli,
Enterococcus,
Proteus
Enterococcus
Enterococcus, E.
coli
E. coli, Bacillus
subtilis,
Enterococcus
Enterococcus,
Bacillus subtilis,
E. coli
Bacillus subtilis
Bacillus subtilis,
Enterococcus
Bacillus subtilis, E. Enterococcus, E.
11
coli
Bacillus subtilis
Enterococcus
Bacillus subtilis
2
coli
Enterococcus
Bacillus subtilis
Bacillus subtilis, E.
coli
Bacillus subtilis, E.
coli
Bacillus subtilis
Bacillus subtilis, E.
coli
E. coli,
Clostridium
perfingens,
Proteus
Bacillus subtilis
3
Bacillus subtilis
4
Micrococcus, E.
coli, Bacillus
subtilis
Bacillus subtilis
Clostridium
perfingens,
Proteus
Clostridium
Bacillus subtilis ,
perfingens , E. coli E. coli
5
Подоконники 1
2
3
4
5
Полы
1
5
Micrococcus,
Bacillus subtilis
Micrococcus
Bacillus subtilis,
Enterococcus
Bacillus subtilis
Enterococcus,
Micrococcus
12
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
Рисунок 1. Приготовление питательных сред
Рисунок 2. Посев на питательные среды
13
Рисунок 3. Фиксация микробов в пламени спиртовки
Рисунок 4. Зафиксированные микробы
14
Рисунок 5 Культура микроорганизмов, выращенных на ГРМ-среде
Рисунок 6. Культура со смывом с полов на БГКП на среде Эндо. Четвертая
поверхность, столовая
15
Рисунок 7. Культура со смывом со стен на БГКП на среде Эндо. Третья
поверхность, учебная аудитория.
Рисунок 8. Культура со смывом с пола на БГКП на среде Эндо. Пятая
поверхность, коридор
16
Рисунок 9. Культура со смывом с подоконника на БГКП на среде Эндо.
Вторая поверхность, коридор
Рисунок 10. Микроскопирование
17
Рисунок 11. Смыв с пола на микробную обсемененность. Вторая
поверхность, учебная аудитория. Окраска по Граму
18
Рисунок 12. Смыв с пола на микробную обсемененность. Четвертая поверхность,
учебная аудитория. Окраска по Граму
19
Рисунок 13. Смыв с подоконника на наличие БГКП. Вторая поверхность, коридор.
Окраска по Граму.
20
Рисунок 14. Смыв с подоконника на наличие БГКП. Третья поверхность, коридор.
Окраска по Граму.
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа